BD، 940526، BD® AbSeq Oligo Mouse Anti-APC (Allophycocyanin)

حجم العينة لكل اختبار: 2 ميكرولتر/اختبار
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
التطبيق: تسلسل الحمض النووي للخلايا المفردة من الطرف 3' (مؤهل)
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
النوع المضيف: الفأر
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب، وتم ربطه بأوليغونوكليوتيد BD® AbSeq في ظل ظروف مثالية.
إجراءات التحليل الموصى بها: ضع جميع كواشف BD® AbSeq المراد تجميعها في حامل أنابيب سعة 500 ميكرولتر (Thermo Fisher Scientific، رقم المنتج 4900). رتب الأنابيب بحيث يسهل فتحها وإعادة إغلاقها باستخدام أداة إغلاق الأنابيب ذات 8 قنوات (Thermo Fisher Scientific، رقم المنتج 4105MAT)، ثم قسّم الكواشف باستخدام ماصة متعددة القنوات. يجب طرد أنابيب BD® AbSeq مركزيًا لمدة 30 ثانية على الأقل عند قوة 400 × g لضمان إزالة أي محتويات عالقة في خيوط الغطاء/الأنبوب قبل الفتح الأول. التعريفات: الجسم المضاد الأولي: يرتبط هذا الجسم المضاد مباشرةً بمحدد المستضد البروتيني المستهدف. الجسم المضاد الثانوي: يرتبط هذا الجسم المضاد بالجسم المضاد الأولي. نظرًا لأن الهدف لهذا الجسم المضاد قد يختلف باختلاف الهدف الأولي، يُوصى بضبط تركيز الجسم المضاد قبل الاستخدام باتباع بروتوكول تحليل التدفق الخلوي لـ BD™ AbSeq Ab-Oligo وتعبير علامات العينة (معرف المستند: 232502، الإصدار 2.0، انظر https://www.bdbiosciences.com/content/dam/bdb/marketing-documents/BD-AbSeq-Ab-Oligo-Flow-Cytometry-Analysis-User-Guide.pdf). التركيز الابتدائي لهذا الجسم المضاد هو 0.5 ميكروغرام/ميكرولتر، وقد يكون التخفيف ضروريًا لزيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء إلى أقصى حد، لأن كمية الجسم المضاد تعتمد على تركيز الجسم المضاد الأولي. بروتوكول التلوين 1) (اختياري) معالجة الخلايا بـ Fc Block a. 1) تحضير مزيج حجب مستقبلات Fc: أ. حضّر مزيج حجب مستقبلات Fc بمزج 114 ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) مع 6 ميكرولتر من BD Human or Mouse Fc Block (PN 564220 أو 553142 على التوالي)، واخلط جيدًا باستخدام الماصة. ب. افصل الخلايا بالترسيب المركزي عند 400 × g لمدة 5 دقائق. تخلص من السائل الطافي. ج. أضف 110 ميكرولتر من مزيج حجب مستقبلات Fc إلى راسب الخلايا. د. حضّن الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. 2) التلوين بالأجسام المضادة الأولية: أ. حضّر مزيج الأجسام المضادة الأولية بمزج الحجم الأمثل من الجسم المضاد الأولي (انظر ورقة البيانات الفنية لمنتج الجسم المضاد الأولي) مع 98 ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS)، واخلط جيدًا باستخدام الماصة. ب. انقل 100 ميكرولتر من معلق الخلايا إلى مزيج الأجسام المضادة الأولية، ليصبح حجم التلوين الكلي 200 ميكرولتر. ج. حضّن لمدة 30-60 دقيقة على الجليد. د. (ملاحظة: خلال فترة التحضين هذه، يُنصح بدمج الجسم المضاد الثانوي AbSeq مع أي AbSeq إضافي سيتم تضمينه في التحليل. راجع أحد بروتوكولات نظام BD Rhapsody لتوسيم الخلايا المفردة باستخدام BD® AbSeq Ab-Oligos المذكورة في الخطوة 3أ للحصول على إرشادات). هـ. أضف 2 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) واخلط برفق باستخدام الماصة، مع تجنب الفقاعات. و. افصل الخلايا بالترسيب المركزي عند 400 × جم لمدة 5 دقائق. تخلص من السائل الطافي. ز. كرر الخطوات د مرتين للحصول على 3 غسلات إجمالاً. ح. بعد الغسلة الثالثة، علّق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS). 3) التلوين بالجسم المضاد الثانوي أ. قم بتلوين الخلايا باستخدام مجموعة AbSeq المحضرة خلال خطوة الحضانة C، مع الرجوع إلى أحد بروتوكولات AbSeq أدناه حسب الحاجة. • وسم الخلايا المفردة باستخدام BD® AbSeq Ab-Oligos (من 41 إلى 100 plex) (معرف المستند: 23-22314) • وسم الخلايا المفردة باستخدام مجموعات BD® Single-Cell Multiplexing Kits وBD® AbSeq Ab-Oligos (من 1 إلى 40 plex) (معرف المستند: 23-21339) • وسم الخلايا المفردة باستخدام مجموعات BD® Single-Cell Multiplexing Kits وBD® AbSeq Ab-Oligos (من 41 إلى 100 plex) (معرف المستند: 23-22354) • وسم الخلايا المفردة باستخدام مجموعات BD® Flex Single-Cell Multiplexing Kits وBD® AbSeq Ab-Oligos (من 1 إلى 100 plex) (معرف المستند: 23-24312) يمكن إنشاء ملفات مرجعية للتسلسل باستخدام مولد BD® AbSeq Panel Reference Generator (https://abseq-ref-gen.genomics.bd.com/). اتبع بروتوكولات السلامة المختبرية القياسية. اقرأ وافهم صحائف بيانات السلامة (SDS) قبل التعامل مع المواد الكيميائية. للحصول على صحائف بيانات السلامة، تفضل بزيارة regdocs.bd.com أو تواصل مع الدعم الفني لشركة BD Biosciences عبر البريد الإلكتروني scomix@bdscomix.bd.com. تحذير: تُعتبر جميع العينات البيولوجية والمواد الملامسة لها مواد خطرة بيولوجيًا. تعامل معها كما لو كانت قادرة على نقل العدوى، وتخلص منها مع اتخاذ الاحتياطات اللازمة وفقًا للوائح الفيدرالية والولائية والمحلية. لا تستخدم الفم أبدًا في عملية السحب بالماصة. ارتدِ ملابس واقية مناسبة، ونظارات واقية، وقفازات.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. خضعت عملية الإنتاج لاختبارات صارمة وتحقق دقيق لضمان إنتاج مُقترن عالي الجودة بأداء ثابت ونشاط ارتباط نوعي. مع ذلك، لم تُجرَ اختبارات التحقق على جميع دفعات المُقترن. يُرجى الرجوع إلى http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents. تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. الاستخدام المعتاد هو 2 ميكرولتر لـ 1 × 10^6 خلية في تفاعل تلوين بحجم 200 ميكرولتر. للحصول على أفضل النتائج، أغلق الأغطية بإحكام بعد الاستخدام وقبل التخزين. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. اتبع الإرشادات الحكومية والمحلية عند التخلص من النفايات الخطرة. يرجى مراجعة الرابط التالي للاطلاع على البروتوكولات الفنية: https://www.bdbiosciences.com/en-us/resources/protocols/single-cell-multiomics