BD، 559119، مجموعة BD OptEIA™ ELISA البشرية TGF-β1

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869257
الوصف: تحتوي مجموعة OptEIA™ لعامل النمو المحول بيتا 1 البشري (TGF-β1) على المكونات اللازمة لتطوير فحوصات الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لعامل النمو المحول بيتا 1 البشري الطبيعي أو المُعاد تركيبه في المصل والبلازما وسوائل مزارع الخلايا. تُوفر مواد كافية لتحضير ما يقارب 20 صفيحة من 96 بئرًا، وذلك باتباع تعليمات التخزين والمواد وتحضير المحلول المنظم وإجراء الفحص الموصى بها والمحددة في هذه العبوة. تحسين الفحص: تتيح مجموعات BD OptEIA™ تصميمًا مرنًا للفحص ليناسب احتياجات كل مختبر على حدة. لتصميم فحص مناعي بحساسية ونطاق ديناميكي مختلفين، يمكن تغيير المعايير التالية: الالتقاط، معايرة الأجسام المضادة للكشف، وقت الحضانة، درجة حرارة الحضانة، تركيبة مخفف الفحص، درجة حموضة المحلول المنظم، القوة الأيونية، تركيز البروتين، نوع الركيزة، تقنية الغسل (أي عدد مرات الغسل وأوقات النقع). المعايرة: تتم معايرة هذا الفحص المناعي باستخدام TGF-β1 البشري المؤتلف النقي.
التحضير والتخزين: تُحفظ الكواشف غير المفتوحة في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية. لا تستخدم الكواشف بعد تاريخ انتهاء الصلاحية، أو إذا ظهرت عليها عكارة. قبل الاستخدام، اترك جميع الكواشف لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (18-25 درجة مئوية). بعد الاستخدام مباشرة، أعدها إلى ظروف التخزين المناسبة. تبقى المعايير المجففة بالتجميد مستقرة حتى تاريخ انتهاء الصلاحية. بعد إعادة تكوين المحلول، قسّم المحلول القياسي مباشرةً إلى حصص في قوارير من البولي بروبيلين بمقدار 50 ميكرولتر لكل قارورة، ثم جمّدها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر. إذا لزم الأمر، خزّن المحلول في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة تصل إلى 8 ساعات قبل تقسيمه إلى حصص وتجميده. لا تترك المحلول القياسي المُعاد تكوينه في درجة حرارة الغرفة.
إجراءات التحليل الموصى بها: المحاليل المنظمة الموصى بها. ملاحظة: لا تستخدم أزيد الصوديوم في هذه التحضيرات. يُعطّل أزيد الصوديوم إنزيم بيروكسيداز الفجل. يُوصى باستخدام مجموعة كواشف BD OptEIA™ B (رقم المنتج 550534) التي تحتوي على محلول التغطية، ومخفف التحليل، وكواشف الركيزة A وB، ومحلول الإيقاف، ومحلول غسيل مركز 20X. 1. محلول التغطية - كربونات الصوديوم 0.1 مولار، درجة الحموضة 9.5؛ 7.13 غرام من بيكربونات الصوديوم، 1.59 غرام من كربونات الصوديوم؛ يُكمل الحجم إلى 1.0 لتر؛ تُضبط درجة الحموضة إلى 9.5 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم 10 مولار. يُحضر طازجًا أو يُستخدم خلال 7 أيام من التحضير، ويُخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. 2. مخفف التحليل - محلول فوسفات ملحي* مع 10% مصل بقري جنيني#، درجة الحموضة 7.0. يُوصى باستخدام مُخفِّف اختبار BD Pharmingen™ (رقم المنتج 555213). *محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات: 80.0 غ كلوريد الصوديوم، 11.6 غ فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم، 2.0 غ فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم، 2.0 غ كلوريد البوتاسيوم، كمية كافية حتى 10 لترات؛ درجة الحموضة حتى 7.0. #مصل جنيني بقري: يُوصى باستخدام Hyclone رقم المنتج SH30088 (مُنشَّط حراريًا). يُحضَّر طازجًا أو يُستخدم في غضون 3 أيام من التحضير، ويُخزَّن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. 3. محلول الغسل - محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات* مع 0.05% توين-20. يُحضَّر طازجًا أو يُستخدم في غضون 3 أيام من التحضير، ويُخزَّن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. 4. محلول الركيزة - رباعي ميثيل بنزيدين (TMB) وبيروكسيد الهيدروجين. يوصى باستخدام مجموعة كواشف BD Pharmingen™ TMB Substrate Reagent Set (رقم المنتج 555214). 5. محلول الإيقاف - 1 مولار H3PO4 أو 2 مولار H2SO4. المواد الإضافية المطلوبة: 1. يوصى باستخدام صفائح BD Falcon™ ELISA ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353279). 2. قارئ صفائح دقيقة قادر على قياس الامتصاص عند 450 نانومتر. 3. ماصات دقيقة. 4. أسطوانة مدرجة سعة لتر واحد. 5. ماء منزوع الأيونات أو مقطر. 6. زجاجة غسيل أو غسالة آلية. 7. ورق رسم بياني لوغاريتمي أو معالجة آلية للبيانات. 8. أنابيب لتحضير التخفيفات القياسية. 9. مؤقت مختبري. 10. أغطية صفائح أو غشاء بارافين. جمع العينات ومعالجتها: يجب أن تكون العينات صافية، وغير متحللة الدم، وغير دهنية. السائل الطافي لمزارع الخلايا: أزل أي مواد جسيمية بالطرد المركزي، ثم قم بتحليل العينات فورًا أو خزّنها في درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. تجنب تكرار دورات التجميد والذوبان. المصل: استخدم أنبوب فصل المصل، واترك العينات تتخثر لمدة 30 دقيقة، ثم قم بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1000 × g. أزل المصل وقم بتحليله فورًا أو خزّن العينات في درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. تجنب تكرار دورات التجميد والذوبان. البلازما: اجمع البلازما باستخدام السترات أو EDTA أو الهيبارين كمضاد للتخثر. قم بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1000 × g خلال 30 دقيقة من الجمع. قم بتحليل العينات فورًا أو خزّنها في درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. تجنب تكرار دورات التجميد والذوبان. إجراء تنشيط العينة - المصل/البلازما: يُخفف بنسبة 1:5 باستخدام محلول الفوسفات الملحي (20 ميكرولتر من العينة + 80 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي)، ثم يُضاف حمض الهيدروكلوريك 1N بنسبة 1:25 (4 ميكرولتر من المحلول السابق)، ويُحضن لمدة 60 دقيقة عند 4 درجات مئوية. يُعادل المحلول باستخدام هيدروكسيد الصوديوم 1N بنسبة 1:25 (4 ميكرولتر من المحلول السابق)، ويُجرى الاختبار فورًا أو يُحفظ عند -80 درجة مئوية لحين الاختبار. ملاحظة: يُضرب التركيز المقروء من المنحنى المعياري في عامل التخفيف 5. - سائل مزرعة الخلايا: يُضاف حمض الهيدروكلوريك 1N بنسبة 1:25 (100 ميكرولتر من السائل + 4 ميكرولتر من حمض الهيدروكلوريك 1N)، ويُحضن لمدة 60 دقيقة عند 4 درجات مئوية. يُعادل المحلول باستخدام هيدروكسيد الصوديوم 1N بنسبة 1:25 (4 ميكرولتر من المحلول السابق)، ويُجرى الاختبار فورًا أو يُحفظ عند -80 درجة مئوية لحين الاختبار. تحضير المعايير والتعامل معها: 1. إعادة التكوين: بعد تسخين المعيار المجفف بالتجميد إلى درجة حرارة الغرفة، افتح القارورة بحرص لتجنب فقدان المادة. أعد تكوين المعيار المجفف بالتجميد بإضافة 1.0 مل من الماء منزوع الأيونات للحصول على محلول قياسي مركز. اترك المعيار ليتوازن لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. رجّ القارورة برفق للمزج. 2. تخزين/التعامل مع المعيار المُعاد تكوينه: بعد إعادة التكوين، قسّم المحلول القياسي المركز فورًا إلى حصص في قوارير من البولي بروبيلين بمقدار 50 ميكرولتر لكل قارورة، ثم جمّده عند -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر. إذا لزم الأمر، خزّنه عند 2-8 درجة مئوية لمدة تصل إلى 8 ساعات قبل تقسيمه إلى حصص/تجميده. لا تترك المعيار المُعاد تكوينه في درجة حرارة الغرفة. 3. تحضير المعايير للتحليل: أ. حضّر معيارًا بتركيز 8000 بيكوغرام/مل من المحلول القياسي المركز. رجّ القارورة جيدًا للمزج. (انظر تعليمات التخفيف في شهادة التعليمات/التحليل). ب. أضف 300 ميكرولتر من مخفف المعايرة إلى 6 أنابيب. ضع عليها ملصقات توضح تركيزاتها: 4000 بيكوغرام/مل، 2000 بيكوغرام/مل، 1000 بيكوغرام/مل، 500 بيكوغرام/مل، 250 بيكوغرام/مل، و125 بيكوغرام/مل. ج. قم بإجراء تخفيفات متسلسلة بإضافة 300 ميكرولتر من كل معيار إلى الأنبوب التالي مع الخلط جيدًا بين كل عملية نقل. يُستخدم مخفف المعايرة كمعيار صفري (0 بيكوغرام/مل). تحضير الكاشف العامل (ملاحظة: حضانة كواشف البيوتين/ستربتافيدين في خطوة واحدة). أضف الحجم المطلوب من جسم الكشف المضاد إلى مخفف المعايرة. في غضون 15 دقيقة قبل الاستخدام، أضف الكمية المطلوبة من كاشف الإنزيم، ثم اخلط جيدًا. للاطلاع على التخفيفات الموصى بها، راجع تعليمات/شهادة التحليل الخاصة بالدفعة. لتحضير صفيحة كاملة ذات 96 بئرًا، جهّز 12 مل من كاشف العمل. تخلص من أي كمية متبقية من كاشف العمل بعد الاستخدام. إجراء التحليل بالتفصيل: 1. غطِّ الآبار الدقيقة بـ 100 ميكرولتر لكل بئر من الأجسام المضادة المُثبِّتة المخففة في محلول التغطية. للاطلاع على التخفيف الموصى به لتغطية الأجسام المضادة، راجع التعليمات/شهادة التحليل الخاصة بالدفعة. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 2. اسحب المحلول من الآبار واغسلها 3 مرات باستخدام 300 ميكرولتر/بئر على الأقل من محلول الغسل. بعد الغسلة الأخيرة، اقلب الصفيحة وجففها بورق ماص لإزالة أي محلول متبقٍ. 3. احجب الصفائح باستخدام 200 ميكرولتر/بئر على الأقل من مخفف التحليل. حضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. 4. اسحب المحلول واغسلها كما في الخطوة 2. 5. حضّر تخفيفات المعيار والعينة في مخفف التحليل. راجع "تحضير المعايير والتعامل معها". ٦. اسحب ١٠٠ ميكرولتر من كل معيار وعينة وعنصر تحكم باستخدام ماصة وضعها في الآبار المناسبة. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. ٧. اسحب المحلول واغسله كما في الخطوة ٢، ولكن مع إجراء ٥ عمليات غسل. ٨. أضف ١٠٠ ميكرولتر من كاشف العمل (جسم مضاد للكشف + كاشف SAv-HRP) إلى كل بئر. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اسحب المحلول واغسله كما في الخطوة ٢، ولكن مع إجراء ٧ عمليات غسل. ملاحظة: في خطوة الغسل الأخيرة هذه، انقع الآبار في محلول الغسل لمدة ٣٠ ثانية إلى دقيقة واحدة لكل غسلة. ١٠. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول الركيزة إلى كل بئر. حضّن الصفيحة (بدون غطاء) لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ١١. أضف ٥٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر. ١٢. اقرأ الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر خلال ٣٠ دقيقة من إيقاف التفاعل. إذا كان تصحيح الطول الموجي متاحًا، فاطرح الامتصاص عند ٥٧٠ نانومتر من الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر. ملخص إجراء التحليل: ١. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة المخففة إلى كل بئر. حضّن طوال الليل عند ٤ درجات مئوية. ٢. اسحب المحلول واغسل ٣ مرات. ٣. لوحات الحجب: أضف ٢٠٠ ميكرولتر من مخفف التحليل إلى كل بئر. حضّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٤. اسحب المحلول واغسل ٣ مرات. ٥. أضف ١٠٠ ميكرولتر من المعيار أو العينة إلى كل بئر. حضّن لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. ٦. اسحب المحلول واغسل ٥ مرات. ٧. أضف ١٠٠ ميكرولتر من كاشف العمل (الأجسام المضادة للكشف + SAv-HRP) إلى كل بئر. حضّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٨. اسحب المحلول واغسله ٧ مرات (مع نقع لمدة ٣٠ ثانية إلى دقيقة واحدة). ٩. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول الركيزة إلى كل بئر. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ١٠. أضف ٥٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر. اقرأ عند ٤٥٠ نانومتر خلال ٣٠ دقيقة مع تصحيح الطول الموجي عند ٥٧٠ نانومتر. حساب النتائج: احسب متوسط ​​الامتصاص لكل مجموعة من المعايير المكررة، وعينات التحكم، والعينات. اطرح متوسط ​​امتصاص المعيار الصفري من كل منها. ارسم منحنى المعايرة على ورق رسم بياني لوغاريتمي، مع تركيز TGF-β1 على المحور السيني والامتصاص على المحور الصادي. ارسم منحنى أفضل مطابقة يمر بنقاط المعيار. لتحديد تركيز TGF-β1 للعينات المجهولة، أوجد متوسط ​​قيمة امتصاص العينة المجهولة على المحور الصادي وارسم خطًا أفقيًا إلى منحنى المعايرة. عند نقطة التقاطع، ارسم خطًا رأسيًا على المحور السيني واقرأ تركيز TGF-β1. إذا كانت العينات مخففة، اضرب تركيز TGF-β1 في عامل التخفيف. يمكن أيضًا استخدام معالجة البيانات الحاسوبية، باستخدام تحليل الانحدار اللوغاريتمي. الخصوصية والتفاعل المتبادل: تم اختبار العوامل التالية في اختبار BD OptEIA™ عند تركيز ≥ 10 نانوغرام/مل، ولم يتم تحديد أي تفاعل متبادل (قيمة ≥ 4 بيكوغرام/مل). الإنسان المؤتلف: IL-1α، IL-1β، IL-2، IL-3، IL-4، IL-5، IL-7، IL-8، IL-9، IL-10، IL-11، IL-12 (p40)، IL-12 (p70)، IL-13، IL-15، G-CSF، GM-CSF، IFN-γ، CD23، Lymphotactin، MIP-1α، MIP-1β، MCP-2، NT-3، PDGF-AA، SCF، TNF، LT-α (TNF-β)، VEGF Recombinant Mouse: IL-1β، IL-2، IL-3، IL-4، IL-5، IL-6، IL-7، IL-9، IL-10، IL-12 (ص70)، IL-15، IFN-γ، GM-CSF، TCA3، TNF (فئران مُعاد تركيبها): IL-2، IL-4، IL-10، GM-CSF، IFN-γ، TNF. أخرى: IL-10 الفيروسي (1 نانوغرام/مل)، TNF الأرنب. قيود الإجراء: • يجب تخفيف العينات التي تُظهر قيم امتصاص أعلى من منحنى المعايرة باستخدام مُخفف المعايرة القياسي وإعادة تحليلها. • لم يتم التحقق بشكل كامل من تداخل مستقلبات الدواء أو المستقبلات الذائبة أو بروتينات الربط الأخرى في العينات. لا يمكن استبعاد احتمالية التداخل. • مجموعات BD OptEIA™ مُصممة للاستخدام كوحدة متكاملة. لا تخلط الكواشف من دفعات مجموعات مختلفة. لا يُنصح باستخدام كواشف من مُصنّعين آخرين في هذه المجموعة.
إشعارات المنتج: للحصول على تدريب عبر الإنترنت حول تقنيات ELISA لمجموعة BD OptEIA™، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/OptEIA/downloads.shtml. يجب تخفيف العينات التي تُظهر قيم امتصاص أعلى من منحنى المعايرة باستخدام مُخفف المعايرة القياسي وإعادة تحليلها. لم يتم التحقق بشكل كامل من تداخل مستقلبات الأدوية أو المستقبلات الذائبة أو بروتينات الربط الأخرى في العينات. لا يمكن استبعاد احتمال حدوث تداخل. صُممت مجموعات BD OptEIA™ للاستخدام كوحدة متكاملة. لا تخلط الكواشف من دفعات مختلفة من المجموعة. لا يُنصح باستخدام كواشف من شركات مصنعة أخرى في هذه المجموعة. قد تكون الكواشف التي تحتوي على مواد حافظة سامة في حالة الابتلاع أو الاستنشاق أو ملامسة الجلد. تعامل مع جميع عينات المصل والبلازما وفقًا لإرشادات NCCLS لمنع انتقال العدوى المنقولة بالدم. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. ProClin هي علامة تجارية لشركة Rohm and Haas.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : لا شيء : غير متوفر : غير متوفر