BD، 561651، محلول نفاذية BD Cytoperm™ بلس

التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. مُهيّج للعينين والجلد. تجنب استنشاق الأبخرة. في حالة ملامسة العينين، اشطفهما فورًا بكمية كبيرة من الماء واستشر الطبيب. ارتدِ ملابس واقية مناسبة.
إجراءات التحليل الموصى بها: تم تصميم محلول BD Cytoperm™ Permeabilization Buffer Plus خصيصًا للتلوين المناعي الفلوري لـ BrdU المدمج لتحليل التدفق الخلوي، ويمكن العثور عليه في مجموعة BD Pharmingen™ FITC BrdU Flow Kit (رقم المنتج 559619 / 557891) أو مجموعة BD Pharmingen™ APC BrdU Flow Kit (رقم المنتج 552598 / 557892). قد يجد الباحثون البروتوكول المختصر التالي مفيدًا. 1. التلوين المناعي الفلوري لمستضدات سطح الخلية. أ. أضف الخلايا المحفزة بـ BrdU (10^6 خلية في 50 ميكرولتر من محلول التلوين) إلى أنابيب قياس التدفق الخلوي. ب. أضف الأجسام المضادة الفلورية النوعية لعلامات سطح الخلية في 50 ميكرولتر من محلول التلوين (مثل محلول التلوين BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) رقم المنتج 554656) لكل أنبوب، واخلط جيدًا. ج. حضّن الخلايا مع الأجسام المضادة لمدة 15 دقيقة على الجليد. د. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول التلوين لكل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي (لمدة 5 دقائق) عند 200-300 × g، وتخلص من السائل الطافي. 2. ثبّت الخلايا واجعلها نفاذة باستخدام محلول BD Cytofix/Cytoperm Buffer. أ. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول BD Cytofix/Cytoperm Buffer لكل أنبوب. ب. حضّن الخلايا لمدة 15-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو على الجليد. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1x، ثم قم بالطرد المركزي كما في الخطوة 1د، وتخلص من السائل الطافي. 3. حضّن الخلايا باستخدام محلول BD Cytoperm™ Permeabilization Buffer Plus. أ. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول BD Cytoperm™ Permeabilization Buffer Plus لكل أنبوب. ب. حضّن الخلايا لمدة 10 دقائق على الجليد. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1x (كما في الخطوة 2ج). 4. إعادة تثبيت الخلايا أ. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول BD Cytofix/Cytoperm Buffer لكل أنبوب. ب. حضّن الخلايا لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة أو على الجليد. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1x (كما في الخطوة 2ج). 5. معالجة الخلايا بإنزيم DNase لكشف BrdU المدمج. أ. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من إنزيم DNase المخفف (مخفف إلى 300 ميكروغرام/مل في محلول DPBS) لكل أنبوب (أي 30 ميكروغرام من إنزيم DNase لكل أنبوب). ب. حضّن الخلايا لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1x (كما في الخطوة 2ج). 6. صبغ BrdU والمستضدات داخل الخلايا بالأجسام المضادة الفلورية. أ. أعد تعليق الخلايا في 50 ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash Buffer الذي يحتوي على أجسام مضادة فلورية مخففة لـ BrdU و/أو أجسام مضادة خاصة بالمستضدات داخل الخلايا. ب. حضّن الخلايا لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1x (كما في الخطوة 2ج). 7. اختياري - تلوين الحمض النووي الكلي لتحليل دورة الخلية. ملاحظة: انتقل إلى الخطوة 8 إذا لم تكن ترغب في تلوين الحمض النووي الكلي. أ. أعد تعليق الخلايا في 20 ميكرولتر من محلول 7-AAD (رقم المنتج 559925). 8. إعادة تعليق الخلايا لتحليل التدفق الخلوي. أ. أضف 1 مل من محلول التلوين إلى كل أنبوب لإعادة تعليق الخلايا. ب. حلل الخلايا الملونة باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي (بمعدل لا يزيد عن 400 حدث/ثانية) واحصل على ملفات بيانات متعددة المعايير. ملاحظة: يمكن تخزين العينات طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، مع حمايتها من الضوء، قبل تحليلها بواسطة قياس التدفق الخلوي.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. Cy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.