BD، 572435، لوحة بروتينات الخلايا النخاعية/APC من BD® OMICS-One

التفاعل: بشري (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: تسلسل الحمض النووي للخلايا المفردة من الطرف 3' (مؤهل)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: تتكون لوحة بروتينات الخلايا العارضة للمستضد/الخلايا النخاعية BD® OMICS-One من 30 نوعًا مختلفًا من الأجسام المضادة النوعية ضد المؤشرات الرئيسية للخلايا العارضة للمستضد/الخلايا النخاعية في أنبوب واحد. صُممت هذه اللوحة ووُضعت خصيصًا للعمل على نظام BD Rhapsody™، وقد تم اختبارها لضمان عملها بسلاسة جنبًا إلى جنب مع اختبار تحليل النسخ الكامل (WTA) من BD Rhapsody™، واختبار mRNA المستهدف، ومجموعة BD® لتحليل الخلايا المفردة المتعددة (SMK)، واختبار BD® لتسلسل CITE-seq داخل الخلايا (IC-AbSeq)، واختبار BD Rhapsody™ TCR/BCR Next متعدد الأوميات للخلايا البشرية. تم ربط كل جسم مضاد على حدة بسلسلة قليلة النوكليوتيدات تحتوي على تسلسل باركود خاص بالجسم المضاد، محاط بذيل متعدد الأدينين (polyA) في الطرف 3' وموقع ارتباط بادئ تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الطرف 5'. تم توليد جميع تسلسلات الباركود AbSeq حاسوبيًا بأقل تشابه تسلسلي مع الجينوم البشري، وتتميز ببنية ثانوية متوقعة منخفضة، ومسافة هامينغ عالية ضمن مجموعة الأجسام المضادة والأوليغونوكليوتيدات من BD، مما يسمح بتصحيح أخطاء التسلسل ورسم خرائط فريدة. يسمح ذيل البولي أدينين للأوليغونوكليوتيد بالتقاط تسلسل الباركود بواسطة خرزات BD Rhapsody™ المحسّنة لالتقاط الخلايا. يتيح مقبض PCR 5' توليد مكتبات بكفاءة لمنصات التسلسل المختلفة. يوجد كل جسم مضاد على حدة بتركيز مثالي ضمن مجموعة 30-plex لتمكين دقة فائقة في تحديد الهدف والخلايا. صُممت لوحة بروتينات الخلايا العارضة للمستضد/الخلايا النخاعية بتقنية SMART. تساعد تقنية SMART على خفض تكلفة التسلسل مع زيادة دقة البيانات عن طريق إضعاف الأجسام المضادة التي تستهدف المؤشرات الأولية عالية التعبير، والسماح بإعادة توجيه قراءات التسلسل إلى المؤشرات ذات التعبير المنخفض. بفضل تقنية SMART، يمكن تحديد كمية المؤشرات منخفضة التعبير دون الحاجة إلى إجراء تسلسل أعمق وتكبد تكلفة تسلسل عالية. الخاصيتان اللتان تم إضعافهما في لوحة بروتين الخلايا النخاعية/APC هما CD45 و HLA-DR.
التحضير والتخزين: يُحفظ في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد ومُعايرًا مسبقًا. 1. أخرج أنبوب لوحة بروتينات الخلايا النخاعية/APC® OMICS-One من الكيس المعدني واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. 2. تأكد من وجود الراسب في قاع الأنبوب. إذا لم يكن كذلك، فقم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب. 3. أضف 35 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى قاع الأنبوب واترك الأجسام المضادة لتذوب لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. ضع الأجسام المضادة المذابة على الثلج حتى تصبح الخلايا جاهزة للتلوين. ملاحظة: أعد إذابة الجسم المضاد مباشرةً قبل تلوين الخلايا. قد يؤدي حضانة الجسم المضاد المذاب لفترة طويلة إلى زيادة الخلفية غير النوعية. ٥. بالنسبة لتقنية BD® AbSeq Ab-Oligo drop-in التي تحتوي على ٦٠ نسخة أو أقل، حضّر مزيج BD® AbSeq labeling MasterMix في أنبوب LoBind سعة ١٫٥ مل على الثلج. ملاحظة: بالنسبة لتقنية drop-in التي تحتوي على أكثر من ٦٠ نسخة، تواصل مع الدعم الفني لإجراء الحسابات. في حالة استخدام الوسم التسلسلي مع علامات العينات أو بدونها، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم للإضافات المباشرة كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) 1 عينة + 2 عينة + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 140 – (2.0 × N) 182 – (2.6 × N) 364 – (5.2 × N) الإجمالي 140 182 364 في حالة استخدام الوسم المشترك مع علامات العينات، حضّر مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم للإضافات المباشرة كما يلي: ____________________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر) عينة واحدة + عينتان + زيادة 30% (ميكرولتر) زيادة 30% (ميكرولتر) لكل BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 2.6 5.2 إجمالي BD® AbSeq Ab-Oligo 2.0 × N* 2.6 × N 5.2 × N FBS † (رقم الكتالوج 554656) 120 – (2.0 × N) 156 – (2.6 × N) 312 – (5.2 × N) الإجمالي 120 156 312 * N = عدد الأجسام المضادة المضافة. N = 0 إذا لم تكن هناك أجسام مضادة مضافة. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. ٦. امزج مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم باستخدام الماصة. قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في القاع، ثم أعد وضعها على الثلج. ٧. في حالة الوسم التسلسلي باستخدام علامات العينة أو بدونها، أضف لكل عينة ١٤٠ ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم إلى الأنبوب الذي يحتوي على ٣٥ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا النخاعية/APC المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى ١٧٥ ميكرولتر. في حالة الوسم المشترك باستخدام علامات العينة، أضف لكل عينة ١٢٠ ميكرولتر من مزيج BD® AbSeq الرئيسي للوسم و٢٠ ميكرولتر من علامة العينة إلى الأنبوب الذي يحتوي على ٣٥ ميكرولتر من محلول لوحة بروتين الخلايا النخاعية/APC المُعاد تكوينه، ليصل الحجم الإجمالي إلى ١٧٥ ميكرولتر. ٨. امزج الخليط باستخدام الماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة لجمع المحتويات في قاع الأنبوب، وأعده إلى الثلج. ٩. قم بالطرد المركزي للخلايا عند ٤٠٠ × g لمدة ٥ دقائق. إذا تم استخدام مُثبِّط مستقبلات Fc، فانتقل إلى الخطوة ١٠. إذا لم يتم استخدام مُثبِّط مستقبلات Fc، فانتقل إلى الخطوة ١١. ١٠. (اختياري) بالنسبة للعينات التي تحتوي على خلايا نخاعية وخلايا ليمفاوية بائية، توصي شركة BD Biosciences بحجب الإشارات الإيجابية الكاذبة غير النوعية التي تتوسطها مستقبلات Fc باستخدام مُثبِّط مستقبلات Fc البشري من BD (رقم الكتالوج ٥٦٤٢٢٠). لإجراء عملية الحجب، اسحب مزيج Fc Block MasterMix باستخدام ماصة وضعها في أنبوب LoBind جديد سعة 1.5 مل موضوع على الثلج: _________________________________________________________________________________ المكون 1 عينة (ميكرولتر)* 1 عينة + 20% زيادة (ميكرولتر) FBS† (رقم الكتالوج 554656) 20.0 24.0 Fc Block‡ (رقم الكتالوج 564220) 5.0 6.0 الإجمالي 25.0 30.0 * يكفي لما يصل إلى مليون خلية. لحجب المزيد من الخلايا، اضبط الحجم. † FBS = محلول التلوين BD Pharmingen™. ‡ Fc Block = BD Pharmingen™ Human BD Fc Block. ب. امزج مزيج Fc Block MasterMix باستخدام ماصة، ثم قم بالطرد المركزي لفترة وجيزة. ضعه على الثلج. ج. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. د. أعد تعليق الخلايا في 25 ميكرولتر من محلول Fc Block MasterMix. هـ. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة (من 15 إلى 25 درجة مئوية) لمدة 10 دقائق. و. أضف 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 إلى معلق الخلايا. امزج المكونات جيدًا بالماصة، ثم انتقل إلى الخطوة 12. 11. أزل السائل الطافي من الخلايا دون تحريك الراسب. أضف 25 ميكرولتر من محلول التلوين (FBS) إلى 175 ميكرولتر من محلول BD® AbSeq labeling MasterMix من الخطوة 8 ليصل الحجم الكلي إلى 200 ميكرولتر. أعد تعليق راسب الخلايا في هذا الحجم الكلي. امزج المكونات جيدًا بالماصة. 12. انقل الخلايا مع محلول BD® AbSeq labeling MasterMix إلى أنبوب فالكون جديد من البوليسترين سعة 5 مل. ١٣. صبغ الخلايا على الجليد لمدة ٣٠ دقيقة. ١٤. أضف ٣-٤ مل من محلول الصبغ (FBS) إلى الخلايا المُلَوَّنة واخلطها جيدًا باستخدام الماصة. ١٥. افصل الخلايا بالطرد المركزي عند ٤٠٠ × g لمدة ٥ دقائق. ١٦. انزع غطاء الأنبوب واقلبه لسكب السائل الطافي في النفايات الخطرة بيولوجيًا. أبقِ الأنبوب مقلوبًا وجففه برفق بقطعة قماش خالية من الوبر لإزالة أي سائل طافي متبقٍ من حافة الأنبوب. ١٧. كرر الخطوات من ١٤ إلى ١٦ مرتين إضافيتين ليصبح المجموع ثلاث غسلات. ١٨. أعد تعليق راسب الخلايا المغسولة في ٦٢٠ ميكرولتر من محلول العينة البارد من كاشف خرطوشة BD Rhapsody™ المُحسَّن V3 (رقم الكتالوج ٦٦٧٠٥٢) وانتقل إلى عملية التقاط الخلايا المفردة مع الغسل على الخرطوشة الموضح في الخطوات الفرعية من أ إلى ج. للحصول على تفاصيل إضافية، يُرجى الرجوع إلى بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT (رقم المستند 23-24252) أو بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) لنظام BD Rhapsody™ HT Xpress (رقم المستند 23-24253). ملاحظة: قم بغسل الخرطوشة بعد استقرار الخلايا (حضانة لمدة 8 دقائق) كما هو موضح في الخطوات الفرعية التالية. أ. في قسم البروتوكول الخاص بـ "تحميل الخلايا في خرطوشة BD Rhapsody™ ذات 8 مسارات"، بعد تحميل الخلايا، حضّن الخرطوشة في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 8 دقائق. ب. ضع الخرطوشة على جهاز BD Rhapsody™ HT Xpress، ثم اتبع خطوات غسل الخرطوشة كما يلي: _____________________________________________________________ المادة المراد تحميلها الحجم (ميكرولتر) حارة واحدة وضع الماصة هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل هواء 380 تحضير/غسل محلول عينة بارد 380 تحضير/غسل ج. (اختياري) قم بخطوة الماسح الضوئي: تحميل الخلية مسح ضوئي، في حال استخدام نظام تحليل الخلايا المفردة BD Rhapsody™ HT بروتوكول التقاط الخلايا المفردة وتخليق الحمض النووي التكميلي (معرف المستند 23-24252). لا حاجة للتأخير لمدة 8 دقائق قبل المسح الضوئي. تحذير: تُعتبر جميع العينات والمواد البيولوجية خطرة بيولوجيًا. تعامل معها كما لو كانت قادرة على نقل العدوى، وتخلص منها باتباع الاحتياطات المناسبة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تستخدم الماصة عن طريق الفم أبدًا. ارتدِ ملابس واقية مناسبة ونظارات واقية وقفازات. قائمة بجميع أنواع الأجسام المضادة البشرية الثلاثين المضمنة في لوحة BD® OMICS-One T-Cell: ______________________________________________________________________________ النوع المستنسخ معرف الأوليغونوكليوتيد رمز شريط BD® AbSeq التسلسل____________ CD103 BER-ACT AHS0001 AAATAGTATCGAGCGTAGTTAAGTTGCGTAGCCGTT CD274 (PD-L1) MIH1 AHS0004 ATCGTAAGGCTCGTGGTTCGTAAGTAAGTTCGTATC CD11b M1/70 AHS0005 ATCGTTATTCGTTGTAGTTCGCCCGGTTTGAGTAGT CD123 7G3 AHS0020 ACAGTTTAGTAGGACGTGAGGTATCGCGAGAATGCC HLA-DR G46-6 AHS0035 TGTTGGTTATTCGTTAGTGCATCCGTTTGGGCGTGG CD14 MPHIP9 AHS0037 TGGCCCGTGGTAGCGCAATGTGAGATCGTAATAAGT CD45 HI30 AHS0040 GTGCGAAATGGCGGAATGTTATCTGCGAATGTAGTC CD33 WM53 AHS0044 GTGTTAGTGATTTGATAGGACGCGTTACGAGAGATT CD80 L307.4 AHS0046 GAGGGTAACGGGTGTCCAAATATCGGCTGTGTAAGT CD16 3G8 AHS0053 TAAATCTAATCGCGGTAACATAACGGTGGGTAAGGT CD64 10.1 AHS0055 TTGTGCGGCGTAGTATGGTTATCTCGAGTGAAAGTC CD11c B-LY6 AHS0056 ATGCGTTGCGAGAGATATGCGTAGGTTGCTGATTGG CD163 GHI/61 AHS0062 TATTATGTGCGAACTATGGTATCCGTATTGAGGGCT CD195 (CCR5) 2D7/CCR5 AHS0070 ATGGTTTAGTCGTACGTGGGTTTAGATTGGCGGTGC CD206 19.2 AHS0072 GCTGGTTATCGTTTGAGAGTCGGTATGGAATGCGGT CD32 FLI8.26 AHS0073 GGTTGTAGGTGCGGAATATAAGCGTCGTTGAGGTGT CD273 MIH18 AHS0075 TGAGTAACCGTATGTAATCCGTAATCGTAGAAGCGC CD141 1A4 AHS0083 TGGAAGTAAGTATGGGTCGGCGTAAATTGTGCGTGT CD1 F10/21A3 AHS0088 ATAGATTACATTCGTTTAGCGTTGGGTTCGGTCCGT CD40 5C3 AHS0117 GGTGTAATTGGGCTAGAACGTATATGCGGTAAGGCG FCeR1a AER-37 AHS0129 GATATGGCGTGATGGTAGGTTCGGTTTAAGTTAGCG CD169 7-239 AHS0133 CATTAAGCACGAAGGTATAGGTAGGAACGGTTGGC CD36 IVC7 AHS0135 AATTGTAGTAGTCCGGTGTATGTAGAGTAGGCGTTT CD115 (CSF1R) 9-4D2-1E4 AHS0136 CTGGTGGCGGCGAATTTGGTTACGACATATAGGGTT CD162 KPL-1 AHS0139 CCAGATAGGCGATAGTTTAGGAGCGATTAGTGTG CD85K ZM3.8 AHS0179 AGTAGTCGTAGTTGGCGTGAATTGGGCTTATATCTG VISTA MIH65.RMAB AHS0187 ATCAGGGAATCTCGGTAAGTTAAACGTGTATAGTGC CD15 W6D3 AHS0196 ATAGGCATGGACGACGTAGATAATAAGTGGCGGGTT CD192 (CCR2) LS132.1D9 AHS0208 CATGAGTGAGGCGATATAGTGAGCGGTTTGTAGATT CD116 Hgmcsfr1-M1 AHS0238 CTTAGTTGTAGGATCGAGAGTAGTGTGCATTGCGT_
ملاحظات المنتج: يُقدَّم هذا الكاشف مُجفَّفًا بالتجميد في شكل مُعاير مُسبقًا. خضعت عملية الإنتاج لاختبارات وتدقيق صارمة لضمان إنتاج مُركَّب عالي الجودة ذي أداء ثابت ونشاط ارتباط نوعي. مع ذلك، لم تُجرَ اختبارات التحقق على جميع دفعات المُركَّب. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يُرجى زيارة https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics. للوصول إلى ملفات AbSeq المرجعية بصيغة FASTA لتحليلات المعلوماتية الحيوية، يُرجى زيارة https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/. تحذير: يُنتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. اتبع الإرشادات المحلية والولائية عند التخلص من النفايات الخطرة. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ مُعتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) تقع في الولايات المتحدة. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. اقرأ وافهم صحائف بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع المواد الكيميائية. للحصول على صحائف بيانات السلامة، تفضل بزيارة regdocs.bd.com أو تواصل مع الدعم الفني لشركة BD Biosciences عبر البريد الإلكتروني scomix@bd.com.
الجداول: الوصف: الكمية/الحجم: الكمية/الحجم رقم القطعة: رقم القطعة معرف EntrezGene: معرف EntrezGene
الوصف: الكمية/الحجم: 1.0 رقم القطعة: غير متوفر معرف EntrezGene: غير متوفر