BD، 556030، مجموعة BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human PCNA

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_396306
الوصف: تم التعرف على المستضد النووي للخلايا المتكاثرة (PCNA) في البداية كمستضد نووي في الخلايا المتكاثرة، ووُصف لاحقًا بأنه وحدة فرعية لإنزيم بوليميراز الحمض النووي δ. تبلغ مستويات بروتين PCNA ذروتها خلال طور S من دورة الخلية، حيث يشكل معقدًا مع مثبط p21. يكاد يكون PCNA غير قابل للكشف في الأطوار الأخرى من الدورة. نظرًا لتعبيره الفريد، استُخدم PCNA على نطاق واسع في الدراسات التي تربط بين تشخيص تطور الورم وانتشار الخلايا السرطانية. وقد ذُكر أن PCNA البشري يتكون من 262 حمضًا أمينيًا بوزن جزيئي ظاهري يبلغ 36 كيلو دالتون.
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. اجمع الخلايا، وعدها، وترسيبها باتباع الإجراءات القياسية. ملاحظة: يُعبر عن بروتين PCNA بواسطة الخلايا المتكاثرة. قد يؤدي استخدام الخلايا غير المحفزة (مثل الخلايا الليمفاوية المحيطية أحادية النواة غير المحفزة) إلى نتائج سلبية. 2. أثناء الخلط، أضف 5 مل من الإيثانول البارد بتركيز 70-80% قطرة قطرة إلى راسب الخلايا (1-5 × 10^7 خلية). حضّن عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة ساعتين على الأقل. يمكن تخزين هذه الخلايا المثبتة عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 60 يومًا قبل التلوين. 3. اغسل مرتين بـ 30-40 مل من محلول التلوين (محلول ملحي فوسفاتي مع 1% مصل بقري جنيني، 0.09% أزيد الصوديوم)، ثم قم بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 200 غرام. 4. أعد تعليق الخلايا بتركيز 1 × 10^7 خلية/مل. ٥. انقل ١٠٠ ميكرولتر (١ × ١٠^٦ خلية) من معلق الخلايا إلى كل أنبوب عينة. ٦. أضف ٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة لـ PCNA المخففة بشكل صحيح وفقًا للبروتوكول إلى الأنابيب المذكورة أعلاه. اخلط برفق. ٧. حضّن الأنابيب في درجة حرارة الغرفة لمدة ٢٠-٣٠ دقيقة في الظلام. ٨. اغسل بـ ٢ مل من محلول التلوين عند ٢٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ٩. تخلص من السائل الطافي. ١٠. في حال استخدام مضاد PCNA المقترن مباشرةً، انتقل إلى الخطوة ١٣. ١١. في حال استخدام مضاد PCNA منقى، أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المخفف (مثلًا، رقم المنتج ٥٥٥٩٨٨)، وفي حال استخدام مضاد PCNA المقترن بالبيوتين، أضف ٥٠ ميكرولتر من SAV-PE (رقم المنتج ٥٥٤٠٦١) إلى كل أنبوب عينة، ثم حضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة في الظلام. ١٢. كرر الخطوتين ٨ و٩. ١٣. أضف ٠.٥ مل من محلول التلوين إلى كل أنبوب. في حال استخدام مضاد PCNA المقترن بـ FITC أو الجسم المضاد الثانوي، أضف ١٠ ميكرولتر من محلول تلوين بروبيديوم يوديد (رقم المنتج ٥٥٦٤٦٣) إلى كل أنبوب. لإضافة الأجسام المضادة لـ PCNA المقترنة بـ PE أو الأجسام المضادة الثانوية، أضف 20 ميكرولتر من محلول BD Via-Probe™ لقياس حيوية الخلايا (رقم المنتج 555816) إلى كل أنبوب. 14. تابع تحليل التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تحسين هذا الجسم المضاد ومعايرته مسبقًا باستخدام عنصر تحكم من نفس النوع لاستخدامه بالحجم الموصى به وهو 20 ميكرولتر/اختبار. لا يُنصح بمعايرة الكواشف أو استبدالها بعنصر تحكم آخر من نفس النوع (غير مطابق). نظرًا لاختلاف التطبيقات، يجب على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر