BD، 550487، مجموعة BD Pharmingen™ لتحديد النمط المصلي للغلوبولين المناعي للفئران بتقنية ELISA

التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2868886
الوصف: تتيح مجموعة اختبار ELISA لتحديد النمط المصلي للغلوبولين المناعي للفئران التعرف السريع والفعال على الأنماط المصلية للغلوبولين المناعي للفئران. تستخدم هذه المجموعة نظامًا مباشرًا موسومًا بإنزيم بيروكسيداز الفجل، كما أن طريقة الاختبار لا تتطلب تغطية الصفيحة بالمستضد. تؤدي هذه الميزات إلى تقليل وقت الاختبار بشكل ملحوظ دون المساس بالحساسية. تحتوي كل مجموعة على: 8 أجسام مضادة وحيدة النسيلة من الفئران خاصة بنمط مصل الغلوبولين المناعي للفئران، وجسم مضاد من الفئران مرتبط بإنزيم بيروكسيداز الفجل (HRP) مضاد للغلوبولين المناعي للفئران، ومحاليل الركيزة/الإيقاف، ومحاليل التغطية/الحجب، ومزيج مستضد مرجعي إيجابي. مزيج المستضد المرجعي الإيجابي هو مزيج من الغلوبولينات المناعية أحادية النسيلة النقية للفئران، والتي تتكون من تسعة تركيبات من السلاسل الثقيلة والخفيفة للغلوبولين المناعي (IgG1κ، IgG1λ، IgG2aκ، IgG2aλ، IgG2bκ، IgG3κ، IgMκ، IgAκ، وIgAλ). المواد المتوفرة:
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بإنزيم بيروكسيداز الفجل (HRP) في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وإنزيم بيروكسيداز الفجل الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: المواد المطلوبة (غير متوفرة): صفائح ميكروية من البوليسترين أو البولي فينيل كلوريد (PVC) ذات 96 بئرًا، مناسبة لاختبارات ELISA؛ كما يمكن استخدام الشرائط المعيارية. ماصات دقيقة قادرة على توصيل ما بين 50 و200 ميكرولتر من محلول Tween-20 بتركيز 0.05% في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) كمحلول غسيل. تحضير الكواشف: 1. اترك جميع الكواشف لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (18-25 درجة مئوية) قبل الاستخدام. 2. محلول التغطية (PBS بتركيز 1X): خفف الكمية المطلوبة من محلول PBS بتركيز 10X بالماء منزوع الأيونات أو المقطر، واخلطها جيدًا (50 مل لكل صفيحة). 3. محلول الحجب: خفف الكمية المطلوبة من محلول BSA بتركيز 10% بنسبة 1:10 باستخدام محلول PBS بتركيز 1X (35 مل لكل صفيحة). 4. خفف خليط المستضد المرجعي الموجب بنسبة 1:50 باستخدام محلول الحجب (1 مل لكل صفيحة). 5. خفف الأجسام المضادة IgA المضادة للفأر والموسومة بإنزيم بيروكسيداز الفجل (HRP) بنسبة 1:100 باستخدام محلول الحجب (10 مل لكل صفيحة). 6. محلول الركيزة: في غضون 15 دقيقة قبل الاستخدام، امزج أحجامًا متساوية من كاشف الركيزة A وكاشف الركيزة B (5 مل من كل محلول لكل صفيحة) في أنبوب زجاجي نظيف أو قارورة. حضّر الكمية المطلوبة فقط لكل اختبار. تخلص من أي محلول عمل متبقٍ بعد الاستخدام. تغليف الأجسام المضادة: ملاحظة: للحصول على أفضل النتائج، يجب تخفيف الكميات المطلوبة من الأجسام المضادة النقية للتغليف مباشرة قبل الاستخدام، ويجب عدم تخزين الأجسام المضادة المخففة لفترة طويلة. لا يجب تجميد العينات المخففة. 7. خفف كمية مناسبة من كل جسم مضاد أحادي النسيلة نقي مضاد للفأر ومحدد للنمط المصلي في محلول التغليف، وضع 50 ميكرولتر من كل كاشف في الصفوف المناسبة (انظر الشكل 1 للتخطيط المقترح). ٨. انقر برفق على الصفيحة لضمان توزيع محلول الأجسام المضادة بالتساوي في قاع الآبار. ٩. حضّن الصفيحة مغطاة عند درجة حرارة ٣٧ درجة مئوية لمدة ساعة واحدة أو عند درجة حرارة ٤ درجات مئوية طوال الليل. ١٠. استخدم محلول الغسيل (٠.٠٥٪ توين-٢٠ في محلول ملحي فوسفاتي) لغسل محتويات الصفيحة باستخدام غسالة صفائح أو جهاز مشابه، مع الحرص على عدم تلوث الآبار بأجسام مضادة مختلفة. ثم رجّ الصفيحة للتخلص من المحتويات المتبقية، وجفف الزائد منها بمنشفة ورقية نظيفة. كرر عملية الغسل ٣ مرات. ١١. أضف ٢٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب (انظر تحضير الكاشف، الخطوة ٣) إلى كل بئر، وحضّن الصفيحة في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة. ١٢. للتحضير للخطوة ١٣، اغسل الصفيحة ٣ مرات، ورجّها للتخلص من محلول الحجب، وجففها. حضانة العينات: 13. ضع 100 ميكرولتر من كل عينة (مثل سائل مزرعة الخلايا الهجينة) المراد اختبارها في أعمدة اللوحة المناسبة، وحضّنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. يجب تضمين الضوابط الموجبة (انظر تحضير الكاشف، الخطوة 4) حسب الرغبة؛ تتكون الضوابط السالبة عادةً من سائل مزرعة الخلايا النخاعية الأصلية (انظر الشكل 1 للتخطيط المقترح). 14. للتحضير للخطوة 15، اغسل 3 مرات، ورجّ المحتويات المتبقية، وجففها. حضانة مُقترن الإنزيم: 15. ضع 100 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة أحادية النسيلة للفئران المُوسومة بإنزيم بيروكسيداز الفجل (HRP) (انظر تحضير الكاشف، الخطوة 5) في كل بئر، وحضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. 16. للتحضير للخطوة 17، اغسل 6 مرات، مع نقع الآبار لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة في كل غسلة. يُعد الغسل الجيد في هذه الخطوة بالغ الأهمية. تطوير اللون: ١٧. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول الركيزة المُحضر (انظر تحضير الكاشف، الخطوة ٦) إلى كل بئر، وحضّن الصفيحة لمدة ٣-١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ستظهر الآبار ذات التفاعل الإيجابي بلون أزرق مخضر، بينما ستكون الآبار ذات التفاعل السلبي عديمة اللون. ١٨. ضع ٥٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف في كل بئر. ستصبح الآبار ذات التفاعل الإيجابي صفراء. قراءة نتيجة الصفيحة: ١٩. اقرأ بصريًا أو باستخدام مطياف ضوئي عند ٤٥٠ نانومتر. إذا كان تصحيح الطول الموجي متاحًا، اطرح الامتصاص عند ٥٧٠ نانومتر من الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر. الشكل ٢ مثال على القراءة البصرية للغلوبولينات المناعية من مختلف الأنماط. خطر: يحتوي كاشف الركيزة B (المكون ٥١-٠٤١٤١E) على ٣٣.٠٥٪ ميثانول (وزن/وزن). تحذيرات المخاطر: سائل وبخار قابل للاشتعال. سام عند البلع أو ملامسة الجلد أو الاستنشاق. يُسبب تلفًا للجهاز العصبي المركزي. طريقة التعرض: عن طريق الفم. احتياطات السلامة: يُحفظ بعيدًا عن الحرارة/الشرر/اللهب المكشوف/الأسطح الساخنة. ممنوع التدخين. في حالة نشوب حريق: استخدم وسائل إطفاء مناسبة. ارتدِ قفازات واقية/نظارات واقية. ارتدِ ملابس واقية. لا تستنشق الرذاذ/الأبخرة. في حالة ملامسة الجلد (أو الشعر): انزع/اخلع جميع الملابس الملوثة فورًا. اغسل الجلد بالماء/استحم. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق وأبقِه في وضع مريح للتنفس. في حالة التعرض أو القلق: اتصل بمركز السموم/الطبيب. يُحفظ في مكان جيد التهوية. يُحفظ الوعاء مغلقًا بإحكام. خطر: يحتوي محلول الإيقاف (المكون 51-04161E) على 15.23% من حمض الفوسفوريك (وزن/وزن). بيانات المخاطر: يُسبب حروقًا جلدية شديدة وتلفًا في العين. احتياطات السلامة: ارتدِ قفازات واقية/نظارات واقية. ارتدِ ملابس واقية. في حالة ملامسة الجلد (أو الشعر): انزع/اخلع جميع الملابس الملوثة فورًا. اغسل الجلد بالماء/استحم. في حالة ملامسة العينين: اغسلهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق وأبقِه في وضع مريح للتنفس. تخلص من المحتويات/العبوة وفقًا للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية. تحذير: يحتوي مُضاد الأجسام المضادة للفأر HRP Rat Anti-Mouse Ig (100x) (المكون 51-04317E) على 0.004% (وزن/وزن)، بينما يحتوي محلول BSA بتركيز 10% (المكون 51-04181E) على 0.003% (وزن/وزن) من خليط CMIT/MIT (3:1)، وهو خليط من: 5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 247-500-7] و2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 220-239-6] (3:1). بيانات المخاطر: قد يُسبب رد فعل تحسسي جلدي. بيانات الاحتياطات: ارتدِ قفازات واقية/واقي للعينين. ارتدِ ملابس واقية. تجنب استنشاق الرذاذ/الأبخرة. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيبًا. في حالة ملامسة الجلد: اغسل جيدًا بالماء. تخلص من المحتويات/العبوة وفقًا للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.
إشعارات المنتج: ProClin هي علامة تجارية مسجلة لشركة Rohm and Haas. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.