BD، 560098، مجموعة BD Pharmingen™ Human FoxP3 Buffer

الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869302
الوصف: تم تحسين مجموعة محلول التخزين المؤقت لبروتين FoxP3 البشري (رقم المنتج 560098) للاستخدام مع الجسم المضاد أحادي النسيلة FoxP3 من السلالة 259D/C7. وهي مخصصة لتثبيت ونفاذية الخلايا الليمفاوية أحادية النواة في الدم المحيطي أو الدم الكامل المحلل لتلوين بروتين FoxP3 البشري داخل الخلايا وتلوين علامات CD المناسبة على سطحها.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: تحضير المحاليل المنظمة قبل الاستخدام (يجب تحضير محاليل العمل الخاصة بمحلولي FoxP3 البشري A وC طازجة لكل مجموعة تجريبية) 1. خفف محلول FoxP3 A (تركيز 10X) بنسبة 1:10 باستخدام ماء منزوع الأيونات بدرجة حرارة الغرفة (20 إلى 25 درجة مئوية). 2. لتحضير محلول عمل من المحلول C، خفف محلول FoxP3 B (تركيز 50X) في محلول FoxP3 A بتركيز 1X بنسبة 1:50 (محلول B:محلول A). تحضير الخلايا وإجراءات التلوين للأجسام المضادة النقية المضادة لـ FoxP3 البشري 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل لمجموعة محاليل FoxP3 البشرية (رقم المنتج 560098) كما هو موضح في القسم أعلاه (تحضير المحاليل المنظمة قبل الاستخدام). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). احسب عدد الخلايا المطلوبة لكل اختبار. يُوصى باستخدام ما يقارب 1.2 × 10^6 خلية أحادية النواة من الدم المحيطي (PBMC) لكل اختبار. 3. ثبّت الخلايا بكميات كبيرة أو بحجم الاختبار، باستخدام 2 مل من محلول العمل 1X Human FoxP3 Buffer A لكل اختبار، واحضنها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. ملاحظة: يمكن تجميد خلايا PBMC المثبتة بكميات كبيرة عند -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى 24 ساعة قبل الانتقال إلى الخطوة 4. 4. اغسل الخلايا بـ 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)* لكل اختبار. قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. 5. لزيادة نفاذية الخلايا بكميات كبيرة أو بحجم الاختبار، أضف 0.5 مل من محلول العمل 1X Human FoxP3 Buffer C لكل اختبار، واحضنها لمدة 30 دقيقة، مع حمايتها من الضوء. 6. أضف 2 مل إضافية من محلول التلوين (FBS)* لكل اختبار. قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. ٧. أعد تعليق الخلايا في محلول التلوين (FBS)* إلى تركيز 1 × 10^7 خلية/مل تقريبًا، ثم قسّم 100 ميكرولتر من معلق الخلايا إلى أنابيب قياس 12 × 75 مم. ٨. أضف 20 ميكرولتر من الجسم المضاد أحادي النسيلة FoxP3 البشري النقي بتركيزات مناسبة لكل أنبوب. رجّ الأنابيب برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. حضّن الأنابيب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. ٩. اغسل الخلايا مرتين بإضافة 2 مل من محلول التلوين (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل محلول الغسل. ١٠. أضف الجسم المضاد الثانوي (APC Rat Anti-Mouse IgG1، رقم المنتج 550874) بالتركيز المناسب. حضّن الأنابيب لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. ١١. كرر عملية الغسل كما في الخطوة السابقة. 9. 12. قم بحجب الخلايا الثانوية باستخدام مصل الفأر الطبيعي بنسبة 1:10 في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X، 100 ميكرولتر لكل اختبار. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 13. أضف أحجام الاختبار من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة لسطح الخلايا البشرية، وحضّن لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. 14. أضف 2 مل من محلول التلوين (FBS)* إلى كل أنبوب، وقم بالطرد المركزي بسرعة 500 × g لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، ثم أزل محلول الغسل. 15. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل، وحللها فورًا. احصل على ما لا يقل عن 15000 إلى 25000 خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4. اختياري: أضف 300 ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز 1% في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X، وخزّن عند 4 درجات مئوية. حلل الخلايا في غضون 24 ساعة. إجراء تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الجسم المضاد المُقترن المضاد لـ FoxP3 البشري: 1. اترك المحاليل لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل لمجموعة محاليل FoxP3 البشرية (رقم المنتج 560098) كما هو موضح في القسم أعلاه (تحضير المحاليل قبل الاستخدام). 