Cytiva، 1005000، مجموعات CD34+ HSC LNP

مجموعة CD34+ HSC LNP، 2 مل مجموعة CD34+ HSC LNP هي مزيج من كواشف LNP مُحسَّن لتوصيل mRNA أو Cas9 mRNA/sgRNA إلى خلايا CD34+ HSCs. يُمكّن هذا الكاشف الباحثين من تطوير طريقة فعّالة وقابلة للتطبيق على نطاق واسع، سواءً في مرحلة الاكتشاف أو ما قبل السريرية، لتوصيل الجينات وتعديلها خارج الجسم الحي. توفر مجموعة CD34+ HSC LNP المزايا التالية: • تركيبة جسيمات نانوية دهنية محسّنة: توصيل الحمض النووي الريبي بكفاءة عالية في عملية النقل الجيني باستخدام تركيبة جسيمات نانوية دهنية محسّنة خاصة* • كفاءة عالية في تعطيل الجينات: تحقيق كفاءة عالية في تعطيل الجينات والتعبير عن البروتين تعتمد على الجرعة. • إنتاجية عالية للخلايا وإمكانية التمايز: الحفاظ على حيوية الخلايا وإنتاجيتها وإمكانية تمايزها بعد التحرير. • التوسع من الاكتشاف إلى ما قبل السريرية: قم بتوسيع نطاق أبحاث العلاج الخلوي خارج الجسم الحي من الاكتشاف إلى ما قبل السريرية باستخدام منصة NanoAssemblr™. • سير عمل معتمد: تم تحسينه والتحقق من صحته باستخدام سير عمل تصنيع خلايا CD34+ HSC. *يحتوي تركيب LNP في هذه المجموعة المخصصة للاستخدام البحثي فقط على سواغات دهنية قابلة للتأين يمكن ترخيصها للتقييم السريري المستقبلي. يمكن دمج مجموعات CD34+ HSC LNP بسهولة في بروتوكولات زراعة خلايا CD34+ HSC القياسية، وذلك لتطبيقات التعبير الجيني القائم على mRNA وتعديل الجينات باستخدام تقنية CRISPR/Cas. يوضح الشكل أدناه مخططًا عامًا لسير العمل، بما في ذلك معالجة LNP وزراعة خلايا HSC. يمكن فصل إنتاج LNP عن عملية زراعة الخلايا، مما يتيح مرونة أكبر وبساطة في سير العمل. يمكن تحقيق تعطيل جيني فعال لـ CD45 يعتمد على الجرعة في خلايا CD34+ HSC المستخلصة من دم الحبل السري البشري والدم المحيطي المُحفز، باستخدام مجموعة CD34+ HSC LNP (100 ميكرولتر) على نظام NanoAssemblr™ Spark™، ومجموعة CD34+ HSC LNP (2 مل) على جهاز NanoAssemblr™ Ignite™. أ) استجابة جرعة CD45 لـ CRISPR-Cas9 mRNA وsgRNA LNPs المُنتجة على جهاز NanoAssmblr™ Spark™. ب) حيوية الخلايا المقابلة. ج) صور نموذجية لأطباق CFU غير المعالجة والمعالجة بـ CRISPR RNA-LNP. د) إنتاجية مستعمرات الخلايا الحمراء والبيضاء المُعيرة للعينات غير المعالجة (UT)، والمعالجة بـ LNP الفارغة، والمعالجة بـ CRISPR RNA-LNP. تكاثر الخلايا وحيويتها بعد المعالجة بـ LNP: تُظهر الخلايا الجذعية المكونة للدم المعالجة بـ LNP تكاثرًا وحيويةً عاليين. أ) تكاثر الخلايا و ب) حيويتها التي تمت مراقبتها لأكثر من أسبوع واحد بعد تحرير الجينات للخلايا الجذعية المكونة للدم المعالجة بـ CRISPR RNA-LNP والمستهدفة لـ CD45 بواسطة LNP. ج) مقارنة تحرير الجينات بواسطة LNP عبر متبرعين (n = 2) باستخدام قياس التدفق الخلوي من خلال تحليل التعبير السطحي لـ CD45، و د) الرسم البياني المقابل. حفظ الخلايا الجذعية المكونة للدم بالتبريد والتجميد والإذابة بعد المعالجة بجزيئات النانو الدهنية: أظهر حفظ الخلايا الجذعية المكونة للدم المعالجة بجزيئات النانو الدهنية بالتبريد حيوية عالية وإنتاجية وفيرة. علاوة على ذلك، احتفظت الخلايا بتوزيع النمط الظاهري للخلايا الجذعية المكونة للدم القابلة للزرع مع الحفاظ على كفاءة تعطيل جين CD45. حفظ الخلايا الجذعية المكونة للدم بالتبريد بعد تعديل الجينات باستخدام تقنية CRISPR Cas9 بوساطة جزيئات النانو الدهنية. أ) رسم تخطيطي لدورات التجميد والإذابة للخلايا الجذعية المكونة للدم. ب) مستويات النمط الظاهري للخلايا الجذعية المكونة للدم القادرة على إعادة التكوين على المدى الطويل بعد الإذابة، أو قبل التجميد، عند نقطتي تجميد 24 أو 48 ساعة بعد المعالجة بجزيئات النانو الدهنية. ج) حيوية الخلايا واستعادة الخلايا الحية بعد دورة التجميد والإذابة لمدة 24 ساعة بعد المعالجة بجزيئات النانو الدهنية. د) كفاءة تعطيل جين CD45 الملاحظة في الخلايا الجذعية المكونة للدم المعالجة بجزيئات النانو الدهنية، سواء المجمدة أو الطازجة، من حيث إجمالي الخلايا الحية والنمط الظاهري القابل للزرع (CD34+ CD38- CD90+ CD133+). توسيع نطاق زراعة الخلايا وإنتاج جسيمات RNA-LNP: تتوفر مجموعات CD34+ HSC LNP على جهازي NanoAssemblr™ Spark™ و NanoAssemblr™ Ignite™. كما تتوفر الكواشف لتطوير عمليات التوسع والتصنيع وفقًا لممارسات التصنيع الجيدة (GMP) من خلال خدمات BioPharma. تُمكّن مجموعات CD34+ HSC LNP، بالاشتراك مع منصة NanoAssemblr™، من تحقيق أداء قوي ومتكافئ على كلٍ من جهازي Spark™ و Ignite™، وتوفر قابلية توسع سلسة من مرحلة الاكتشاف إلى الدراسات ما قبل السريرية. أ) تعطيل جين CD45، ب) تعطيل جين CD33 من إجمالي عدد الخلايا الحية، بالإضافة إلى ج) حيوية الخلايا المقابلة. يتضمن التحليل أكثر من 20 تجربة فريدة مع أكثر من 4 متبرعين مختلفين. د) تم تقييم تكاثر الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) غير المعالجة، والخلايا المعالجة بجسيمات LNP الفارغة، والخلايا المعالجة بجسيمات LNP المحملة بـ RNA بتقنية CRISPR-Cas9، باستخدام عداد خلايا آلي. هـ) تم تقييم قدرة الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) غير المعالجة، والخلايا الجذعية المكونة للدم الفارغة، والخلايا الجذعية المكونة للدم المعالجة بجزيئات نانوية دهنية محملة بـ CRISPR-Cas9 RNA، على تكوين المستعمرات باستخدام عداد آلي لوحدات تكوين المستعمرات (CFU)، وخمس تجارب مستقلة باستخدام جهاز Spark™، وتجربتين مستقلتين باستخدام جهاز Ignite™. مكونات المجموعة

	مجموعة CD34+ HSC LNP، 100 ميكرولتر، (رقم الجزء 1003000)	مجموعة CD34+ HSC LNP، 100 ميكرولتر مع الخراطيش، (رقم الجزء 1004000)	مجموعة CD34+ HSC LNP، 2 مل، (رقم الجزء 105000)
مزيج الدهون	100 ميكرولتر	100 ميكرولتر	2 مل
نوع محلول التركيب 1	400 ميكرولتر	400 ميكرولتر	1.6 مل
محلول التخفيف من النوع 1	1.5 مل	1.5 مل	100 مل (10X)
نوع محلول الحفظ بالتبريد 2	-	-	6 مل
البروتين الشحمي E3 (ApoE3)	100 ميكروغرام	100 ميكروغرام	500 يفعل
خراطيش سبارك™	-	5	-