BD، 570908، مجموعة BD® OMICS-Guard لحفظ العينات

التطبيق: تجارب متعددة الأوميات للخلايا المفردة على منصة BD Rhapsody™ (تم اختبارها أثناء التطوير)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: يُعدّ محلول BD® OMICS-Guard لحفظ العينات كاشفًا فريدًا يحافظ على كلٍّ من الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) والبروتينات في العينات البيولوجية دون الحاجة إلى استخدام طرق الربط المتقاطع التقليدية أو المثبتات القاسية. وقد ثبتت فعالية محلول BD® OMICS-Guard في حفظ العينات البيولوجية لدراسات البروتينات والنسخ الجينية، مما يسمح بالكشف عن البروتينات المستهدفة على سطح الخلايا أو داخلها دون التأثير على بيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية. يمكن استخدام محلول BD® OMICS-Guard كمنتج مستقل لحفظ الخلايا المعزولة والدم الكامل والأنسجة لمدة تصل إلى 72 ساعة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية قبل العديد من تطبيقات الخلايا المفردة (انظر أدناه)، أو بالاشتراك مع مجموعة BD Rhapsody™ Intracellular AbSeq Buffer Kit، التي تسمح بتخزين الخلايا لمدة تصل إلى 24 ساعة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية قبل عملية النفاذية. للاستخدام المستقل، دون الحاجة إلى مجموعة BD Rhapsody™ Intracellular AbSeq Buffer Kit، يمكن معالجة العينات المحفوظة واستخدامها في قياس التدفق الخلوي، أو في العديد من عمليات التحليل الجينومي المتعدد للخلايا المفردة، بما في ذلك تحليل النسخ الكامل، وتحليل الجينات المستهدفة، أو تحديد خصائص مستقبلات الخلايا التائية/الخلايا البائية كاملة الطول. للحصول على قائمة محدثة بالتطبيقات المدعومة، يُرجى التواصل مع أخصائي التطبيقات الميدانية (FAS) في منطقتك. كما يتوفر خيار إضافة تحليل بروتينات سطح الخلية مع هذه التحليلات باستخدام كواشف BD® AbSeq Antibody-Oligo. يتميز التلوين باستخدام BD® AbSeq Antibody-Oligo بالمرونة، حيث يمكن تلوين الخلايا قبل الحفظ أو بعده. في حال تم التلوين باستخدام BD® AbSeq بعد الحفظ، يلزم إضافة مُحسِّن BD® AbSeq للحصول على أفضل النتائج. للاستخدام مع مجموعة BD Rhapsody™ Intracellular AbSeq Buffer Kit للكشف عن mRNA والبروتينات داخل الخلايا، يمكن نفاذ الخلايا المحفوظة بأمان باستخدام Perm Buffer من مجموعة BD Rhapsody™ Intracellular AbSeq Buffer Kit دون خطر فقدان الجزيئات داخل الخلايا، مع السماح في الوقت نفسه لـ Intracellular BD® AbSeq Antibody-Oligos بالوصول إلى داخل الخلية.
التحضير والتخزين: خزّن جميع مكونات المجموعة في درجة حرارة تتراوح بين 2 و 8 درجات مئوية. لا تجمدها.
إجراءات التحليل الموصى بها: تحتوي إجراءات التحليل الموصى بها على: ألبومين مصل البقر (BSA). استخدم بروتوكولات السلامة المختبرية القياسية. اقرأ وافهم صحائف بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع المواد الكيميائية. للحصول على صحائف بيانات السلامة، تفضل بزيارة regdocs.bd.com أو تواصل مع الدعم الفني لشركة BD Biosciences على scomix@bd.com. تحذير: تُعتبر جميع العينات البيولوجية والمواد الملامسة لها مواد خطرة بيولوجيًا. تعامل معها كما لو كانت قادرة على نقل العدوى وتخلص منها مع اتخاذ الاحتياطات المناسبة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تستخدم الفم أبدًا في عملية السحب بالماصة. ارتدِ ملابس واقية مناسبة ونظارات واقية وقفازات. لتحليل CITE-seq داخل الخلايا، أضف محلول حفظ العينات BD® OMICS-Guard إلى الخلايا المترسبة وأعد تعليق الخلايا برفق باستخدام الماصة. احفظ الخلايا عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة تتراوح من 5 دقائق إلى 24 ساعة لاستخدامها مع تحليل CITE-seq داخل الخلايا باستخدام بروتوكول BD® AbSeq. بعد الحفظ، استخدم جهاز طرد مركزي ذو دلو متأرجح، وقم بترسيب الخلايا عند 800 × g لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. أزل السائل الطافي بعناية وتخلص منه دون تحريك الراسب. راجع بروتوكول BD Rhapsody™ System Single-Cell Labeling with BD® AbSeq Ab-Oligos for Intracellular CITE-seq Protocol 23-24464 للاطلاع على تفاصيل سير العمل الموصى به. للاستخدام المستقل: 1. معلق الخلايا المفردة: الاستخدام الموصى به: من 10^4 إلى 10^7 خلية لكل 1 مل من محلول BD® OMICS-Guard Buffer. بروتوكول حفظ العينة: اجمع الخلايا المفردة/الخلايا المفردة المفككة في معلق وقم بالطرد المركزي عند 400 × g لمدة 5 دقائق. 