2. حضّر خلايا الدم المحيطية أحادية النواة البشرية (PBMC). خفّف الخلايا باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) إلى تركيز 1 × 10⁷ خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف تلوين السطح في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا لكل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايتها من الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول التلوين (FBS)* للغسل. افصل الخلايا بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. ٦. لتثبيت الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف ٢ مل من محلول FoxP3 البشري A بتركيز ١X. رجّ جيداً. حضّن لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة، مع حمايته من الضوء. ٧. افصل بالطرد المركزي عند ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: الراسب طافٍ. ٨. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل راسب في ٢ مل من محلول التلوين (FBS)*، ثم افصل بالطرد المركزي عند ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. أزل محلول الغسل. ٩. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليق الراسب برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف ٠.٥ مل من محلول FoxP3 البشري C بتركيز ١X إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة، مع حمايته من الضوء. ١٠. لغسل الخلايا، أضف ٢ مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة ٥٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. أزل المحلول مرة أخرى. ١١. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الراسب. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. ١٢. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. ١٣. كرر الغسل كما في الخطوة ١٠. ١٤. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. احصل على ما لا يقل عن ١٥٠٠٠ إلى ٢٥٠٠٠ خلية ليمفاوية موجبة لـ CD4. اختياري: أضف ٣٠٠ ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز ١٪ في محلول ملحي فوسفاتي ١x، وخزّن عند ٤ درجات مئوية. حلل الخلايا في غضون ٢٤ ساعة. يُوصى باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) للتلوين السطحي الأولي وجميع خطوات الغسل، مع تغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء بارافين أثناء مراحل الحضانة. كما يُوصى بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام وبقايا خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية قبل التحليل. تحذيرات واحتياطات: خطر: يحتوي محلول التلوين البشري FoxP3 A (10X) (المكون 51-9005451) على 31.05% من ثنائي إيثيلين جليكول (وزن/وزن)، و10.08% من الفورمالديهايد (وزن/وزن)، و3.54% من الميثانول (وزن/وزن). بيانات المخاطر: ضار عند البلع. ضار بالحياة المائية. سام عند ملامسته للجلد أو استنشاقه. يُسبب تهيج الجلد. قد يُسبب رد فعل تحسسي جلدي. يُسبب تلفًا خطيرًا للعين. يُشتبه في تسببه في عيوب وراثية. قد يسبب السرطان. طريقة التعرض: استنشاق. قد يسبب تلفًا للأعضاء. قد يسبب تهيجًا في الجهاز التنفسي. قد يسبب تلفًا للكلى عند التعرض لفترات طويلة أو متكررة. طريقة التعرض: عن طريق الفم. احتياطات السلامة: ارتدِ ملابس واقية/واقي للوجه. ارتدِ قفازات واقية. في حالة الابتلاع: اشطف الفم. لا تحاول التقيؤ. اتصل بمركز السموم/الطبيب إذا شعرت بتوعك. في حالة ملامسة الجلد (أو الشعر): انزع جميع الملابس الملوثة فورًا. اشطف الجلد بالماء [أو استحم]. اغسل الملابس الملوثة قبل إعادة استخدامها. اتصل بمركز السموم/الطبيب فورًا. في حالة حدوث تهيج للجلد: استشر طبيبًا. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت ويسهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق وأبقِه في وضع مريح للتنفس. في حالة التعرض أو القلق: استشر طبيبًا. يُحفظ في مكان مغلق. تخلص من المحتويات/العبوة في منشأة معالجة وتخلص مناسبة وفقًا للقوانين واللوائح المعمول بها، وخصائص المنتج وقت التخلص. يحتوي مُخفف FoxP3 البشري B (المكون 51-9005450) على ≤ 0.09% من أزيد الصوديوم.
تنبيهات المنتج: تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر