BD، 562253، مجموعة BD Pharmingen™ للكشف عن موت الخلايا المبرمج، وتلف الحمض النووي، وتكاثر الخلايا

التطبيق: قياس التدفق الخلوي، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (تم اختباره أثناء التطوير)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869407
الوصف: محتويات المجموعة وصف المكونات المادة رقم الحجم قوارير التخزين الجزء أ من المجموعة PerCP-Cy5.5 جسم مضاد للفأر مضاد لـ BrdU 51-9007682 50 اختبار 4 درجات مئوية 1 Alexa Fluor™ 647 جسم مضاد للفأر مضاد لـ H2AX (pS139) 51-9007683 50 اختبار 4 درجات مئوية 1 PE جسم مضاد للفأر مضاد لـ PARP المنشطر (Asp214) 51-9007684 50 اختبار 4 درجات مئوية 1 محلول تثبيت/نفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ 51-2090KE 25 مل 4 درجات مئوية 1 محلول BD Perm/Wash™ (10X) 51-2091KE 25 مل 4 درجات مئوية 2 محلول نفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ Plus 51-2356KC 10 مل 4°م 1 DAPI 51-9007681 100 ميكرولتر 4°م 1 مجموعة الجزء ب BrdU (10 ملغم/مل) 51-2420KC 5 ملغم -80°م 5 DNase 51-2358KC 300 ميكرولتر -80°م 5 مجموعة موت الخلايا المبرمج، وتلف الحمض النووي، وتكاثر الخلايا. يوفر قياس التدفق الخلوي متعدد المعايير أداة فعالة لتحديد الآليات التي تحافظ بها الخلايا الفردية في مجموعات الخلايا المتجانسة أو المختلطة على حيويتها، وتدخل دورة الخلية وتتقدم خلالها، أو تخضع لموت الخلية. لهذا الغرض، تم تصميم مجموعة موت الخلايا المبرمج، وتلف الحمض النووي، وتكاثر الخلايا مع تضمين أجسام مضادة فلورية خاصة بـ BrdU المدمج، وH2AX ​​المفسفر (γH2AX)، وPARP المشقوق. تُمكّن هذه المجسات، إلى جانب البروتوكولات المُحسّنة، من إجراء تحليل التدفق الخلوي متعدد الألوان لتكاثر الخلايا، وتلف الحمض النووي، وموت الخلايا المبرمج، على التوالي، على مستوى الخلايا الفردية داخل العينات. يوفر التلوين المناعي الفلوري للخلايا التي دمجت بروموديوكسي يوريدين (BrdU، وهو نظير للثيميدين، وهو طليعة الحمض النووي) وتحليل التدفق الخلوي تقنية عالية الدقة لتحديد تردد وطبيعة الخلايا الفردية التي قامت بتخليق الحمض النووي. يسمح تعريض الخلايا لـ BrdU في أنظمة النماذج التجريبية المختبرية أو الحية بدمج BrdU بواسطة أجزاء الخلايا النشطة في دورة الخلية. يسمح وسم الخلايا بنبضات BrdU في نقاط زمنية مختلفة بتحديد حركية دورة الخلية. يمكن بسهولة دمج تحليل التدفق الخلوي لدمج BrdU مع التحليل المتزامن لمستويات H2AX المُفسفر وPARP المُنشطر في الخلايا. يعمل H2AX المُفسفر على استقطاب وتحديد موقع بروتينات إصلاح الحمض النووي أو عوامل نقاط التفتيش في دورة الخلية في مواقع تلف الحمض النووي. بهذه الطريقة، يُعزز H2AX المُفسفر إصلاح الحمض النووي ويحافظ على استقرار الجينوم. تؤدي كسور الحمض النووي المزدوجة الناتجة عن أخطاء التضاعف، أو موت الخلايا المبرمج، أو عمليات فيزيولوجية أخرى (بما في ذلك إعادة تركيب جينات الغلوبولين المناعي ومستقبلات الخلايا التائية)، وتلف الحمض النووي الناتج عن الإشعاع المؤين، أو الأشعة فوق البنفسجية، أو العوامل السامة للخلايا، إلى فسفرة H2AX على السيرين 139، أي H2AX (pS139)، لتحفيز وظيفته. يُعد PARP (بوليميراز بولي [ADP-ريبوز]) إنزيمًا نوويًا مرتبطًا بالكروماتين، ويشارك في إصلاح الحمض النووي. أثناء موت الخلايا المبرمج، يقوم كاسبيز-3 بقطع PARP، مما يؤدي إلى تعطيله وعدم قدرة الخلايا على إصلاح تلف الحمض النووي. لهذا السبب، يُعد الجزء المقطوع من PARP بوزن 89 كيلو دالتون مؤشرًا على موت الخلايا المبرمج.
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة PerCP-Cy5.5 في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وصبغة PerCP-Cy5.5 الحرة. لا يُنصح بتخزين مركبات PerCP-Cy5.5 في مخفف غير مُحسَّن، فقد يؤدي ذلك إلى فقدان شدة الإشارة. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الصبغة غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: كواشف مجموعة إجراءات الفحص الموصى بها: تُزوَّد بعض كواشف المجموعة على شكل محاليل مركزة، ويجب تخفيفها إما بالماء منزوع الأيونات، أو محلول دولبيكو الفوسفاتي المخفف (DPBS) بتركيز 1X، أو بمحلول BD Perm/Wash Buffer. فيما يلي تعليمات التعامل مع مكونات المجموعة وتحضيرها وتخزينها: جسم مضاد PerCP-Cy5.5 للفأر المضاد لـ BrdU. تحتوي هذه القارورة على 250 ميكرولتر من المحلول المركز للجسم المضاد PerCP-Cy5.5 المضاد لـ BrdU، وهو ما يكفي لتلوين 50 عينة (10^6 خلية/عينة). يجب تخزين هذا الجسم المضاد الفلوري في مكان مظلم عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. أضف 5 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد المركز إلى العينة. جسم مضاد Alexa Fluor™ 647 للفأر المضاد لـ H2AX (pS139). تحتوي هذه القارورة على 250 ميكرولتر من محلول مركز من الأجسام المضادة Alexa Fluor™ 647 المضادة لـ H2AX (pS139)، وهو ما يكفي لتلوين 50 عينة (10^6 خلية/عينة). يجب تخزين هذا الجسم المضاد الفلوري في مكان مظلم عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. أضف 5 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد المركز إلى العينة. جسم مضاد PE Mouse المضاد لـ PARP المنشطر (Asp214). تحتوي هذه القارورة على 250 ميكرولتر من محلول مركز من الأجسام المضادة المقترنة بـ PE المضادة لـ PARP المنشطر (Asp214)، وهو ما يكفي لتلوين 50 عينة (10^6 خلية/عينة). يجب تخزين هذا الجسم المضاد الفلوري في مكان مظلم عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. أضف 5 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد المركز إلى العينة. DAPI (ثنائي هيدروكلوريد 4'،6-ثنائي أميدينو-2-فينيل إندول) صبغة فلورية تُستخدم لوسم الحمض النووي DNA لتحليل التدفق الخلوي. المحلول الأساسي بتركيز 1 ملغم/مل في الماء. أضف 1 ميكرولتر من محلول DAPI الأساسي لكل مل من محلول التلوين. تأتي عبوة واحدة من DAPI، ويجب حفظها في مكان مظلم عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. محلول BD Cytofix/Cytoperm™ Plus للنفاذية: مُصمم خصيصًا لمجموعة أدوات موت الخلايا المبرمج، وتلف الحمض النووي DNA، وتكاثر الخلايا، ويُستخدم كمُحسِّن للتلوين وكاشف نفاذية ثانوي (100 ميكرولتر/عينة). تأتي عبوة واحدة سعة 10 مل من محلول BD Cytoperm Plus، ويجب حفظها عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. ملاحظة: يُستخدم محلول BD Cytoperm Plus مع عينات الخلايا المُثبَّتة فقط. استخدام هذا المحلول المنظم مع الخلايا غير المثبتة سيؤدي إلى تلفها. يحتوي كل أنبوب على 0.5 مل