1. تخلص من السائل الطافي وأعد تعليق الخلايا في محلول BD® OMICS-Guard Buffer كما هو موصى به أعلاه. ملاحظة: تعامل مع الأنابيب/الزجاجة التي تحتوي على المحلول في ظروف معقمة. يمكن تخزين الخلايا في أنابيب Eppendorf Tubes® أو ما يعادلها. ٢. ضع الخلايا في درجة حرارة ٤ درجات مئوية لمدة تصل إلى ٧٢ ساعة. ٣. بعد التخزين، قم بتدوير الخلايا بسرعة ٨٠٠ × g لمدة ٥ دقائق، ثم تخلص من السائل الطافي لإزالة محلول BD® OMICS-Guard. لا حاجة إلى غسل إضافي. ٤. أعد تعليق الخلايا في المحلول المطلوب للتطبيقات اللاحقة. ثانيًا: الأنسجة. الاستخدام الموصى به: من ٣٠ إلى ٥٠ ملغ من الأنسجة لكل ٢٠ مل من محلول BD® OMICS-Guard. بروتوكول حفظ العينة: ١. قسّم الأنسجة إلى قطع وضعها فورًا في محلول BD® OMICS-Guard. ملاحظة: تعامل مع الأنابيب/الزجاجة المحتوية على المحلول في ظروف معقمة. ٢. ضع الخلايا في درجة حرارة ٤ درجات مئوية لمدة تصل إلى ٧٢ ساعة. ٣. بعد التخزين، قم بتفكيك الأنسجة بالطريقة المطلوبة لتطبيق الخلية المفردة، ثم قم بتدوير الخلايا بسرعة ٨٠٠ × g لمدة ٥ دقائق، ثم تخلص من السائل الطافي لإزالة محلول BD® OMICS-Guard. لا حاجة إلى غسل إضافي. ٤. أعد تعليق الخلايا في المحلول المنظم المطلوب للتطبيقات اللاحقة. ثالثًا: الدم الكامل. الاستخدام الموصى به: نسبة ١:١ من الدم الكامل (مع EDTA) ومحلول BD® OMICS-Guard المنظم. بروتوكول حفظ العينة: ١. اجمع الدم الكامل باستخدام EDTA كمضاد للتخثر، واخلطه مع نفس الحجم من محلول BD® OMICS-Guard المنظم عن طريق قلبه ١٠ مرات. ملاحظة: قد يكون من الممكن استخدام مضادات تخثر أخرى، على الرغم من عدم اختبارها. ٢. ضع خليط الدم الكامل ومحلول BD® OMICS-Guard المنظم في درجة حرارة ٤ درجات مئوية لمدة تصل إلى ٧٢ ساعة. ٣. بعد التخزين، استخدم مجموعة استنزاف خلايا الدم الحمراء المغناطيسية لإزالة خلايا الدم الحمراء وعزل الخلايا الليمفاوية أحادية النواة (PBMCs) والخلايا المحببة. ٤. قم بتدوير الخلايا المعزولة عند ٢٠٠ × جم لمدة ٧ دقائق لترسيب الخلايا النواة وإزالة السائل الطافي الذي يحتوي على الصفائح الدموية. ٥. أعد تعليق الكريات البيضاء في المحلول المنظم المطلوب للتطبيقات اللاحقة. بالنسبة لتطبيقات CITE-seq التي تستخدم BD® AbSeq Antibody-Oligos بعد حفظ العينة، يُنصح بشدة باستخدام مجموعة BD® AbSeq Enhancer Kit (رقم المنتج 570750). يمكن إضافة مُحسِّنات BD® AbSeq Enhancers إلى خطوة كاشف BD Fc Block™ أو استخدامها بشكل منفصل قبل تلوين الخلايا المفردة باستخدام BD® AbSeq Antibody-Oligos. ملاحظة: لا يتطلب التلوين باستخدام BD® AbSeq Antibody-Oligos قبل حفظ العينة أو التلوين باستخدام مجموعة BD® Single-Cell Multiplexing Kit فقط بعد حفظ العينة استخدام مجموعة BD® AbSeq Enhancer Kit. بروتوكول تلوين معلقات الخلايا (يمكن أن يشمل خلايا من الأنسجة أو الدم الكامل) 1. حضّر كاشف Human BD Fc Block™ كما يلي: المكون الحجم/العينة (ميكرولتر) الحجم/العينة مع الزيادة (ميكرولتر) محلول التلوين 65 78 كاشف Human BD Fc Block™ 5 6 الإجمالي 70 84 2. أضف 10 ميكرولتر من كل مُحسِّن من مُحسِّنات BD® AbSeq الثلاثة إلى 70 ميكرولتر من خليط كاشف Human BD Fc Block™، ليصبح الحجم الإجمالي المُضاف 30 ميكرولتر. ملاحظة: يجب أن يكون الحجم النهائي لخليط كاشف Human BD Fc Block™ ومُحسِّنات BD® AbSeq هو 100 ميكرولتر. 3. أضف 100 ميكرولتر من خليط Fc Block/AbSeq Enhancer النهائي إلى الخلايا المُرَسَّبة، ثم أعد تعليق الخلايا المُرَسَّبة. ٤. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة ١٠ دقائق. ٥. أضف مزيج BD® AbSeq Antibody-Oligo وفقًا لبروتوكولات تلوين AbSeq القياسية (١٠٠ ميكرولتر من محلول BD® AbSeq Antibody-Oligo الرئيسي للتلوين بتركيز ٢X، حضّن لمدة ٣٠-٦٠ دقيقة على الجليد). راجع بروتوكول نظام BD Rhapsody™ لتلوين الخلايا المفردة باستخدام BD® AbSeq Ab-Oligos (من ١ إلى ٤٠ plex) (معرف المستند: ٢٣-٢٤٢٦٢). ٦. لمستخدمي نظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™، قم بتمديد وقت التحلل في عملية التقاط الخلايا المفردة من دقيقتين إلى ٥ دقائق للحصول على أفضل النتائج للخلايا أو الأنسجة أو الدم الكامل الذي تم حفظه مسبقًا في محلول BD® OMICS-Guard Buffer.
إشعارات المنتج: للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.