BD، 562208، لوحة فحص علامات سطح الخلية الفأرية BD Lyoplate™

الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2869400
الوصف: تحتوي لوحة فحص علامات سطح الخلية BD Lyoplate™ للفئران على 176 جسمًا مضادًا أحادي النسيلة مُنقّى، مُخصصة لعلامات سطح الخلية المختلفة. كما تحتوي اللوحة على ضوابط من نوع الغلوبولين المناعي (Ig) للفئران والجرذان والهامستر، لتقييم التلوين الخلفي غير النوعي. يمكن استخدام هذه اللوحة لفحص خطوط الخلايا أو الخلايا الأولية أو الأنسجة، وهي متوافقة مع منصات تقنيات قياس التدفق الخلوي والتصوير الحيوي. تحتوي اللوحة على ثلاث لوحات ذات 96 بئرًا، تحتوي كل بئر منها على 2.75 ميكروغرام من الجسم المضاد الأولي (يكفي لخمسة اختبارات بمعدل 0.5 ميكروغرام من الجسم المضاد لكل اختبار). كما تتضمن اللوحة أجسامًا مضادة ثانوية مضادة للغلوبولين المناعي مُؤشّرة بالبيوتين، وستربتافيدين مُقترن بـ AlexaFluor® 647 ككاشف ثالثي. هذا المنتج متوافق مع الخلايا التي تُعبّر عن جينات مُبلّغة فلورية، مثل البروتين الفلوري الأخضر (GFP). ويمكن استخدامه مع أجسام مضادة إضافية تتعرف على جزيئات سطح الخلية والجزيئات داخل الخلوية. يمكن متابعة النتائج الإيجابية من الفحوصات الأولية بتجارب تأكيد لاحقة باستخدام الأجسام المضادة النقية أو الفلورية التي توفرها شركة BD Biosciences. للوصول إلى هذا المحتوى، يمكنك البحث عن اسم مستنسخ الجسم المضاد و/أو اسم النوعية على موقع BD Biosciences الإلكتروني: http://www.bdbiosciences.com. المكون 51-9007606AK - لوحة علامات سطح خلايا الفأر - الجزء أ • لوحة علامات سطح خلايا الفأر المجففة بالتجميد 1 (واحدة من كل نوع) • لوحة علامات سطح خلايا الفأر المجففة بالتجميد 2 (واحدة من كل نوع) • لوحة علامات سطح خلايا الفأر المجففة بالتجميد 3 (واحدة من كل نوع) التخزين: تُحفظ اللوحات غير المفتوحة في درجة حرارة الغرفة (18-25 درجة مئوية). تم تجفيف الأجسام المضادة بالتجميد في محلول مائي منظم يحتوي على ألبومين المصل البقري (BSA) و≤ 0.09% أزيد الصوديوم. المكون 51-9007606BK - لوحة فحص علامات سطح الخلية للفأر - الجزء ب • أجسام مضادة ثانوية بيوتينيلية مضادة للفئران (1.0 مل) • أجسام مضادة ثانوية بيوتينيلية مضادة للفئران (0.25 مل) • أجسام مضادة ثانوية بيوتينيلية مضادة للهامستر الأرمني (0.25 مل) • أجسام مضادة ثانوية بيوتينيلية مضادة للهامستر السوري (0.1 مل) • ستربتأفيدين Alexa Fluor® 647 (0.2 مل) التخزين: تُحفظ الأجسام المضادة الثانوية البيوتينيلية والستربتأفيدين الفلوري بعيدًا عن الضوء عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تُقدم الأجسام المضادة الثانوية البيوتينيلية في محلول مائي منظم يحتوي على ≤ 0.09% أزيد الصوديوم. يُرجى ملاحظة أن الأجسام المضادة الموجودة في هذه اللوحة قد لا تتعرف على جميع الأشكال المتغايرة لكل علامة من علامات سطح الخلية. بالإضافة إلى ذلك، قد تختلف استجابة الأجسام المضادة لأنواع الخلايا المختلفة تبعًا لتوافر الحواتم الموجودة، أي أن بعض الحواتم قد تُحجب بتعديلات ما بعد الترجمة. قد تكون النتائج التي تحصل عليها في هذا الفحص ذات صلة فقط بالأجسام المضادة التي تم اختبارها. علاوة على ذلك، نظرًا لأن جميع الأجسام المضادة متوفرة بكميات ثابتة ومتساوية، فقد لا تكون بتركيزاتها المثلى. لذلك، من المهم التحقق من نتائج الفحص الإيجابية باستخدام أجسام مضادة نقية أو فلورية، مستخدمة بتركيزات مثلى (محددة بالمعايرة) لتأكيد النتائج.