من محلول BrdU بتركيز 10 ملغ/مل (32.5 ملي مولار) مخفف في محلول DPBS بتركيز 1X. يُحضر محلول BrdU بطريقة معقمة (مُرشح عبر مرشح 0.22 ميكرومتر) ولا يحتوي على أي مواد حافظة؛ لذا يُنصح بالتعامل معه في ظروف معقمة. يمكن حقن هذا المحلول المركز داخل الصفاق (ip) في الحيوانات أو تخفيفه إلى محلول بتركيز 1 ملي مولار لوسم الخلايا في المختبر. لوسم خلايا طور S في الجسم الحي عن طريق الحقن داخل الصفاق، يُرجى مراجعة قسم الوسم في الجسم الحي في ورقة البيانات الفنية (الصفحة 4). لوسم الخلايا في المختبر، يُخفف المحلول الأصلي (10 ملغم/مل من BrdU) إلى محلول تركيزه 1 ملي مولار بإضافة 31 ميكرولتر من محلول BrdU الأصلي إلى 1 مل من محلول DPBS بتركيز 1X أو إلى وسط الاستنبات (هذا تخفيف 32X). يُضاف 10 ميكرولتر من محلول BrdU بتركيز 1 ملي مولار إلى كل مل من وسط الاستنبات للحصول على تركيز نهائي قدره 10 ميكرومولار. الوزن الجزيئي لـ BrdU هو 307.1. يُرفق مع المنتج خمس قوارير من محلول BrdU، ويجب حفظها في درجة حرارة -80 درجة مئوية. ملاحظة: ثبت أن محلول BrdU مستقر لمدة تصل إلى 4 أشهر عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، أو يمكن إعادة تجميده. تجنب تكرار دورات التجميد والذوبان. DNase: تحتوي كل قارورة على 300 ميكرولتر من محلول DNase بتركيز 1 ملغم/مل في محلول DPBS بتركيز 1X. عند تلوين 10 عينات أو أكثر، قم بإذابة كامل محتوى قارورة محلول DNase، ثم أضف 700 ميكرولتر من محلول DPBS بتركيز 1X لتحضير محلول أساسي بتركيز 300 ميكروغرام/مل. ملاحظة: إذا كان عدد العينات المعالجة بـ DNase أقل من 10، فخذ 30 ميكرولتر من محلول DNase (بتركيز 1 ملغ/مل) لكل عينة، وأعد تجميد الكمية المتبقية من DNase (بتركيز 1 ملغ/مل) عند درجة حرارة -80 درجة مئوية. ملاحظة: يمكن إعادة تجميد محلول DNase الأساسي (بتركيز 1 ملغ DNase/مل) مرة واحدة قبل أن يفقد فعاليته. يُستخدم 100 ميكرولتر من المحلول الأساسي لمعالجة كل عينة خلوية (أي 30 ميكروغرام من DNase لكل 10^6 خلية) مع إجراء الحضانة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. يتم توفير خمس قوارير من DNase، ويجب حفظها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية. محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ . يُعدّ محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ كاشفًا أحادي الخطوة للتثبيت والنفاذية، مُصمّمًا للاستخدام في التلوين داخل الخلايا. يحتوي على مزيج من المُثبِّت بارافورمالدهيد والمُنظِّف سابونين. يعمل هذا الكاشف على الحفاظ على مورفولوجيا الخلية، وتثبيت البروتينات الخلوية، ونفاذية الخلايا للتلوين المناعي الفلوري اللاحق للبروتينات داخل الخلايا. تُقدَّم زجاجة سعة 25 مل من محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ بتركيبة جاهزة للاستخدام. يجب تخزين محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. محلول BD Perm/Wash™ المُخفَّض (10X). تحتوي كل زجاجة سعة 25 مل على محلول مُخفَّض مُركَّز (10X) من محلول BD Perm/Wash™ المُخفَّض. يحتوي محلول BD Perm/Wash Buffer على مصل جنيني بقري ومادة السابونين، وهي مادة منظفة قابلة للعكس لزيادة نفاذية الغشاء. يجب تخفيف المحلول المركز بنسبة 1:10 باستخدام الماء منزوع الأيونات. يمكن تخزين الكميات غير المستخدمة من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1X عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. يجب تخزين زجاجتي محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 10X المرفقتين عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. ملاحظة: من الشائع وجود بعض الرواسب في محلول BD Perm/Wash المركز بتركيز 10X. لن تؤثر هذه الرواسب على فعالية المحلول. إذا رغبت في ذلك، يمكنك إزالة الرواسب قبل الاستخدام عن طريق ترشيح محلول BD Perm/Wash Buffer المخفف بتركيز 1X من خلال مرشح بمسام 0.45 ميكرومتر. ملاحظة: يجب استخدام محلول BD Perm/Wash Buffer (بتركيز 1X) مع عينات الخلايا المثبتة فقط. استخدام هذا المحلول مع الخلايا غير المثبتة سيؤدي إلى تلفها. ملاحظة: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. بروتوكولات وسم الخلايا باستخدام BrdU: وسم الخلايا المزروعة وخطوط الخلايا باستخدام BrdU في المختبر: تم الإبلاغ عن العديد من البروتوكولات المختلفة لوسم الخلايا باستخدام BrdU في المختبر. وقد وجدنا أن حضانة الخلايا مع BrdU بتركيز نهائي قدره 10 ميكرومتر في وسط زراعة الخلايا (أي 10 ميكرولتر من BrdU بتركيز 1 ملي مولار لكل مل من وسط الزراعة) كانت فعالة في وسم مجموعة واسعة من خطوط الخلايا البشرية والفأرية، بالإضافة إلى تجمعات الخلايا الطبيعية. يسمح التعرض المطول للخلايا لـ BrdU بتحديد تجمعات الخلايا النشطة في دورة الانقسام. كما يسمح وسم الخلايا النبضي عن طريق التعرض لفترات قصيرة لـ BrdU في نقاط زمنية مختلفة بتحديد حركية دورة الخلية. لوسم الخلايا في المختبر، أضف بعناية 10 ميكرولتر من محلول BrdU (1 ملي مولار BrdU في محلول DPBS بتركيز 1X) مباشرة إلى كل مل من وسط زراعة الأنسجة. في هذه الخطوة، من المهم تجنب إزعاج الخلايا بأي شكل من الأشكال (مثل عمليات الطرد المركزي أو تغييرات درجة الحرارة) التي قد تُخلّ بنمط دورة الخلية الطبيعية. يجب ألا تتجاوز كثافة مزرعة الخلايا 2 × 10^6 خلية/مل. تُحضن الخلايا المعالجة بعد ذلك للمدة الزمنية المطلوبة. في تجارب الوسم النبضي، يعتمد اختيار النقاط الزمنية وفترات الوسم النبضي على معدل دخول دورة الخلية وتقدمها في مجموعة الخلايا المختبرة. على سبيل المثال، تتراوح المدة الزمنية الفعالة لوسم خط خلوي نشط التكاثر (مثل خلايا CTLL-2) بين 30 و45 دقيقة (أي عندما تكون الخلايا في المرحلة اللوغاريتمية من تكاثرها). ينبغي على الباحثين تحديد النقاط الزمنية وفترات الوسم النبضي المثلى لكل خط خلوي أو مجموعة خلايا مختلفة ضمن نظام تجريبي معين. تُعد الخلايا من نفس المجموعة غير الموسومة بـ BrdU هي عنصر التحكم السلبي الموصى به لهذا الاختبار. سيسمح هذا بتحديد مستويات التلوين الخلفي للأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة لـ BrdU. طرق وسم خلايا الفئران بـ BrdU في الجسم الحي: تتضمن طريقتان شائعتان لوسم الخلايا بـ BrdU في الجسم الحي الحقن داخل الصفاق (ip) لمحلول يحتوي على BrdU في الفئران، وتغذية الفئران بـ BrdU المضاف إلى مياه الشرب. مع ذلك، يُرجى ملاحظة أن هذه الطرق لا تُختبر بشكل روتيني في BD Biosciences Pharmingen. الطريقة رقم 1: طريقة حقن BrdU عن طريق الحقن داخل الصفاق. يُوفر محلول BrdU بتركيز 10 ملغم/مل في محلول DPBS معقم بتركيز 1X للاستخدام في الجسم الحي. تُحقن الفئران داخل الصفاق بـ 100-200 ميكرولتر (1-2 ملغم) من محلول BrdU. يمكن الكشف بسهولة عن دمج BrdU في الخلايا المشتقة من الغدة الزعترية ونخاع العظم في غضون ساعة واحدة فقط بعد الحقن. الطريقة الثانية: إدخال BrdU عبر ماء الشرب. يُخفف BrdU إلى تركيز 0.8 ملغم/مل في ماء الشرب. يجب تحضير محلول BrdU طازجًا وتغييره يوميًا. قد يؤدي التغذية المطولة بـ BrdU إلى آثار سامة على الحيوان. وقد أبلغ بعض الباحثين عن آثار مميتة مرتبطة بتغذية BrdU المستمرة لمدة 14 يومًا. في دراسات طويلة الأمد، أفاد بعض الباحثين أن تغذية الفئران بـ BrdU لمدة 9 أيام متتالية، متبوعةً بالتحول إلى الماء العادي، كانت فعالة. وقد تم الكشف عن دمج BrdU بواسطة خلايا هذه الحيوانات لأكثر من 70 يومًا. بروتوكول تلوين مجموعة أدوات موت الخلايا المبرمج، وتلف الحمض النووي، وتكاثر الخلايا: 1. التلوين المناعي الفلوري لمستضدات سطح الخلية. أ. أضف الخلايا المحفزة بـ BrdU (10^6 خلية في 50 ميكرولتر من محلول التلوين) إلى أنابيب قياس التدفق الخلوي. ب. أضف الأجسام المضادة الفلورية النوعية لعلامات سطح الخلية في 50 ميكرولتر من محلول التلوين (مثل محلول التلوين BD Pharmingen (FBS) رقم المنتج 554656) لكل أنبوب، واخلط جيدًا. ج. حضّن الخلايا مع الأجسام المضادة لمدة 15 دقيقة على الجليد. د. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول التلوين لكل أنبوب، ثم قم بالطرد المركزي (لمدة 5 دقائق) عند قوة 200-300 غرام، وتخلص من السائل الطافي. 2. ثبّت الخلايا واجعلها نفاذة باستخدام محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm. أ. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm لكل أنبوب. ب. حضّن الخلايا لمدة 15-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو على الجليد. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1X، ثم قم بالطرد المركزي كما في الخطوة 1د، وتخلص من السائل الطافي. 3. حضّن الخلايا باستخدام محلول BD Cytofix/Cytoperm Plus Permeabilization Buffer. أ. أعد تعليق الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول BD Cytofix/Cytoperm Plus Permeabilization Buffer لكل أنبوب. ب. حضّن الخلايا لمدة 10 دقائق على الجليد. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1X (كما في الخطوة 2ج). 4. إعادة تثبيت الخلايا أ. أعد تعليق الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution لكل أنبوب. ب. حضّن الخلايا لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة أو على الجليد. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1X (كما في الخطوة 2ج). 5. معالجة الخلايا بإنزيم DNase لكشف BrdU المدمج. أ. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من إنزيم DNase المخفف (مخفف إلى 300 ميكروغرام/مل في محلول DPBS) لكل أنبوب (أي 30 ميكروغرام من إنزيم DNase لكل أنبوب). ب. حضّن الخلايا لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1X (كما في الخطوة 2ج). 