Cytiva، 29874064، مجموعات الخلايا GenVoy-ILM™ T لـ mRNA

مجموعة GenVoy-ILM T Cell Kit لتحليل mRNA، سبارك مع الخراطيش مجموعة GenVoy-ILM™ T cell Kit for mRNA عبارة عن مزيج من كواشف الجسيمات النانوية الدهنية (LNP) تم تحسينه لتوصيل mRNA أو CRISPR Cas9 mRNA مع gRNA إلى الخلايا التائية البشرية الأولية باستخدام LNPs المحضرة على أنظمة NanoAssemblr™ Spark™ و Ignite™. توفر مجموعات GenVoy-ILM™ للخلايا التائية لـ mRNA المزايا التالية: كفاءة عالية في تعطيل الجينات والتعبير عنها: يمكن إيصال mRNA أو mRNA/sgRNA إلى الخلايا التائية البشرية الأولية المنشطة بكفاءة عالية في تعطيل الجينات. حيوية عالية للخلايا: الحفاظ على حيوية عالية للخلايا التائية، حتى بعد التلاعب الجيني المتسلسل. قابلية التوسع: توسيع نطاق أبحاث العلاج الخلوي على منصة NanoAssemblr™ من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة ما قبل السريرية. مُعتمدة مع سير عمل تصنيع الخلايا التائية: مُحسّنة ومُعتمدة لسير عمل زراعة الخلايا التائية. تُمكّن هذه المجموعات الباحثين من إنشاء طريقة ذات صلة سريرية وقابلة للتوسع لتوصيل الجينات وتعديلها خارج الجسم الحي، وذلك للنهوض بتطوير علاجات الخلايا التائية. يمكن استخدام هذه المجموعات في مراحل مختلفة من أبحاث وتطوير العلاج الخلوي، من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة ما قبل السريرية، عبر منصات NanoAssemblr™. نسبة أعلى من الخلايا التائية المُهندسة مقارنةً بالمعالجة الكهربائية (EP): استخدام مجموعة GenVoy-ILM™ T cell Kit for mRNA لإيصال الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) إلى الخلايا التائية البشرية الأولية المُنشطة يؤدي إلى زيادة عدد الخلايا التائية المُهندسة. تُظهر هذه الطريقة فعالية أكبر في إيصال الجينات مقارنةً بالمعالجة الكهربائية. تم قياس كفاءة النقل الجيني من خلال التعبير البروتيني باستخدام قياس التدفق الخلوي بعد 24 و48 ساعة من المعالجة. تم إجراء المعالجة الكهربائية باتباع بروتوكول الشركة المصنعة، بينما تم إجراء المعالجة باستخدام جسيمات النانو الدهنية (LNP) باتباع بروتوكول GenVoy-ILM™ T cell Kit for mRNA on Spark™. استُخدمت الخلايا غير المُعالجة (UT) كعينة ضابطة. **p<0.01، ****p<0.0001 باستخدام تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA). تعبير بروتيني خلوي متجانس: هندسة الخلايا التائية البشرية الأولية باستخدام مجموعة GenVoy-ILM™ T cell Kit for mRNA ينتج عنه تعبير بروتيني متجانس للغاية عبر مجموعة الخلايا المُعالجة. تم إنشاء مخططات متوسط ​​شدة التألق (MFI) لتعبير البروتين على سطح الخلية باستخدام قياس التدفق الخلوي بعد 24 و48 ساعة من المعالجة. تم إجراء المعالجة الكهربائية (EP) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة. استُخدمت الخلايا غير المعالجة (UT) كعناصر تحكم. خلايا T عالية الحيوية: تحافظ خلايا T البشرية الأولية المنشطة على حيويتها العالية بعد توصيل الجينات خارج الجسم الحي باستخدام مجموعة GenVoy-ILM™ T cell Kit لـ mRNA. تم قياس حيوية الخلايا باستخدام قياس التدفق الخلوي بعد 24 و48 ساعة من المعالجة. تم إجراء المعالجة الكهربائية (EP) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة، وتم إجراء معالجة LNP وفقًا لبروتوكول GenVoy-ILM™ T cell Kit لـ mRNA على Spark™. استُخدمت الخلايا غير المعالجة (UT) كعناصر تحكم. ****p<0.0001 