BD، 610028، مختبرات BD Transduction™، مضاد الفأر النقي للفوسفوليباز Cγ1

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الجرذ، الكلب، الدجاج (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري
المستضد: ببتيد المنطقة الطرفية N لبروتين PLCγ1 البقري
التطبيقات: لطخة ويسترن (يتم اختبارها بشكل روتيني)، التصوير الحيوي، الكيمياء المناعية النسيجية، الترسيب المناعي (يتم اختبارها أثناء التطوير)
الوزن الجزيئي المستهدف: 148 كيلو دالتون
التركيز: 250 ميكروغرام/مل
RRID: AB_397446
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA والجلسرين و ≤0.09٪ أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات التحليل الموصى بها: التحليل المناعي الغربي: يرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml البروتوكول الموصى به للتصوير الحيوي: 1. تُزرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بكثافة خلوية مناسبة في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئراً (رقم المنتج: 353219)، وتُزرع لمدة تتراوح بين ليلة واحدة و48 ساعة. 2. يُزال وسط الزراعة من الآبار، وتُغسل (مرة أو مرتين) بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 3. تُثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من الفورمالديهايد الطازج بتركيز 3.7% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) أو محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج: 554655) إلى كل بئر، وتُحضن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ٤. أزل المُثبِّت من الآبار، واغسلها (مرة أو مرتين) بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ٥. اجعل الخلايا نفاذة باستخدام الميثانول البارد (أ)، أو تريتون™ X-100 (ب)، أو الصابونين (ج): أ. أضف ١٠٠ ميكرولتر من ميثانول ٩٠٪ عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية أو محلول BD™ Phosflow Perm Buffer III (رقم المنتج ٥٥٨٠٥٠) عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية إلى كل بئر، واحضنها لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ب. أضف ١٠٠ ميكرولتر من تريتون™ X-100 بتركيز ٠.١٪ إلى كل بئر، واحضنها لمدة ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ج. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول Perm/Wash buffer بتركيز ١× (رقم المنتج ٥٥٤٧٢٣) إلى كل بئر، واحضنها لمدة ١٥ إلى ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استمر في استخدام محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1× لجميع خطوات الغسل والتخفيف اللاحقة. 6. أزل محلول النفاذية من الآبار، واغسل مرة أو مرتين باستخدام 100 ميكرولتر من المحلول المناسب (إما محلول فوسفات ملحي بتركيز 1× أو محلول النفاذية/الغسل بتركيز 1×، انظر الخطوة 5.ج). 7. خطوة الحجب (اختيارية): أزل محاليل الغسل، واحجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الحجب BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS) (رقم المنتج 554656) أو 3% من مصل بقري جنيني في محلول التخفيف المناسب إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 15 إلى 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 8. خفف الجسم المضاد إلى تركيزه الأمثل في محلول التخفيف المناسب. عاير الأجسام المضادة النقية (غير المقترنة) وكواشف الخطوة الثانية لتحديد التركيز الأمثل. في حال استخدام جسم مضاد مقترن معتمد للتصوير الحيوي، خففه بنسبة 1:10. ٩. أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف لكل بئر، واحضنه لمدة ١٢٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. احضنه في الظلام إذا كنت تستخدم أجسامًا مضادة موسومة بصبغة فلورية. ١٠. أزل الجسم المضاد، واغسل الآبار ثلاث مرات باستخدام ١٠٠ ميكرولتر من محلول الغسل. يمكن إضافة غسل اختياري بمنظف (١٠٠ ميكرولتر من محلول توين ٠٫٠٥٪ في محلول فوسفات ملحي ١×) قبل خطوات الغسل المعتادة. ١١. إذا كان الجسم المضاد المستخدم موسومًا بصبغة فلورية، فانتقل إلى الخطوة ١٢. أما إذا كنت تستخدم جسمًا مضادًا نقيًا غير موسوم، فكرر الخطوات من ٨ إلى ١٠ باستخدام كاشف الخطوة الثانية الموسوم بصبغة فلورية للكشف عن الجسم المضاد النقي. ١٢. بعد الغسلة الأخيرة، قم بتلوين النوى بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١٣. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. المرشحات الموصى بها لأجهزة BD Pathway™ هي: مرشح الإثارة، مرشح الانبعاث، مرشح ثنائي اللون: BD Pathway 855، ٤٨٨/١٠، ٥١٥، مرشح LP Fura/FITC؛ مرشح BD Pathway 435، ٤٨٢/٣٥، ٥٣٦/٤٠، مرشح FF506
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.