BD، 557908، مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية للفئران من BD Pharmingen™، مع عناصر تحكم من النمط المتساوي PE-Cy™7 CD25 وPE CD69 وAPC CD3e

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_396932
الوصف: مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران هو كاشف ثلاثي الألوان مصمم لتحديد الخلايا اللمفاوية التائية المنشطة عن طريق التلوين المناعي الفلوري المباشر مع تحليل التدفق الخلوي. يتكون هذا المزيج من الأجسام المضادة التالية: PE-Cy7 مضاد CD25 للفئران (النسيلة PC61)، وPE مضاد CD69 للفئران (النسيلة H1.2F3)، وAPC مضاد CD3e للفئران (النسيلة 145-2C11). يتفاعل الجسم المضاد PC61 مع CD25، وهو سلسلة مستقبل IL-2 منخفضة الألفة (IL-2Rα، p55) الموجودة على الخلايا اللمفاوية التائية والبائية المنشطة من جميع سلالات الفئران المختبرة. يوجد CD25 أيضًا على بعض الخلايا البائية النامية في نخاع العظم، والخلايا التائية النامية مبكرًا في الغدة الزعترية، والخلايا التائية التنظيمية CD4+ الطرفية (Treg)، والخلايا المتغصنة. يتفاعل الجسم المضاد H1.2F3 مع CD69 (مستضد التنشيط المبكر جدًا). ​​ويُحفز التعبير عنه بسرعة عند تنشيط الخلايا اللمفاوية (الخلايا التائية، والخلايا البائية، والخلايا القاتلة الطبيعية، والخلايا القاتلة الطبيعية التائية)، والعدلات، والبلعميات. كما يُعبر عن CD69 على الخلايا التيموسية التي تخضع للاختيار الإيجابي. يتفاعل الجسم المضاد 145-2C11 مع السلسلة 25 كيلو دالتون من معقد CD3 المرتبط بمستقبلات الخلايا التائية، والذي يُعبر عنه على الخلايا التيموسية، والخلايا اللمفاوية التائية الناضجة، والخلايا القاتلة الطبيعية التائية لجميع سلالات الفئران المختبرة. تم معايرة الأجسام المضادة الثلاثة وتخفيفها مسبقًا، ثم خلطها معًا، وتركيبها لتحقيق أفضل أداء في التلوين. يحتوي عنصر التحكم النظيري لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران على تراكيز مكافئة من الغلوبولينات المناعية للتحكم السلبي المتطابقة مع الفلوركروم والنظير. يُتيح استخدام ثلاثة أنواع مختلفة من الفلوركرومات لوسم الأجسام المضادة الثلاثة التعرف على كل مستضد من المستضدات الثلاثة على كل خلية في العينة. ويُشير التعبير عن هذه المستضدات الثلاثة إلى الخلايا اللمفاوية التائية المُنشَّطة. ويمكن دمج كواشف إضافية موسومة بالفلوركروم مع مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران، ومع عنصر التحكم النظيري لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران، وذلك لمزيد من توصيف المجموعات الفرعية للخلايا التائية المُنشَّطة. يحتوي عنصر التحكم النظيري لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران على تراكيز متساوية من الغلوبولين المناعي للتحكم السلبي المتطابق مع الفلوركروم والنظير، ويتكون من: PE-Cy™7 IgG1، λ (النسيلة A110-1) للفئران، وPE IgG1، λ (النسيلة G235-2356) للهامستر الأرمني، وAPC IgG1، κ (النسيلة A19-3) للهامستر الأرمني.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ PE-Cy7 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE-Cy7 الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ APC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وAPC الحر.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى الرجوع إلى صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي اقتران فلوري مزدوج. لذا، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بها، لإضاءة الغرفة. يُعدّ PE-Cy7 فلوروكرومًا مزدوجًا يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يُثار بضوء طوله الموجي 488 نانومتر ويعمل كمانح للطاقة، مقترنًا بصبغة السيانين Cy7، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتُصدر فلورة قصوى عند 780 نانومتر. يُجمع انبعاث الفلوركروم المزدوج PE-Cy7 في كاشف لأطوال موجات الفلورة 750 نانومتر وما فوق. على الرغم من بذل قصارى الجهد لتقليل التباين بين الدفعات في كفاءة نقل طاقة الفلوركروم، فقد تُلاحظ اختلافات في الانبعاث المتبقي من PE. لذلك، نوصي بإجراء فحوصات تعويض فردية لكل مُقترن PE-Cy7. تم تحسين PE-Cy7 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر، ولا يوجد تداخل يُذكر بين أطياف انبعاث PE-Cy7 وFITC. عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، التي قد تُثير كلاً من PE وCy7 مباشرةً، نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. يمكن استخدام هذا الكاشف المُقترن بـ APC في أي جهاز قياس تدفق خلوي مُجهز بليزر صبغة أو ليزر هيليوم-نيون أو ليزر ثنائي أحمر. تحذير: تُظهر بعض مُقترنات APC-Cy7 وPE-Cy7 تغيرات في طيف انبعاثها مع التعرض المُطوّل للفورمالديهايد. إذا لم تتمكن من تحليل العينات المُثبتة خلال أربع ساعات، نوصي باستخدام مُثبت BD™ Stabilizing Fixative (رقم المنتج 338036). Cy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر