BD، 560210، BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 555 Mouse anti-BrdU

الاسم البديل: 5-برومو-2'-ديوكسي يوريدين، 5-برومويوراسيل ديوكسي ريبوسيد، BUdR
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
التطبيق: التصوير الحيوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 5 ميكرولتر
RRID: AB_1645614
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بالصبغة في ظل الظروف المثلى، ثم أُزيلت الصبغة غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: يتم وسم الخلايا بـ BrdU بشكل نبضي، ثم تثبيتها للحفاظ على كمية BrdU المحملة، ونفاذيتها لتلوين BrdU المدمج داخل النواة. يُستخدم إنزيم DNase I لقطع الحمض النووي بشكل عشوائي، مما يسمح للأجسام المضادة وحيدة النسيلة المضادة لـ BrdU بالارتباط بـ BrdU المدمج. المواد • مزرعة خلايا ملتصقة نامية في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219) • حاضنة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية • بروموديوكسي يوريدين (BrdU) (رقم المنتج 550891) مخفف إلى تركيز 10-100 ميكرومولار في وسط زراعة الأنسجة، يُحضر بكمية كافية للاستخدام بمقدار 50 ميكرولتر لكل بئر (انظر الخطوة 1 من الإجراء) • محلول تثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655)، مُسخن إلى 37 درجة مئوية • محلول نفاذية BD Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج 558050)، عند درجة حرارة -20 درجة مئوية • محلول ملحي مُخفف بالفوسفات (PBS)، في درجة حرارة الغرفة • محلول تلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656)، عند درجة حرارة 4 درجات مئوية • محلول معقم من إنزيم DNase I بتركيز 300 ميكروغرام/مل (يفضل استخدام سيجما-ألدريتش، رقم المنتج D4513) في محلول ملحي فوسفاتي، حضّر كمية كافية للاستخدام بمقدار 50 ميكرولتر لكل بئر. • أجسام مضادة أحادية النسيلة مضادة لـ BrdU من الفأر، مُخففة بنسبة 1:10 في محلول تلوين BD Pharmingen™ (مصل بقري جنيني)، حضّر كمية كافية للاستخدام بمقدار 50 ميكرولتر لكل بئر. في حال استخدام أجسام مضادة إضافية، يجب إضافتها بحيث تشمل الكمية الإجمالية 50 ميكرولتر لكل بئر. • محلول هوكست 33342 بتركيز 2 ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول ملحي فوسفاتي، حضّر كمية كافية لاستخدام 100 ميكرولتر لكل بئر. • جهاز تصوير فلوري قادر على إثارة ألكسا فلور® 555 وهوكست 33342، مثل نظام التصوير الحيوي BD Pathway™. الإجراء 1: حضّر مزارع الخلايا الملتصقة بإضافة 50 ميكرولتر من محلول بروموديوكسي يوريدين المخفف إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة 1-2 ساعة عند 37 درجة مئوية. لا تُضِف بروموديوكسي يوريدين إلى الآبار التي ستُستخدم كضوابط سلبية لتلوين بروموديوكسي يوريدين. في جميع الخطوات اللاحقة، يجب معالجة الخلايا المحملة ببروموديوكسي يوريدين والخلايا الضابطة بالتوازي. ٢. أزل الوسط من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول التثبيت المُسخّن مسبقًا إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة ١٠-٢٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٣. أزل المُثبّت من الآبار، واغسلها مرتين بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS). ٤. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، واجعل الخلايا نفاذة بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III البارد إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة ٥-١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ٥. أزل محلول Perm Buffer III من الآبار، واغسلها مرتين بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS). ٦. اختياري: أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، واحجب الخلايا بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة ١٥-٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٧. أزل محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS)، وقم بتفكيك الحمض النووي للخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من محلول DNase I المعقم إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة ساعة واحدة عند ٣٧ درجة مئوية. ٨. أزل محلول DNase I من الآبار، واغسلها مرة واحدة بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول PBS. ٩. أزل محلول PBS، وقم بتلوين الخلايا بإضافة ٥٠ ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة المخفف إلى كل بئر، ثم حضّنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ١٠. أزل محلول الأجسام المضادة، واغسل الآبار مرتين بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول PBS. ١١. أزل محلول PBS، وقم بتلوين النوى بشكل معاكس بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول Hoechst 33342 إلى كل بئر قبل التصوير بـ ١٥ دقيقة على الأقل. ١٢. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. المرشحات الموصى بها لأجهزة تحليل الخلايا BD Pathway™ هي: مرشح الإثارة، مرشح الانبعاث، مرشح ثنائي اللون BD Pathway 855 548/20 570LP Fura/FITC، مرشح BD Pathway 435 543/22 593/40 FF562
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار عند اتباع إجراء الفحص الموصى به. يتكون الاختبار عادةً من حوالي 10000 خلية مزروعة في بئر من صفيحة تصوير ذات 96 بئرًا. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى مراجعة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يُقدم هذا المنتج بموجب ترخيص ملكية فكرية بين شركة لايف تكنولوجيز كوربوريشن وشركة بي دي بيزنسز. يمنح شراء هذا المنتج المشتري حقًا غير قابل للتحويل لاستخدام الكمية المشتراة من المنتج ومكوناته في الأبحاث التي يجريها المشتري (سواء كان جهة أكاديمية أو ربحية). لا يجوز للمشتري بيع أو نقل (أ) هذا المنتج، أو (ب) مكوناته، أو (ج) المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته إلى طرف ثالث، أو استخدام هذا المنتج أو مكوناته أو المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته لأغراض تجارية. تشمل الأغراض التجارية أي نشاط يقوم به أي طرف مقابل عوض، وقد تشمل، على سبيل المثال لا الحصر: (1) استخدام المنتج أو مكوناته في التصنيع؛ (2) استخدام المنتج أو مكوناته لتقديم خدمة أو معلومات أو بيانات؛ (3) استخدام المنتج أو مكوناته لأغراض علاجية أو تشخيصية أو وقائية؛ أو (4) إعادة بيع المنتج أو مكوناته، سواء أكانت هذه إعادة البيع لاستخدامها في الأبحاث أم لا. للحصول على معلومات حول شراء ترخيص لهذا المنتج لأي استخدام آخر، يُرجى التواصل مع شركة لايف تكنولوجيز، وحدة أعمال تحليل الخلايا، قسم تطوير الأعمال، 29851 طريق ويلو كريك، يوجين، أوريغون 97402، الولايات المتحدة الأمريكية، هاتف: 5414658300، فاكس: 5413350504. أليكسا فلور™ هي علامة تجارية مسجلة لشركة لايف تكنولوجيز.