BD، 560133، مجموعة تلوين BD Pharmingen™ FoxP3 - PE FoxP3، CD4، CD25

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869309
الوصف: توفر مجموعة تلوين FoxP3 - PE، FoxP3، CD4، CD25 محاليل تثبيت الخلايا ونفاذيتها، بالإضافة إلى أجسام مضادة فلورية ترتبط على وجه التحديد ببروتينات FoxP3 وCD4 وCD25 البشرية. تُمكّن هذه المجموعة من تلوين الخلايا البشرية بألوان متعددة وتحليلها باستخدام قياس التدفق الخلوي، وذلك لتحديد أنماط التعبير عن CD4 وCD25 على سطح الخلية، والتعبير عن FoxP3 داخلها. تتضمن المجموعة جسمًا مضادًا من نوع PE Mouse anti-Human FoxP3 (رقم المنتج 560046) يرتبط على وجه التحديد بجميع الأشكال المتغايرة المعروفة حاليًا لعامل النسخ FoxP3 البشري، وهو أحد أفراد عائلة عوامل النسخ ذات رأس الشوكة أو الحلزون المجنح. وقد وُجد أن التعبير عن FoxP3، المعروف أيضًا باسم Scurfin وIPEX وJM2، مرتبط بالخلايا التائية التنظيمية CD4+، ويمثل علامة مميزة لهذه الخلايا. أظهر تحليل التدفق الخلوي أن بروتين FoxP3 يُعبَّر عنه في غالبية الخلايا التائية CD4+CD25+high في الدم المحيطي، بينما أقل من نصف خلايا CD4+CD25int تُعبِّر عن FoxP3. وتُشكِّل الخلايا التائية التنظيمية CD4+CD25+ ما يقارب 5-10% من خلايا CD4+ المحيطية. ويُعتقد أن للخلايا التائية التنظيمية دورًا حاسمًا في السيطرة على المناعة الذاتية التي تتوسطها الخلايا التائية، وذلك عن طريق تثبيط تكاثر الخلايا التائية الأخرى وإنتاج السيتوكينات. ولدعم هذه الفرضية، وُجد أن جين Foxp3 مُتحوِّر في فئران scurfy (sf).
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات تحضير الخلايا وتلوينها باستخدام الأجسام المضادة المُقترنة لبروتين FoxP3 البشري 1. اترك المحاليل المنظمة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. حضّر محاليل العمل من مجموعة محاليل BD Pharmingen™ Human FoxP3 Buffer Set رقم 560098 (للحصول على تفاصيل حول تحضير المحلول المنظم، يُرجى مراجعة تعليمات المحلول المنظم رقم 560098 في النشرة الداخلية). 2. حضّر معلقًا من خلايا الدم أحادية النواة الطرفية البشرية. علّق الخلايا في محلول التلوين BD Pharmingen Stain Buffer (FBS) (رقم 554656)* حتى يصل تركيزها إلى عشرة ملايين خلية/مل. 3. ضع كمية مناسبة من كاشف التلوين السطحي في قاع كل أنبوب (12 × 75 مم). 4. أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل أنبوب، ثم رجّها جيدًا، واحضنها لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 5. أضف 2 مل من محلول الغسل. 1. قم بالطرد المركزي عند 250 غرام لمدة 10 دقائق، ثم أزل محلول الغسل. 2. لتثبيت الخلايا، أعد تعليقها برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 2 مل من محلول FoxP3 البشري A بتركيز 1x. رجّ جيداً. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. 3. قم بالطرد المركزي عند 500 غرام لمدة 5 دقائق، ثم أزل المُثبِّت. تنبيه: انتبه إلى أن الخلايا طافية. 4. لغسل الخلايا، أعد تعليق كل خلية في 2 مل من محلول BD Pharmingen Stain Buffer (FBS)*، ثم قم بالطرد المركزي عند 500 غرام لمدة 5 دقائق. أزل محلول الغسل. 5. لزيادة نفاذية الخلايا، أعد تعليقها برفق في الحجم المتبقي من محلول الغسل، ثم أضف 0.5 مل من محلول FoxP3 البشري C بتركيز 1x إلى كل أنبوب. رجّ جيداً. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. 10. لغسل الخلايا، أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen (FBS)* إلى كل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 500 غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أزل المحلول وكرر خطوة الغسل. أزل المحلول مرة أخرى. 11. أضف الجسم المضاد FoxP3 المقترن بتركيزات مناسبة لإعادة تعليق الخلايا. رجّ برفق أو استخدم جهاز الخلط الدوامي. 12. حضّن لمدة 30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. 13. كرر خطوة الغسل رقم 10. 14. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل وحللها فورًا. اختياري: أضف 300 ميكرولتر من الفورمالديهايد بتركيز 1% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) بتركيز 1x، وخزّن عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. حلل الخلايا في غضون ساعتين. * يُوصى باستخدام محلول التلوين BD Pharmingen (FBS؛ رقم المنتج 554656) لجميع خطوات الغسل، وتغطية الأنابيب بأغطية أو غشاء Parafilm® أثناء خطوات الحضانة. كما نوصي بضبط جهد التشتت الأمامي والجانبي لتصوير الخلايا الليمفاوية بشكل منفصل عن الحطام، وبقايا خلايا الدم الحمراء، و/أو الصفائح الدموية قبل التصوير. ** يجب تصوير ما لا يقل عن 15000 إلى 25000 خلية ليمفاوية موجبة CD4.
إشعارات المنتج: يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.