6. صبغ BrdU وH2AX ​​(P139) وPARP المنشطر (Asp214) والمستضدات داخل الخلايا/السطحية باستخدام الأجسام المضادة الفلورية. أ. أعد تعليق الخلايا في 20 ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash Buffer مع إضافة 5 ميكرولتر من الأجسام المضادة PerCP-Cy™5.5 Anti-BrdU لكل اختبار، و5 ميكرولتر من الأجسام المضادة Alexa Fluor® 647 Mouse Anti-H2AX (pS139) لكل اختبار، و5 ميكرولتر من الأجسام المضادة PE Anti-Cleaved PARP (Asp214) لكل اختبار، مع أو بدون أجسام مضادة أخرى خاصة بمستضدات داخلية أو سطحية. ب. حضّن الخلايا لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ج. اغسل الخلايا مرة واحدة بإضافة 1 مل من محلول BD Perm/Wash Buffer بتركيز 1X (كما في الخطوة 2ج). 7. اختياري - تلوين الحمض النووي الكلي لتحليل دورة الخلية. أ. أعد تعليق الخلايا في 1 مل من محلول DAPI (1 ميكروغرام/مل). ب. حلل الخلايا الملونة باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي (بمعدل لا يزيد عن 400 حدث/ثانية) واحصل على ملفات بيانات متعددة المعايير. ملاحظة: إذا قمتَ بالتلوين الاختياري في الخطوة 7، فقد انتهيتَ ويمكنك المتابعة لتحليل عينات الخلايا. وإلا، فانتقل إلى الخطوة 8 إذا لم تكن ترغب في تلوين مستويات الحمض النووي الكلي. ملاحظة: يمكن تخزين العينات طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، مع حمايتها من الضوء. 8. إعادة تعليق الخلايا لتحليل التدفق الخلوي. أ. أضف 1 مل من محلول التلوين إلى كل أنبوب لإعادة تعليق الخلايا. ب. حلل الخلايا الملونة باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي (بمعدل لا يزيد عن 400 حدث/ثانية) واحصل على ملفات بيانات متعددة المعايير. ملاحظة: يمكن تخزين العينات طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، مع حمايتها من الضوء. الضوابط الموصى بها لإعداد الجهاز: يُوصى باستخدام كل جسم مضاد على حدة كضابط لإعداد الجهاز. ١. PerCP-Cy™5.5 مضاد BrdU (عرض في الوضع اللوغاريتمي) ٢. PE مضاد PARP المنشطر (Asp214) (عرض في الوضع اللوغاريتمي) ٣. Alexa Fluor® 647 فأر مضاد H2AX (pS139) (عرض في الوضع اللوغاريتمي) ٤. DAPI (عرض في الوضع الخطي). استخدم خاصية التعويض التلقائي في برنامج BD FACSDiva™ لتعويض التجربة. بالنسبة لإشارة DAPI، حدد جميع بيانات الرسم البياني للحمض النووي. يُعرض DAPI في الوضع الخطي، وتُضبط ذروة G0/G1 على القناة ٥٠٠٠٠ في الرسم البياني. خطر: يحتوي محلول التثبيت/النفاذية BD Cytofix/Cytoperm™ (المكون ٥١-٢٠٩٠KE) على ٤٫٢٪ فورمالديهايد (وزن/وزن). تحذيرات: يُسبب تهيج الجلد. يُسبب تلفًا خطيرًا للعين. قد يُسبب رد فعل تحسسي للجلد. يُشتبه في تسببه بعيوب وراثية. قد يُسبب السرطان. احتياطات السلامة: يُرجى الحصول على تعليمات خاصة قبل الاستخدام. لا تتعامل مع المنتج حتى يتم قراءة جميع احتياطات السلامة وفهمها. ارتدِ ملابس واقية/واقي للعينين. ارتدِ قفازات واقية. لا يُسمح بإخراج ملابس العمل الملوثة من مكان العمل. انزع الملابس الملوثة واغسلها قبل إعادة استخدامها. اغسل جيدًا بعد التعامل مع المنتج. لا تستنشق الرذاذ/الأبخرة. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت ويسهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيبًا. في حالة ملامسة الجلد: اغسل بكمية كبيرة من الماء. في حالة التعرض أو القلق: استشر طبيبًا. تجنب إطلاقه في البيئة. يُحفظ في مكان مغلق. تخلص من المحتويات/العبوة في منشأة معالجة وتخلص مناسبة وفقًا للقوانين واللوائح المعمول بها، وخصائص المنتج وقت التخلص. خطر. يحتوي BrdU (المكون 51-2420KC) على 0.98% من 5-برومو-2'-ديوكسي يوريدين (وزن/وزن). بيان المخاطر: قد يسبب تشوهات وراثية. يُشتبه في أنه يضر بالخصوبة أو بالجنين. بيانات التحذير: احصل على تعليمات خاصة قبل الاستخدام. لا تتعامل مع المنتج حتى تقرأ جميع احتياطات السلامة وتفهمها. ارتدِ قفازات/ملابس واقية/واقي للعينين/واقي للوجه. في حالة التعرض أو القلق: احصل على استشارة/رعاية طبية. يُحفظ في مكان مغلق. تخلص من المحتويات/العبوة في منشأة معالجة وتخلص مناسبة وفقًا للقوانين واللوائح المعمول بها، وخصائص المنتج وقت التخلص.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مركب فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعرض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. يمكن استخدام الأجسام المضادة الموسومة بـ PerCP-Cy5.5 مع الكواشف الموسومة بـ FITC وR-PE في أجهزة قياس التدفق الخلوي أحادية الليزر، دون تداخل طيفي يُذكر بين تألق PerCP-Cy5.5 وFITC وR-PE. تم تحسين PerCP-Cy5.5 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر. نظرًا لطيف الامتصاص الواسع للفلوركروم المزدوج، يجب توخي الحذر عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، والتي قد تُثير كلاً من PerCP وCy5.5™ بشكل مباشر. نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. قبل التلوين بهذا الكاشف، يُرجى التأكد من قدرة جهاز قياس التدفق الخلوي على إثارة الفلوركروم وتمييز التألق الناتج. يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. يُقدَّم هذا المنتج بموجب ترخيص ملكية فكرية بين شركة لايف تكنولوجيز كوربوريشن وشركة بي دي بيزنسز. يمنح شراء هذا المنتج المشتري حقًا غير قابل للتحويل لاستخدام الكمية المشتراة من المنتج ومكوناته في الأبحاث التي يجريها المشتري (سواء كان المشتري جهة أكاديمية أو ربحية). لا يجوز للمشتري بيع أو نقل (أ) هذا المنتج، أو (ب) مكوناته، أو (ج) المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته إلى طرف ثالث، أو استخدام هذا المنتج أو مكوناته أو المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته لأغراض تجارية. تشمل الأغراض التجارية أي نشاط يقوم به أي طرف مقابل عوض، وقد تشمل، على سبيل المثال لا الحصر: (1) استخدام المنتج أو مكوناته في التصنيع؛ (2) استخدام المنتج أو مكوناته لتقديم خدمة أو معلومات أو بيانات؛ (3) استخدام المنتج أو مكوناته لأغراض علاجية أو تشخيصية أو وقائية. أو (4) إعادة بيع المنتج أو مكوناته، سواءً أُعيد بيعها لأغراض البحث أم لا. للحصول على معلومات حول شراء ترخيص لهذا المنتج لأي استخدام آخر، يُرجى التواصل مع شركة لايف تكنولوجيز، وحدة أعمال تحليل الخلايا، قسم تطوير الأعمال، 29851 طريق ويلو كريك، يوجين، أوريغون 97402، الولايات المتحدة الأمريكية، هاتف: 5414658300، فاكس: 5413350504. للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS)، يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com. أليكسا فلور™ علامة تجارية مسجلة لشركة لايف تكنولوجيز. سي علامة تجارية مسجلة لشركة غلوبال لايف ساينسز سوليوشنز ألمانيا المحدودة أو إحدى الشركات التابعة لها التي تُمارس أعمالها تحت اسم سيتيفا.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : لا شيء : غير متوفر : غير متوفر