BD، 557826، طقم BD™ لاختبار البروتين التفاعلي C (CRP) للكلاب بتقنية ELISA

التطبيق: اختبار ELISA (تم اختباره أثناء التطوير)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: المواد المتوفرة: صفيحة ميكروية مغلفة بأجسام مضادة لالتقاط الأجسام المضادة: صفيحة واحدة تحتوي على 96 بئرًا قابلة للكسر مغلفة بأجسام مضادة من الماعز ضد بروتين سي التفاعلي (CRP) الخاص بالكلاب. جسم مضاد للكشف/إنزيم مقترن (100x): 130 ميكرولتر من بيروكسيداز الفجل المركز (HRP) مقترن بأجسام مضادة من الماعز ضد بروتين سي التفاعلي (CRP) الخاص بالكلاب، يحتوي على مثبتات ومواد حافظة. يُحفظ بعيدًا عن الضوء. المعيار (10x): 250 ميكرولتر من مصل كلب يحتوي على مستويات مرتفعة من بروتين سي التفاعلي (CRP). محلول الغسل: عبوة واحدة من مسحوق تريس مع 0.05% توين-20. يُعاد تكوينه بإضافة لتر واحد من الماء المقطر. ركيزة TMB: محلول حجمه 12 مل يحتوي على 3،3'،5،5'-رباعي ميثيل بنزيدين (TMB) مُقدم في زجاجة معتمة واقية. يُحفظ بعيدًا عن الضوء. محلول الإيقاف: 12 مل من حمض الفوسفوريك المخفف. صُممت مجموعة اختبار ELISA لبروتين سي التفاعلي (CRP) للكلاب للكشف عن بروتين سي التفاعلي (CRP) وتحديد كميته في مصل دم الكلاب. يُعدّ بروتين سي التفاعلي (CRP) بروتينًا حادًا يُنتجه الكبد في حالات الالتهاب، أو العدوى البكتيرية، أو إصابات الأنسجة. يُمكن أن يكون تحديد كمية بروتين سي التفاعلي (CRP) مفيدًا في تشخيص حالات الالتهاب التي يصعب اكتشافها ومراقبتها بطرق أخرى. يعتمد اختبار ELISA هذا لبروتين سي التفاعلي (CRP) للكلاب على تقنية الساندويتش ذات الطور الصلب (اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم). يستخدم هذا الاختبار جسمًا مضادًا خاصًا ببروتين سي التفاعلي (CRP) للكلاب، مُغطى على صفيحة ذات 96 بئرًا. تُضاف المعايير أو العينات إلى الآبار، ويرتبط أي بروتين سي التفاعلي (CRP) موجود بالجسم المضاد المُثبت. بعد فترة الحضانة المناسبة، تُغسل الآبار، ثم يُضاف جسم مضاد مُقترن بإنزيم بيروكسيداز الفجل لبروتين سي التفاعلي (CRP) للكلاب، لتكوين "ساندويتش" من الأجسام المضادة والمستضدات. بعد فترة حضانة أخرى، تُغسل الآبار مرة أخرى ويُضاف محلول الركيزة، الذي يُنتج لونًا أزرق يتناسب طرديًا مع كمية البروتين التفاعلي C (CRP) الموجودة في العينة الأولية (يشير ظهور اللون الأزرق إلى تفاعل إيجابي، بينما تظهر التفاعلات السلبية عديمة اللون). يُوقف التفاعل باستخدام محلول الإيقاف، الذي يُغير اللون من الأزرق إلى الأصفر (تبقى التفاعلات السلبية عديمة اللون أو صفراء باهتة). ثم يُقاس اللون عند طول موجي 450 نانومتر (الامتصاص) باستخدام مطياف ضوئي أو قارئ ELISA.
التحضير والتخزين: يُحفظ المنتج غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. يجب ترك مكونات المجموعة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية) قبل فتح الزجاجات وأكياس الأطباق. يُرجى الانتظار لمدة 30 دقيقة على الأقل لإتمام هذه العملية. لا تستخدم المجموعة بعد تاريخ انتهاء الصلاحية.
إجراءات التحليل الموصى بها: جمع العينات ومعالجتها: يجب أن تكون العينات صافية، غير متحللة، وخالية من الدهون. تُجمع عينات الدم باستخدام تقنيات سحب الدم الوريدي المعتمدة. تُترك العينات لتتخثر، ثم يُفصل المصل بالطرد المركزي. بدلاً من ذلك، يُستخدم أنبوب فصل المصل (BD Vacutainer®، رقم المنتج 366430) وتُترك العينات لتتخثر لمدة 30 دقيقة، ثم تُطرد مركزياً لمدة 10 دقائق عند 1000 × g. يُزال المصل ويُحلل فوراً، أو تُخزن العينات عند درجة حرارة أقل من -20 درجة مئوية. يُتجنب تكرار دورات التجميد والذوبان. المواد الإضافية المطلوبة: 1. ماء مقطر أو منزوع الأيونات 2. أسطوانة مدرجة سعة لتر واحد 3. زجاجة غسيل أو غسالة آلية 4. ماصات دقيقة 5. أنابيب أو صفيحة معايرة دقيقة لتحضير التخفيفات القياسية 6. أغطية صفائح أو غشاء بارافين 7. مؤقت مختبري 8. ورق رسم بياني أو برنامج آلي لمعالجة البيانات 9. قارئ صفائح دقيقة قادر على قياس الامتصاص عند 450 نانومتر. إجراء التحليل الموصى به: 1. تحضير محلول الغسيل بإذابة عبوة واحدة من مسحوق تريس في لتر واحد من الماء المقطر. 2. تحضير معيار CRP بتخفيف المعيار المركز 10x المرفق بنسبة 1:10. (مثال على مخطط التخفيف موضح في الشكل أعلاه). بعد ذلك، قم بإجراء تخفيفات متسلسلة بنسبة 1:3 ثلاث مرات. على سبيل المثال، لتحضير محلول قياسي لبئر واحد: المحلول القياسي رقم 1: يُخفف المحلول القياسي المركز بنسبة 1:10 (أي 18 ميكرولتر من المحلول القياسي المركز 10x ممزوجًا بـ 162 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 2: يُخفف المحلول القياسي رقم 1 بنسبة 1:3 (أي 60 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 1 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 3: يُخفف المحلول القياسي رقم 2 بنسبة 1:3 (أي 60 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 2 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 4: يُخفف المحلول القياسي رقم 3 بنسبة 1:3 (أي 60 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 3 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). 3. من المرجح أن تحتاج عينات المصل إلى التخفيف قبل الاختبار، ويُنصح بشدة بمعايرة العينة. التخفيف المقترح لمصل الكلاب هو 1:500 (أي 2 ميكرولتر من المصل في 1 مل من محلول الغسل). ٤. أضف ١٠٠ ميكرولتر إلى كل بئر، ثم حضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة. ٥. اغسل الصفيحة ٣-٤ مرات بتيار خفيف من محلول الغسل من زجاجة الغسل أو جهاز غسل الصفائح. ربت على الصفائح فوق مجموعة من المناشف الورقية الماصة لإزالة أي محلول متبقٍ. ٦. حضّر تركيزًا واحدًا (١x) من مُقترن الجسم المضاد/الإنزيم للكشف عن طريق تخفيف مُقترن الجسم المضاد/الإنزيم المُرفق بتركيز ١٠٠x بنسبة ١:١٠٠ باستخدام محلول الغسل (على سبيل المثال، أضف ٥٠ ميكرولتر من مُقترن الجسم المضاد/الإنزيم بتركيز ١٠٠x إلى ٥ مل من محلول الغسل). ٧. أضف ١٠٠ ميكرولتر من مُقترن الجسم المضاد/الإنزيم بتركيز ١x إلى كل بئر صغير قيد الاختبار. ٨. غطِّ الصفيحة، ثم حضّنها لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل الصفيحة كما هو موضح في الخطوة ٥. ١٠. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول ركيزة TMB، وحضّنها لمدة ٥-١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ١١. أوقف التفاعل بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف. ١٢. اقرأ الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر خلال ٣٠ دقيقة من إيقاف التفاعل. إذا كان تصحيح الطول الموجي متاحًا، يمكن طرح الامتصاص عند ٦٣٠ نانومتر من الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر. ١٣. يمثل المحلول القياسي المُرفق بتركيز ١٠ أضعاف مصلًا مُخففًا مسبقًا. لتحديد تركيزات CRP في العينة، اضرب القيم المقاسة في عامل التخفيف المستخدم (على سبيل المثال، في ٥٠٠، إذا تم إجراء تخفيف ١:٥٠٠) لمراعاة التخفيف أثناء تحضير العينة. قيود الإجراء: ١. مجموعة BD™ ELISA للكلاب CRP مُصممة للاستخدام كوحدة متكاملة. لا تخلط الكواشف من دفعات مختلفة من المجموعة. ٢. يجب تخفيف العينات التي تُظهر قيم امتصاص أعلى من منحنى المعايرة وإعادة اختبارها. في بعض الأحيان، قد يُلاحظ وجود فائض من المستضد في مصل الدم ذي قيم CRP العالية. في هذه الحالة، قد لا يكون كل CRP المتاح قد تفاعل مع الجسم المضاد للكشف، وقد يكون من الضروري اختبار المصل بتخفيفات أعلى (مثل ١:١٠٠٠، ١:٢٠٠٠، أو ١:٤٠٠٠). ٣. لم يتم التحقق بدقة من تداخل مستقلبات الدواء، أو المستقبلات الذائبة، أو بروتينات الربط الأخرى في العينات. لا يمكن استبعاد احتمال حدوث تداخل. ٤. لا تستخدم المكونات بعد تاريخ انتهاء صلاحيتها. تعامل مع جميع عينات المصل والبلازما وفقًا لإرشادات NCCLS لمنع انتقال العدوى المنقولة بالدم. لم يتم فحص مصل التحكم بحثًا عن العوامل المعدية. نظرًا لعدم وجود اختبار يضمن الغياب التام للعوامل المعدية، يجب التعامل مع عينات المصل والمعدات التي تلامس هذه العينات وفقًا لممارسات المختبر الجيدة. تحذير: يحتوي مسحوق محلول الغسيل PBS-T (المكون 51-915X001) على 75.8% كلوريد الصوديوم (وزن/وزن) و1.9% كلوريد البوتاسيوم (وزن/وزن). تحذيرات: قد يكون ضارًا في حالة الابتلاع. احتياطات: اتصل بمركز السموم/الطبيب إذا شعرت بتوعك. خطر: يحتوي محلول الإيقاف (المكون 51-946P001) على 15.23% حمض الفوسفوريك (وزن/وزن). تحذيرات: يسبب حروقًا جلدية شديدة وتلفًا في العين. احتياطات: ارتدِ قفازات واقية/واقيًا للعينين. ارتدِ ملابس واقية. في حالة ملامسة الجلد (أو الشعر): انزع/أزل جميع الملابس الملوثة فورًا. اشطف الجلد بالماء/استحم. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق وأبقِه في وضع مريح للتنفس. تخلص من المحتويات/العبوة وفقًا للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.