BD، 558576، BD Pharmingen™ FITC Mouse anti-Cleaved PARP (Asp214)

الاسم البديل: Asp214
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
المستضد: PARP البشري المشقوق
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 20 ميكرولتر
RRID: AB_647179
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل.
إجراءات التحليل الموصى بها: يُعد الكامبتوثيسين (مستخلص من شجرة الكامبتوثيكا أكيوميناتا الصينية) مثبطًا قويًا لإنزيم توبويزوميراز 1، وهو جزيء ضروري لتخليق الحمض النووي. وقد ثبت أن الكامبتوثيسين يحفز موت الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على الجرعة في المختبر. يُستخدم الكامبتوثيسين في شركة BD Biosciences Pharmingen كطريقة عامة لتحفيز موت الخلايا المبرمج. المواد: • محلول مخزون من الكامبتوثيسين بتركيز 1.0 ملي مولار (سيجما؛ رقم المنتج C-9911) في ثنائي ميثيل سلفوكسيد. • خط خلايا جركات (ATCC TIB-152)، في طور التكاثر، بتركيز 1 × 10^6 خلية/مل تقريبًا. • إما مجموعة تثبيت/نفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج 554714) أو محلول BD Cytofix/Cytoperm™ (رقم المنتج 554722) بالإضافة إلى محلول BD Perm/Wash™ (رقم المنتج 554723). الخطوات: 1. أضف كامبتوثيسين (بتركيز نهائي 4-6 ميكرومولار) لكل 1 × 10^6 خلية جركات متكاثرة. إذا رغبت، حضّر عينة ضابطة من الخلايا غير المعالجة. 2. حضّن الخلايا لمدة 4-6 ساعات عند 37 درجة مئوية. 3. اغسل الخلايا (المعالجة بالكامبتوثيسين والعينة الضابطة) مرتين بمحلول فوسفات بارد؛ ثم أعد تعليقها في محلول BD Cytofix/Cytoperm™ بتركيز 2 × 10^6 خلية/مل. 4. حضّن الخلايا لمدة 20 دقيقة على الجليد. ٥. قم بترسيب الخلايا، ثم اسحب محلول BD Cytofix/Cytoperm™ وتخلص منه. ٦. اغسل الخلايا مرتين في درجة حرارة الغرفة باستخدام ٠.٥ مل من محلول BD Perm/Wash™ لكل ١ × ١٠^٦ خلية، ثم قم بالطرد المركزي وتخلص من السائل الطافي. ٧. أعد تعليق الخلايا في محلول BD Perm/Wash™ بتركيز ١٠ × ١٠^٦ خلية/مل. ٨. قسّم عينات الاختبار إلى أجزاء متساوية، بحيث يكون حجم كل جزء ١ × ١٠^٦ خلية لكل ١٠٠ ميكرولتر. ٩. أضف ٢٠ ميكرولتر من الجسم المضاد لكل اختبار، واحضن العينات لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. ١٠. اغسل كل عينة اختبار في ١.٠ مل من محلول BD Perm/Wash™، ثم قم بالطرد المركزي وتخلص من السائل الطافي. ١١. أعد تعليق كل عينة اختبار في ٠.٥ مل من محلول BD Perm/Wash™، ثم حللها باستخدام تقنية قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.