BD، 572178، لوحة بروتينات الخلايا التائية BD® OMICS-One

التفاعل: بشري (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: تسلسل الحمض النووي للخلايا المفردة من الطرف 3' (مؤهل)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
محلول التخزين: مسحوق مجفف بالتجميد يحتوي على BSA و ≤ 0.25% أزيد الصوديوم.
الوصف: تتكون لوحة بروتينات الخلايا التائية BD® OMICS-One من 30 نوعًا مختلفًا من الأجسام المضادة النوعية ضد مؤشرات الخلايا التائية الرئيسية في أنبوب واحد. صُممت هذه اللوحة خصيصًا للعمل على نظام BD Rhapsody™، وقد تم اختبارها لضمان تكاملها التام مع مجموعة أدوات التحليل التالية: تحليل النسخ الكامل (WTA) من BD Rhapsody™، وتحليل الحمض النووي الريبوزي المرسال المستهدف، ومجموعة BD® لتحليل الخلايا المفردة المتعددة (SMK)، وتحليل تسلسل الحمض النووي الريبوزي المرسال داخل الخلايا (IC-AbSeq) من BD®، وتحليل BD Rhapsody™ متعدد الأوميات لمستقبلات الخلايا التائية/مستقبلات الخلايا البائية (TCR/BCR Next) للبشر. تم ربط كل جسم مضاد على حدة بسلسلة قليلة النوكليوتيدات تحتوي على تسلسل باركود خاص بالجسم المضاد، محاط بذيل متعدد الأدينين (polyA) في الطرف 3' وموقع ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الطرف 5'. للسماح بتصحيح أخطاء التسلسل والتحديد الفريد، تم توليد جميع تسلسلات الباركود AbSeq حاسوبيًا بأقل تشابه تسلسلي مع الجينوم البشري، وببنية ثانوية متوقعة منخفضة، وبمسافة هامينغ عالية ضمن مجموعة الأجسام المضادة والأوليغونوكليوتيدات من BD. يسمح ذيل البولي أدينين للأوليغونوكليوتيد بالتقاط تسلسل الباركود بواسطة خرزات BD Rhapsody™ المحسّنة لالتقاط الخلايا. يتيح مقبض PCR 5' توليد مكتبة تسلسل فعّالة لمنصات التسلسل المختلفة. يوجد كل جسم مضاد على حدة بتركيز مثالي ضمن مجموعة 30-plex لتمكين دقة فائقة في تحديد الهدف والخلايا. صُممت لوحة بروتينات الخلايا التائية بتقنية SMART. تساعد تقنية SMART على خفض تكلفة التسلسل مع زيادة دقة البيانات عن طريق إضعاف الأجسام المضادة التي تستهدف المؤشرات الأولية عالية التعبير، وعن طريق السماح بإعادة تخصيص قراءات التسلسل للمؤشرات المعبر عنها بمستويات أقل. بفضل تقنية SMART، يمكن قياس المؤشرات ذات التعبير المنخفض دون الحاجة إلى إجراء تسلسل أعمق وتكاليف باهظة. المؤشران النوعيان اللذان تم قياسهما في لوحة بروتينات الخلايا التائية هما CD4 وCD44.
التحضير والتخزين: يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. 1. أخرج أنبوب لوحة بروتين الخلايا التائية BD® OMICS-One من الكيس المعدني واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. 2. تأكد من وجود الراسب في قاع الأنبوب. إذا لم يكن كذلك، فقم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب. 3. أضف 35 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى قاع الأنبوب واترك الأجسام المضادة لتذوب لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. انقل الأجسام المضادة المذابة إلى الثلج حتى تصبح الخلايا جاهزة للتلوين. ملاحظة: أعد إذابة الأجسام المضادة مباشرة قبل تلوين الخلايا. قد يؤدي حضانة الأجسام المضادة المذابة لفترة طويلة إلى زيادة الخلفية غير النوعية. ٥. بالنسبة لتقنية BD® AbSeq Ab-Oligo drop-in التي تحتوي على ٦٠ نسخة أو أقل، حضّر مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix في أنبوب LoBind سعة ١٫٥ مل على الثلج. ملاحظة: بالنسبة لتقنية drop-in التي تحتوي على أكثر من ٦٠ نسخة، تواصل مع الدعم الفني لإجراء الحسابات. للتوسيم التسلسلي باستخدام علامات العينات أو بدونها، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون عينة 1 (ميكرولتر) عينة 1 + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 140 – (2.0 × N) 182 – (2.6 × N) 364 – (5.2 × N) الإجمالي 140 182 364 للتوسيم المشترك مع علامات العينات، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم المباشر كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) عينة واحدة + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 120 – (2.0 × N) 156 – (2.6 × N) 312 – (5.2 × N) الإجمالي 120 156 312 * N = عدد الأجسام المضادة المضافة. N = 0 إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مضافة. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. 6. امزج مزيج BD® AbSeq الرئيسي للتوسيم باستخدام الماصة. قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في القاع، ثم أعد الأنبوب إلى الثلج. 7. للوسم التسلسلي باستخدام علامات العينة أو بدونها، أضف لكل عينة 140 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم (المكون من قطرات) إلى الأنبوب الذي يحتوي على 35 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا التائية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. للوسم المشترك باستخدام علامات العينة، أضف لكل عينة 120 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم (المكون من قطرات) و20 ميكرولتر من علامة العينة إلى الأنبوب الذي يحتوي على 35 ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا التائية المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى 175 ميكرولتر. 8. امزج الخليط باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب، ثم أعد الأنبوب إلى الثلج. 9. قم بالطرد المركزي للخلايا عند 400 × g لمدة 5 دقائق. في حال استخدام مُثبِّط مستقبلات Fc، انتقل إلى الخطوة 10. وإلا، فانتقل إلى الخطوة 11. 10. (اختياري) بالنسبة للعينات التي تحتوي على خلايا نخاعية وخلايا ليمفاوية بائية، توصي شركة BD Biosciences بحجب الإشارات الإيجابية الكاذبة غير النوعية التي تتوسطها مستقبلات Fc باستخدام مُثبِّط مستقبلات Fc البشري من BD (رقم المنتج 564220). أ. لإجراء عملية الحجب، اسحب مزيج مُثبِّط مستقبلات Fc الرئيسي باستخدام ماصة وضعها في أنبوب LoBind جديد سعة 1.5 مل موضوع على الثلج: _________________________________________________________________________________ المكون عينة واحدة (ميكرولتر)* عينة واحدة + زيادة 20% (ميكرولتر) مصل جنيني بقري† (رقم المنتج 554656) 20.0 24.0 مُثبِّط مستقبلات Fc‡ (رقم المنتج 564220) 5.0 6.0 الإجمالي 25.0 30.0 * يكفي لما يصل إلى مليون خلية. لحجب المزيد من الخلايا، اضبط الحجم. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. ب. امزج مزيج Fc Block MasterMix باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة. ضعه على الثلج. ج. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. د. أعد تعليق الخلايا في 25 ميكرولتر من مزيج Fc Block MasterMix. هـ. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة (من 15 إلى 25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق. و. أضف 175 ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 إلى معلق الخلايا. امزج باستخدام الماصة، ثم انتقل إلى الخطوة 12. 11. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. أضف 25 ميكرولتر من محلول التلوين (FBS) إلى 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq الرئيسي المُحضر في الخطوة 8، ليصل الحجم الإجمالي إلى 200 ميكرولتر. أعد تعليق الخلايا في هذا الحجم الإجمالي. امزج المحلول جيدًا باستخدام الماصة. 12. انقل الخلايا مع محلول BD® AbSeq الرئيسي إلى أنبوب فالكون جديد من البوليسترين سعة 5 مل. 13. لوّن الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة. 14. أضف 3-4 مل من محلول التلوين (FBS) إلى الخلايا المُلَوَّنة وامزجها جيدًا باستخدام الماصة. 15. افصل الأنبوب بالطرد المركزي عند 400 × g لمدة 5 دقائق. 16. افتح غطاء الأنبوب واقلبه لتفريغ السائل الطافي في حاوية النفايات الخطرة بيولوجيًا. أبقِ الأنبوب مقلوبًا وجففه برفق بقطعة قماش خالية من الوبر لإزالة أي سائل متبقٍ من حافة الأنبوب. ١٧. كرر الخطوات من ١٤ إلى ١٦ مرتين إضافيتين ليصبح المجموع ثلاث غسلات. ١٨. أعد تعليق راسب الخلايا المغسولة في ٦٢٠ ميكرولتر من محلول العينة البارد من كاشف خرطوشة BD Rhapsody™ المحسن V3 (رقم الكتالوج ٦٦٧٠٥٢)، ثم تابع عملية التقاط الخلايا المفردة مع الغسل على الخرطوشة الموضح في الخطوات الفرعية من أ إلى ج. راجع بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT (معرف المستند ٢٣-٢٤٢٥٢) أو بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام BD Rhapsody™ HT Xpress (معرف المستند ٢٣-٢٤٢٥٣) لمزيد من التفاصيل. ملاحظة: قم بإجراء الغسل على الخرطوشة بعد استقرار الخلايا (حضانة لمدة ٨ دقائق) كما يلي: أ. في قسم البروتوكول الخاص بـ "تحميل الخلايا في خرطوشة BD Rhapsody™ ذات 8 مسارات"، بعد تحميل الخلايا، حضّن الخرطوشة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 8 دقائق. ب. ضع الخرطوشة على جهاز BD Rhapsody™ HT Xpress وقم بتنفيذ العمليات التالية: _____________________________________________________________ المادة المراد تحميلها الحجم (ميكرولتر) مسار واحد وضع الماصة هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل ج. (اختياري) قم بخطوة الماسح الضوئي: تحميل الخلايا مسح ضوئي، إذا كنت تستخدم نظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (معرف المستند 23-24252). لا حاجة للتأخير لمدة 8 دقائق قبل المسح الضوئي. تحذير: تُعتبر جميع العينات والمواد البيولوجية خطرة بيولوجيًا. تعامل مع العينة بحذر كما لو كانت قادرة على نقل العدوى، وتخلص منها باتباع الاحتياطات اللازمة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تستخدم الفم أبدًا في عملية السحب. ارتدِ ملابس واقية مناسبة، ونظارات واقية، وقفازات. قائمة بجميع أنواع الأجسام المضادة البشرية الثلاثين المضمنة في لوحة BD® OMICS-One T-Cell: _____________________________________________________________________________ النوع المستنسخ معرف الأوليغونوكليوتيد تسلسل الباركود BD® AbSeq CD103 Ber-ACT8 AHS0001 AAATAGTATCGAGCGTAGTTAAGTTGCGTAGCCGTT CD137 4B4-1 AHS0003 TGACAAGCAACGAGCGATACGAAAGGCGAAATTAGT CD45RA HI100 AHS0009 AAGCGATTGCGAAGGGTTAGTCAGTACGTTATGTTG CD69 FN50 AHS0010 CAATAACGGGTCATAGTAAGTCGCGAGTAAGAGGGC CD278 DX29 AHS0012 ATAGTCCGCCGTAATCGTTGTGTCGCTGAAAGGGTT CD134 (OX40) ACT35 AHS0013 GGTGTTGGTAAGACGGACGGAGTAGATATTCGAGGT CD279 (PD-1) EH12.1 AHS0014 ATGGTAGTATCACGACGTAGTAGGGTAATTGGCAGT CD366 (TIM-3) 7D3 AHS0016 TAGGTAGTAGTCCCGTATATCCGATCCGTGTTGTTT CD223 (Lag3) T47-530 AHS0018 CGGCATGAATTAGGCGAGACTTAGTATACGAGCTGG CD95 (Fas) DX2 AHS0023 GGCCCGTTAGAGTTGGTATCCGTATGAAGGTTAGCT CD25 2A3 AHS0026 AGTTGTATGGGTTAGCCGAGAGTAGTGCGTATGATT CD127 هيل-7R-M21 AHS0028 AGTTATTAGGCTCGTAGGTATGTTTAGGTTATCGCG CD183 1C6/CXCR3 AHS0031 AAAGTGTTGGCGTTATGTGTTCGTTAGCGGTGTGGG CD4 SK3 AHS0032 TCGGTGTTATGAGTAGGTCGTCGTGCGGTTTGATGT CD196 (CCR6) 11A9 AHS0034 ACGTGTTATGGTGTTGTTCGAATTGTGGTAGTCAGT CD45RO UCHL1 AHS0036 TGAGAGGTTATTGGGCGTATGACTTCGGTGATTGTG CD194 (CCR4) 1G1 AHS0038 AATATTAGTGGGTCCTCGCGTTGGCCGGTTGTTAGT CD62L DREG-56 AHS0049 ATGGTAAATATGGGCGAATGCGGGTTGTGCTAAAGT CD272 J168-540 AHS0052 GTAGGTTGATAGTCGGCGATAGTGCGGTTGAAAGCT CD154 TRAP1 AHS0077 TAAGAGGTAAGTGCATTCGGGTATAGGCGTGATTTG CD357 (GITR) V27-580 AHS0104 TCTGTGTGTCGGGTTGAATCGTAGTGAGTTAGCGTG CD28 L293 AHS0138 TTGTTGAGGATACGATGAAGCGGTTTAAGGGTGTGG TCRgd 11F2 AHS0142 CTCGTGGGTTAGGCTTGATCGTAGTTATGTATGGTT CD44 L178 AHS0167 GTGATTGATTAGGACAGTTCGTTGCTTAGTAGTGGG TCR Va24-Ja18 6B11 AHS0175 TTCTGGTTCGGTTGAGCTACTAATTTCGTTGGATGG CD161 (KLRB1) HP-3G10 AHS0205 TTTAGGACGATTAGTTGTGCGGCATAGGAGTGTTC CD8 SK1 AHS0228 AGGACATAGAGTAGGACGAGTAGGCTTAAATTGCT CD3 UCHT1 AHS0231 أجكتاججتتاتكجكاجتجتاكجتجاجتكج CD197 (CCR7) 2-L1-A AHS0273 AATGTGTGATCGGCAAAGGGTTCTCGGGTTAATATG TIGIT tgMab-2 AHS0411 AGAGGTTTAGTCAAGGTCGTGCGTATAGTTCAGGT
إشعارات المنتج: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. يُرجى الرجوع إلى https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics للاطلاع على البروتوكولات الفنية. خضعت عملية الإنتاج لاختبارات صارمة وتدقيق دقيق لضمان إنتاج مُقترن عالي الجودة بأداء ثابت ونشاط ارتباط نوعي. مع ذلك، لم تُجرَ اختبارات التحقق على جميع دفعات المُقترن. انتقل إلى https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/ للوصول إلى ملفات مرجع AbSeq بصيغة FASTA لتحليلات المعلوماتية الحيوية. تحذير: يُنتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. اتبع الإرشادات المحلية والولائية عند التخلص من النفايات الخطرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. للاطلاع على بيانات السلامة (SDS)، يُرجى زيارة http://regdocs.bd.com.