إجراءات الفحص الموصى بها: هام: يرجى قراءة التعليمات جيدًا قبل البدء. التعامل الأولي مع الصفائح: • لا تُخرج الصفائح من أكياس الرقائق المعدنية إلا عند استخدامها. يُعد كيس الرقائق المعدنية الحاجز الأساسي للرطوبة. بمجرد إخراج الصفائح من أكياس الرقائق المعدنية، يجب إعادة تكوين الأجسام المضادة. • قبل إزالة غطاء الرقائق المعدنية، تأكد من وضع الصفائح في جهاز الطرد المركزي لترسيب كتل الأجسام المضادة المجففة بالتجميد، وتوخَّ الحذر عند إزالة غطاء الرقائق المعدنية. يُرجى مراجعة قسم "إعادة تكوين الأجسام المضادة" أدناه لمزيد من التفاصيل. • بعد إزالة غطاء الرقائق المعدنية وقبل إعادة التكوين، تجنب وضع الغطاء البلاستيكي أو أي غطاء آخر على الصفائح أو إعادة إغلاقها بغطاء لاصق. في كلتا الحالتين، قد تتسبب الشحنات الساكنة الناتجة في انفصال كتل الأجسام المضادة المجففة بالتجميد وخروجها من الآبار. • قد تلاحظ أن كتل الأجسام المضادة المجففة بالتجميد لا تتشابه جميعها في المظهر. هذا أمر طبيعي ولن يؤثر على أداء الأجسام المضادة. تحضير العينة: • بعض مؤشرات سطح الخلية حساسة للهضم الأنزيمي. عند الإمكان، استخدم محلولًا غير إنزيمي لفصل الخلايا أو الأنسجة لتحضير الخلايا لتحليل التدفق الخلوي. لفصل الخلايا الملتصقة إنزيميًا، نوصي باستخدام محلول BD™ Accutase™ لفصل الخلايا (رقم المنتج 561527). • تأكد من أن الخلايا معلقة في معلق خلوي أحادي. يمكن لخطوة المعالجة بإنزيم DNase أن تقلل من تكتل الخلايا. • قد تُنتج بعض الأجسام المضادة الخاصة بعلامات سطح الخلية نتائج خاطئة (إيجابية وسلبية خاطئة) عند استخدامها لتلوين الخلايا المثبتة. إذا كان التثبيت ضروريًا، فإن تلوين الخلايا الحية مع تثبيتها لاحقًا قبل التحليل يمكن أن يساعد في تقليل هذه النتائج الخاطئة. توصيات التلوين بالأجسام المضادة: • نوصي بتقييم التلوين الخلفي على الخلايا عن طريق معايرة الأجسام المضادة الثانوية المُبَيوْتَنة وستربتافيدين Alexa Fluor® 647 ككاشف ثالثي قبل محاولة إجراء فحص كامل. تم توفير كمية زائدة من الجسم المضاد الثانوي والكاشف الثالثي. بناءً على أنواع الخلايا المختبرة، نوصي باستخدام الأجسام المضادة الثانوية المُؤشَّرة بالبيوتين والمُضادة للفئران والجرذان والهامستر السوري بتركيز 1.25 ميكروغرام/مل (100 ميكرولتر لكل بئر)، والجسم المضاد الثانوي المُؤشَّر بالبيوتين والمُضاد للهامستر الأرمني بتركيز 0.6 ميكروغرام/مل (100 ميكرولتر لكل بئر). مع أن معظم الأجسام المضادة في هذه المجموعة تم إنتاجها باستخدام الجرذان، إلا أن بعضها تم إنتاجه باستخدام الهامستر السوري أو الهامستر الأرمني أو الفئران. لضمان استخدام الجسم المضاد الثانوي المُؤشَّر بالبيوتين والمُناسب لكل نوع مع الخلايا المصبوغة بالأجسام المضادة الأولية المُناظرة، يُرجى الرجوع إلى الجدول التالي وإلى مخطط المصفوفة المُرمَّز بالألوان في الصفحتين 9 و10 من هذا الدليل. لوحة التحكم الثانوية - خريطة اللوحة - لون البئر - الآبار - بئر التحكم الثانوي - البئر 1: أحمر الفأر - جميع الآبار A1 - 2: أحمر الفأر - A1-A12، B1-B12، C1-C8، D1-D7 - A1 - 2: أصفر سوري - H1-H4 - H4 - 3: أخضر أرمني - A1-A12، B1-B12، C1-C2، D1-D6* - A1 - 3: أزرق الفأر - F1-F12، G1-G10، H1-H6 - H6 • تحقق من وجود أي تفاعل متقاطع مع الأجسام المضادة الثانوية المُبَيوْتَنة إذا كنت تخطط لمعالجة الخلايا بجسم مضاد مُنشِّط أو مُثبِّط من اختيارك (على سبيل المثال، باستخدام أجسام مضادة قابلة للذوبان أو مرتبطة باللوحة). • تحتوي المجموعة على 27 جسمًا مضادًا خاصًا بالفأر (بما في ذلك خمسة أنواع من الغلوبولين المناعي) في اللوحة 3. سيرتبط الكاشف الثانوي متعدد النسائل المُبَيوْتَن من الماعز المضاد للغلوبولين المناعي للفأر بخلايا سلالة الخلايا البائية للفأر التي تُعبِّر عن الغلوبولين المناعي السطحي. لذا، نوصي باستخدام صبغات مضادة مناسبة لتحديد أنواع الخلايا. على سبيل المثال، يمكن استخدام جسم مضاد لـ CD3 مرتبط بصبغة فلورية أخرى غير Alexa Fluor® 647 لتحديد الخلايا التائية أثناء التحليل. • نوصي باستخدام آبار تحتوي فقط على أجسام مضادة ثانوية مُبَيوْتَنة مع ضوابط ستربتأفيدين Alexa Fluor® 647، وآبار تحتوي فقط على خلايا غير مصبوغة كضوابط في كل تجربة. يمكن استخدام البئر A1 في اللوحتين 1 و2 كضابط للجسم المضاد الثانوي المضاد لـ Ig الفأري. يمكن استخدام البئر H4 في اللوحة 2 كضابط للجسم المضاد الثانوي المضاد لـ Ig الهامستر السوري. يمكن استخدام البئر A1 في اللوحة 3 كضابط للجسم المضاد الثانوي المضاد لـ Ig الهامستر الأرمني. يمكن استخدام البئر H6 في اللوحة 3 كضابط للجسم المضاد الثانوي المضاد لـ Ig الفأري. يمكن استخدام أي من آبار المحلول المتبقية كضوابط للخلايا غير المصبوغة فقط. • يمكن إضافة أجسام مضادة إضافية غير مدرجة حاليًا في لوحة فحص سطح خلايا الفئران BD Lyoplate إلى الفحص في أي من الآبار الرمادية الموضحة في خرائط اللوحتين 2 و3. • مانع مستقبلات Fc للفئران BD BD™ - قد ترتبط بعض مستحضرات الأجسام المضادة عبر أجزاء Fc الخاصة بها بالخلايا الحاملة لمستقبلات Fc، مما يؤدي إلى تلوين خلفي غير نوعي مرتفع. يمكن استخدام BD Pharmingen™ Purified Rat anti-Mouse CD16/CD32 (مانع مستقبلات Fc للفئران BD™) (رقم المنتج 553141 أو 553142) لمنع التصاق الأجسام المضادة بمستقبلات Fc للفئران عبر مستقبلات Fc. مع ذلك، ولأن جسم BD Fc Block المضاد من نوع IgG2b الخاص بالفئران، فإنه يُستخدم فقط مع الأجسام المضادة الأولية المُستخلصة من الهامستر السوري أو الهامستر الأرمني أو الفأر في اللوحتين 2 و3. ملاحظة: عند استخدام BD Fc Block، يجب اختيار أجسام مضادة ثانوية مضادة للغلوبولين المناعي لا تتفاعل مع نوع IgG2b الخاص به. • يمكن استخدام أنواع الغلوبولين المناعي للهامستر الأرمني كضوابط للأجسام المضادة الثلاثة المُستخلصة من الهامستر السوري، على سبيل المثال، يمكن استخدام Ham IgG2، λ في اللوحة 3، البئر D4 كضابط لنوع الغلوبولين المناعي للجسم المضاد المضاد لـ CD28 في البئر H1، اللوحة 2. لاستخدام هذا النوع من الغلوبولين المناعي مع الجسم المضاد المضاد لـ CD28 الخاص بالهامستر السوري والفأر، أضف الخطوة الثانية من الجسم المضاد المضاد للهامستر السوري مع الخطوة الثانية من الجسم المضاد المضاد للهامستر الأرمني في الخطوة 14 أدناه. تحليل التدفق الخلوي: • للحصول على أفضل النتائج، نوصي باستخدام 500,000 إلى 1,000,000 خلية لكل بئر في تحليل التدفق الخلوي. مع ذلك، فقد نجحنا في استخدام 250,000 خلية فقط لكل بئر. • نوصي باستخدام جهاز تحميل لوحات الفحص عالي الإنتاجية (HTS) ذي 96 بئرًا في تحليل التدفق الخلوي. في حال عدم توفر جهاز التحميل، انقل الخلايا المصبوغة من لوحات 96 بئرًا إلى أنابيب BD Falcon™ ذات القاع المستدير (12 × 75 مم، رقم المنتج 352008) للتحميل اليدوي. إعادة تكوين الأجسام المضادة: • بعد إخراج لوحات BD Lyoplate™ Mouse Cell Surface Marker Screening Panel من الأكياس المعدنية، قم بالطرد المركزي بسرعة 300 غرام لمدة 5 دقائق. • ثبت اللوحة بإحكام على طاولة العمل، ثم انزع الغطاء المعدني برفق بدءًا من أحد طرفيها واسحبه عبر اللوحة لإزالته تمامًا. بمجرد إزالة الغطاء المعدني، يجب إعادة تكوين جميع الأجسام المضادة المجففة بالتجميد فورًا. لا تُعِد غطاء الطبق قبل إعادة تكوين المحلول. • باستخدام ماصة متعددة القنوات، أعد تكوين الأجسام المضادة المجففة بالتجميد في 110 ميكرولتر من محلول فوسفات ملحي مُعقّم مُرشّح (بحجم مسام 0.2 ميكرومتر) بتركيز 1X. ينتج عن ذلك محلول أجسام مضادة يحتوي على خمس عينات (20 ميكرولتر لكل عينة). تأكد من استخدام رؤوس ماصة جديدة لكل صف لمنع انتقال التلوث بين الآبار. اترك الأجسام المضادة لتذوب لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. • خزّن الأجسام المضادة المُعاد تكوينها في درجة حرارة 4 درجات مئوية حتى يتم تحضير الخلايا للتجارب. يمكن تخزين الأجسام المضادة المُعاد تكوينها في أطباق ذات أغطية في درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة 10 أيام على الأقل. • أغلق حواف الطبق (مع وضع الغطاء) بغشاء بارافين® M المخبري لمنع فقدان محلول الأجسام المضادة المُعاد تكوينه بسبب التبخر. فحص الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي: (يرجى مراجعة الخطوة 6: يلزم حوالي 300 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) للفحص) 1. حضّر معلقًا خلويًا أحاديًا من الخلايا الحية من سلالة خلوية أو نسيج أو مزرعة ثلاثية الأبعاد. بالنسبة للسلالات الخلوية الملتصقة، نوصي باستخدام إنزيم خفيف مثل Accutase™ (رقم المنتج 561527) أو محلول تفكيك غير إنزيمي. 2. اغسل الخلايا بضعفين إلى أربعة أضعاف حجمها من محلول PBS بتركيز 1X. ثم قم بالطرد المركزي عند 300 غرام لمدة 5 دقائق. 3. أزل أي تكتلات خلوية بتمرير الخلايا عبر مصفاة خلايا BD Falcon™ بمسام 40 أو 70 ميكرومتر (رقم المنتج 352340 أو 352350). 4. حدد تركيز الخلايا والعدد الإجمالي للخلايا. إذا كنت تقوم بفصل الأنسجة أو زراعة ثلاثية الأبعاد، فننصح بمعالجة معلق الخلايا المفردة بإنزيم ديوكسي ريبونيوكلياز (DNase) للحد من تكتل الخلايا. أعد تعليق الخلايا في وسط النمو الموصى به أو في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X مع الكالسيوم والمغنيسيوم و100 وحدة من إنزيم ديوكسي ريبونيوكلياز/مل عند تركيز 10 ملايين خلية/مل. حضّن لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 5. اغسل الخلايا في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X بمقدار ضعفين إلى أربعة أضعاف حجمها. ثم قم بالطرد المركزي عند 300 غرام لمدة 5 دقائق. 6. ستحتاج إلى حوالي 300 مل من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) للخطوات اللاحقة. 7. أعد تعليق الخلايا من الخطوة 5 في محلول التلوين BD Pharmingen. ستحتاج إلى ما بين 110 و220 مليون خلية (في حجم إجمالي يبلغ حوالي 22 مل) لملء الآبار الحاوية على الأجسام المضادة وآبار التحكم (500,000 إلى 1,000,000 خلية لكل بئر) في الصفائح الثلاث. يعتمد الحد الأدنى لعدد الخلايا في كل بئر على جهاز قياس التدفق الخلوي و/أو فقدان الخلايا أثناء الغسل. لقد نجحنا في إجراء التجربة باستخدام 250,000 خلية فقط لكل بئر. 8. ضع علامات على ثلاث صفائح BD Falcon™ ذات 96 بئرًا ذات قاع مستدير (رقم المنتج 351177) لتكون الصفائح 1 و2 و3 لعيناتك. 9. باستخدام ماصة متعددة القنوات، خذ 100 ميكرولتر من معلق الخلايا وضعها في الآبار المطلوبة من الصفائح الثلاث ذات 96 بئرًا ذات القاع المستدير. إذا كان لديك عدد محدود من الخلايا، يمكنك حذف آبار التحكم التي تحتوي على المحلول فقط من اللوحتين 2 و3. يُرجى الرجوع إلى خرائط اللوحتين 2 و3 لتحديد الآبار التي يمكن حذفها مع مراعاة الخلايا غير المصبوغة وعناصر التحكم بالأجسام المضادة الثانوية. 10. باستخدام ماصة متعددة القنوات، اسحب المحلول لأعلى ولأسفل 2-3 مرات لخلط الجسم المضاد المُعاد تكوينه من الصف الأول من الآبار في لوحة فحص BD Lyoplate 1 بشكل كامل. بعد الخلط، أضف 20 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد إلى الخلايا في آبار لوحة العينات 1 المقابلة. غيّر رؤوس الماصة. استمر في إضافة الجسم المضاد المُعاد تكوينه إلى آبار العينات المقابلة لجميع الآبار المتبقية في كل لوحة عينات. استخدم رؤوسًا جديدة لكل بئر. حضّن على الجليد لمدة 20-30 دقيقة. 11. للغسل، أضف 100 ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen إلى كل بئر. قم بالطرد المركزي عند 300 غرام لمدة 5 دقائق. ١٢. أزل السائل الطافي بعناية واغسل الخلايا بـ ٢٠٠ ميكرولتر إضافية لكل بئر من محلول التلوين BD Pharmingen. ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ١٣. خلال خطوة الطرد المركزي للغسلة النهائية، خفف الأجسام المضادة الثانوية في محلول التلوين BD Pharmingen وفقًا للجدول التالي: تخفيف الجسم المضاد الثانوي، التركيز النهائي (ميكروغرام/مل)، حجم الجسم المضاد الثانوي المخفف (مل). جرذ ١:٤٠٠ ١.٢٥ ١٥.٠، سوري ١:٤٠٠ ١.٢٥ ٠.٨، أرمني ١:٨٠٠ ٠.٦٠ ٤.٠، فأر ١:٤٠٠ ١.٢٥ ٤.٠. ١٤. أزل السائل الطافي وضع ١٠٠ ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المناسب المُعلَّم بالبيوتين مباشرةً على الخلايا في كل بئر يحتوي على الجسم المضاد الأولي كما هو موضح في خرائط لوحة تخطيط المصفوفة (الصفحتان ٩ و١٠). كذلك، اختر بئراً إضافياً كعنصر تحكم للكاشف الثانوي والثالث لكل من الأجسام المضادة الثانوية الأربعة. استخدم الجدول أدناه كمرجع. استخدم الآبار المتبقية في لوحة العينات 2 أو 3 التي لا تحتوي على أجسام مضادة (الآبار الرمادية في خريطة اللوحة) لإعداد عناصر تحكم للخلايا غير المصبوغة فقط. لوحة التحكم الثانوية | خريطة اللوحة | لون البئر | الآبار | بئر التحكم الثانوي | البئر 1 | أحمر الفأر | جميع الآبار A1 | 2 | أحمر الفأر | A1-A12، B1-B12، C1-C8، D1-D7 | A1 | 2 | أصفر سوري | H1-H4 | H4 | 3 | أخضر أرمني | A1-A12، B1-B12، C1-C2، D1-D6* | A1 | 3 | أزرق الفأر | F1-F12، G1-G10، H1-H6 | H6 | * إذا كنت ترغب في استخدام ضوابط النمط المتساوي للأجسام المضادة للهامستر الأرمني للأجسام المضادة الثلاثة للهامستر السوري، فأضف الجسم المضاد الثانوي المضاد للهامستر السوري والموسوم بالبيوتين مع الجسم المضاد الثانوي المضاد للهامستر الأرمني والموسوم بالبيوتين إلى الآبار D1 (Arm IgG1، κ)، D3 (Arm IgG2، κ) وD4 (Arm IgG2، λ). 15. حضّن لمدة 20-30 دقيقة على الجليد في الظلام. ١٦. للغسل، أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen إلى كل بئر. ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ١٧. تخلص من السائل الطافي واغسل الخلايا بـ ٢٠٠ ميكرولتر إضافية من محلول التلوين BD Pharmingen. ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ١٨. تخلص من السائل الطافي وأضف ١٠٠ ميكرولتر من ستربتأفيدين Alexa Fluor® 647 إلى جميع الآبار التي تحتوي على خلايا مصبوغة بالأجسام المضادة الثانوية المؤتلفة بالبيوتين (باستثناء الآبار المختارة كضوابط للخلايا غير المصبوغة). خفف ستربتأفيدين Alexa Fluor® 647 بنسبة ١:٤٠٠٠ (٠.٥ ميكروغرام/مل) في ٢٢ مل ​​من محلول التلوين BD Pharmingen. ١٩. حضّن لمدة ٢٠-٣٠ دقيقة على الجليد في الظلام. ٢٠. للغسل، أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen إلى كل بئر. ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ٢١. أزل السائل الطافي واغسل الخلايا بـ ٢٠٠ ميكرولتر إضافية من محلول التلوين BD Pharmingen. ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ٢٢. في هذه المرحلة، قد ترغب في تثبيت الخلايا قبل التحليل. للتثبيت، أزل السائل الطافي وأضف ١٠٠ ميكرولتر من بارافورمالدهيد ٤٪ في محلول فوسفات ملحي ١X أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج ٥٥٤٦٥٥) لكل بئر، ثم حضّن لمدة ١٠ دقائق. إذا لم تكن خطوة التثبيت مطلوبة، فانتقل إلى الخطوة ٢٤. ٢٣. اغسل الخلايا مرتين بمحلول فوسفات ملحي ١X. ثم قم بالطرد المركزي عند ٣٠٠ غرام لمدة ٥ دقائق. ٢٤. أزل السائل الطافي وأعد تعليق الخلايا في ١٥٠ ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen لكل بئر. ٢٥. حلل عيناتك باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. نوصي بجمع ما لا يقل عن ١٠٠٠٠ حدث لكل بئر. أثناء قراءة اللوحة الأولى، خزّن اللوحات الأخرى على الثلج في مكان مظلم. فحص الخلايا بالتصوير الحيوي: ١. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في لوحة تصوير BD Falcon™ ذات ٩٦ بئرًا (رقم المنتج ٣٥٣٢١٩) وقم بزراعة الخلايا حتى تصل إلى الكثافة المناسبة. نوصي بنسبة تغطية تتراوح بين ٧٠-٨٠٪ لفحوصات التصوير. ٢. يجب إجراء تلوين سطح الخلية بالأجسام المضادة من لوحة BD Lyoplate على خلايا حية، حيث أن تثبيت الخلايا قد يتسبب في ظهور نتائج خاطئة (إشارات إيجابية و/أو سلبية خاطئة) مع بعض مؤشرات سطح الخلية. في الحالات التي يجب فيها تثبيت الخلايا قبل التلوين، نوصي بتأكيد النتائج الإيجابية باستخدام عينة من الخلايا الحية الملونة عن طريق التصوير أو قياس التدفق الخلوي. 3. باستخدام ماصة متعددة القنوات، أضف 20 ميكرولتر من كل جسم مضاد مُعاد تكوينه إلى الآبار المناسبة في لوحات العينات، ثم حضّنها على الجليد لمدة 20-30 دقيقة. صبغ الخلايا مباشرةً في 50 إلى 100 ميكرولتر من وسط النمو الطازج. في حال صبغ الخلايا المثبتة، استخدم محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X. 4. اغسل الخلايا مرتين في 100 ميكرولتر من محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X. ٥. خفف الأجسام المضادة الثانوية المُؤشَّرة بالبيوتين في وسط النمو وفقًا للجدول التالي: الجسم المضاد الثانوي، التخفيف، التركيز النهائي (ميكروغرام/مل)، حجم الجسم المضاد الثانوي المخفف (مل). جرذ ١:٤٠٠، ١.٢٥، ١٥.٠. سوري ١:٤٠٠، ١.٢٥، ٠.٨. أرميني ١:٨٠٠، ٠.٦٠، ٤.٠. فأر ١:٤٠٠، ١.٢٥، ٤.٠. ٦. أزل السائل الطافي، وضع ١٠٠ ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المُؤشَّر بالبيوتين المناسب مباشرةً في كل بئر يحتوي على خلايا مُلوَّنة بالجسم المضاد الأولي كما هو موضح في خريطة اللوحة. اختر أيضًا بئرًا إضافيًا كعينة تحكم ثانوية بالإضافة إلى كاشف ثالثي لكل من الأجسام المضادة الثانوية الأربعة. استخدم الجدول أدناه كمرجع. استخدم الآبار المتبقية في لوحة العينات ٣ التي لا تحتوي على أجسام مضادة (الآبار الرمادية في خريطة اللوحة) لإعداد عينات تحكم للخلايا غير المُلوَّنة. لوحة ثانوية | خريطة اللوحة | لون البئر | الآبار | بئر التحكم الثانوي | البئر 1: أحمر الفأر | جميع الآبار A1 | 2: أحمر الفأر | A1-A12، B1-B12، C1-C8، D1-D7 | A1 | 2: أصفر سوري | H1-H4 | H4 | 3: أخضر أرمني | A1-A12، B1-B12، C1-C2، D1-D6 | A1 | 3: أزرق الفأر | F1-F12، G1-G10، H1-H6 | H6 | 7. حضّن لمدة 20-30 دقيقة على الجليد في الظلام. 8. أزل السائل الطافي واغسل الخلايا مرتين في 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1X. 9. خفف ستربتأفيدين Alexa Fluor® 647 بنسبة 1:4000 (0.5 ميكروغرام/مل) في 22 مل من وسط النمو. أضف 100 ميكرولتر من ستربتأفيدين Alexa Fluor® 647 إلى جميع الآبار التي تحتوي على خلايا مصبوغة بالأجسام المضادة الثانوية المُؤشَّرة بالبيوتين (باستثناء الآبار المُختارة كضوابط للخلايا غير المصبوغة فقط). 10. حضّن لمدة 20-30 دقيقة على الجليد في الظلام. 11. أزل السائل الطافي واغسل الخلايا مرتين بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1X. 12. في هذه المرحلة، قد ترغب في تثبيت الخلايا قبل التحليل. للتثبيت، أزل السائل الطافي وأضف 100 ميكرولتر من بارافورمالدهيد 4% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1X أو محلول تثبيت BD Cytofix لكل بئر، ثم حضّن لمدة 10 دقائق. إذا كنت لا ترغب في تثبيت الخلايا، فانتقل إلى الخطوة 14. 13. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسل محتويات الآبار مرتين بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1X. ١٤. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١X مع صبغة حمض نووي قابلة للنفاذ الخلوي، مثل محلول هوكست ٣٣٣٤٢ (رقم المنتج ٥٦١٩٠٨). ١٥. حلل عيناتك باستخدام جهاز تصوير حيوي عالي المحتوى. المنتجات المصاحبة المقترحة: الوصف، الحجم، رقم الكتالوج: محلول تلوين BD Pharmingen™ (FBS) 500 مل، 554656؛ محلول تثبيت BD Cytofix™ 100 مل، 554655؛ BD Accutase™ 100 مل، 561527؛ محلول BD Pharmingen™ Hoechst 33342 بتركيز 1 ملغم/مل، 561908؛ BD Pharmingen™ Fc Block بتركيز 0.5 ملغم/مل، 553141 أو 553142. المنتجات ذات الصلة: الوصف، الحجم، رقم الكتالوج: صفائح BD Falcon™ ذات 96 بئراً، سوداء/شفافة مع غطاء، فحوصات التصوير عالي المحتوى، 32/كرتونة، 353219؛ صفائح BD Falcon™ ذات 96 بئراً، قاع مستدير مع غطاء، تحليل التدفق الخلوي، 50/كرتونة، 351177؛ أنبوب BD Falcon™ ذو قاع مستدير، 12 × 75 مم 1000/كرتونة 352008 تحذيرات واحتياطات: تحتوي لوحة فحص علامات سطح خلايا الفأر (الجزء أ)، مع الألواح الليثيومية 1 و2 و3، على أزيد الصوديوم. يجب على الباحثين ملاحظة أن بيانات المخاطر والسلامة التالية قابلة للتطبيق: رموز الخطر: ضار عند الاستنشاق Xn ضار. مكونات تحديد الخطر في الملصق: أزيد الصوديوم. عبارات المخاطر: ضار عند ملامسة الجلد 22 ضار عند البلع. عبارات السلامة: 23 لا تستنشق الغاز/الأبخرة/الرذاذ 36 ارتدِ ملابس واقية مناسبة 60 يجب التخلص من هذه المادة وعبوتها كنفايات خطرة. إظهار أقل
إشعارات المنتج: يتم جمع انبعاث الفلوركروم Alexa Fluor® 647 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة لقياس الألوفيوكوسيانين (APC). تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) تقع في الولايات المتحدة. يُقدم هذا المنتج بموجب ترخيص ملكية فكرية بين شركة Life Technologies Corporation وشركة BD Businesses. يمنح شراء هذا المنتج المشتري حقًا غير قابل للتحويل لاستخدام الكمية المشتراة من المنتج ومكوناته في الأبحاث التي يجريها المشتري (سواء كان المشتري جهة أكاديمية أو ربحية). لا يجوز للمشتري بيع أو نقل (أ) هذا المنتج، أو (ب) مكوناته، أو (ج) المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته إلى طرف ثالث، أو استخدام هذا المنتج أو مكوناته أو المواد المصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته لأغراض تجارية. الأغراض التجارية تعني أي نشاط يقوم به أي طرف مقابل عوض، وقد يشمل ذلك، على سبيل المثال لا الحصر: (1) استخدام المنتج أو مكوناته في التصنيع؛ (2) استخدام المنتج أو مكوناته لتقديم خدمة أو معلومات أو بيانات؛ (3) استخدام المنتج أو مكوناته لأغراض علاجية أو تشخيصية أو وقائية؛ أو (4) إعادة بيع المنتج أو مكوناته، سواءً أكان ذلك لاستخدامها في البحث العلمي أم لا. للحصول على معلومات حول شراء ترخيص لهذا المنتج لأي استخدام آخر، يُرجى التواصل مع شركة لايف تكنولوجيز، وحدة أعمال تحليل الخلايا، قسم تطوير الأعمال، 29851 طريق ويلو كريك، يوجين، أوريغون 97402، الولايات المتحدة الأمريكية، هاتف: 5414658300، فاكس: 5413350504. أكيوتاز علامة تجارية مسجلة لشركة إنوفيتيف سيل تكنولوجيز. أليكسا فلور علامة تجارية مسجلة لشركة لايف تكنولوجيز. يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). إظهار أقل
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 5.0 : غير متوفر : غير متوفر