بواسطة تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA). هندسة متعددة الخطوات لخلايا T لعلاج خلوي جاهز للاستخدام: تحقيق كفاءة عالية في تحرير الجينوم مع مستويات عالية من التعبير عن مستقبلات المستضد الخيمري (CAR) لـ CD19. يسمح هذا بهندسة خلايا CAR T "شاملة" وظيفية وقابلة للحياة تقضي بفعالية على خلايا الورم CD19+. أ) رسم تخطيطي للتجربة. أُضيفت جسيمات نانوية دهنية حاملة لـ mRNA تحتوي على sgRNA وmRNA لـ Cas9 إلى خلايا T الأولية. تم تكثير الخلايا قبل معالجتها بجسيمات نانوية دهنية حاملة لـ mRNA لـ CD19 CAR. بعد 24 ساعة من المعالجة بجسيمات CAR mRNA-LNP، أُجري اختبار قتل خلايا T الموجبة لـ CD19 لمدة 16 ساعة. ب) تم تقييم كفاءة تعطيل مستقبلات الخلايا التائية (TCR). تم اختيار عينة البداية السالبة لـ TCR لتنقية مجموعة الخلايا السالبة لـ TCR بشكل أكبر. ج) اليسار: النسبة المئوية لتعبير CD19 CAR بعد 24 ساعة من المعالجة بجسيمات CAR mRNA-LNP بتركيز 3.2 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي لكل مليون خلية، عندما تكون مجموعة الخلايا موجبة لـ TCR أو سالبة لـ TCR. اليمين: حيوية الخلايا المقابلة، مُقاسة بالنسبة لمجموعة الخلايا غير المعالجة. د) القتل الوظيفي لخلايا B الموجبة لـ CD19 (SUP-B15) بواسطة خلايا T غير المعالجة، أو خلايا T موجبة لـ TCR/CAR، أو خلايا T معدلة جينيًا سالبة لـ TCR/CAR، بنسب الخلايا الفعالة إلى الخلايا المستهدفة (E:T) الموضحة. تم تطبيق جرعة 3.2 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي لكل مليون خلية على جميع العينات. تمثل أشرطة الخطأ الانحراف المعياري. تم تقييم الدلالة الإحصائية باستخدام اختبارات t أو تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) بين المجموعات الموضحة (2). التوسع من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة ما قبل السريرية: تُظهر البيانات أن مجموعات GenVoy-ILM™ للخلايا التائية ومنصة NanoAssemblr™ القابلة للتوسع تُتيح أداءً قويًا ومتكافئًا على كلٍ من جهازي Spark™ وIgnite™، مما يُتيح التوسع من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة ما قبل السريرية. أ) كفاءة نقل جين GFP و ب) كفاءة نقل جين CD19 CAR بعد 24 ساعة من إضافة mRNA-LNP. ج) مستويات تعطيل هدف واحد (مستقبل الخلية التائية، TCR)، و د) تعطيل هدفين (TCR وCD52) من خلال توصيل sgRNA وCas9 mRNA. هـ) القتل الوظيفي للخلايا البائية CD19+ (SUP-B15) في تجربة زراعة مشتركة لمدة 16 ساعة. لجميع الخلايا: تم تطبيق جرعة 3.2 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي لكل مليون خلية على خلايا تي البشرية الأولية. تم تحضير جسيمات RNA-LNPs النانوية وفقًا لدليل مستخدم GenVoy-ILM™ T cell Kit for mRNA على Spark™ أو Ignite™. تم الكشف عن متوسط ​​التعبير الجيني وتعطيل الجينات باستخدام قياس التدفق الخلوي، حيث أظهر ما لا يقل عن 8 تحضيرات مستقلة من جسيمات RNA-LNPs النانوية و2 من المتبرعين. تم الكشف عن أداء القتل الوظيفي باستخدام قياس التدفق الخلوي، حيث أظهر ما لا يقل عن 2 من تحضيرات جسيمات RNA-LNPs النانوية و2 من المتبرعين. تمثل أشرطة الخطأ الانحراف المعياري، وتم تقييم الدلالة الإحصائية باستخدام اختبارات t بين المجموعات المختارة (2). مكونات المجموعة

	مجموعة GenVoy-ILM™ للخلايا التائية لـ mRNA، Spark™، (رقم الجزء 1000700)	مجموعة GenVoy-ILM™ للخلايا التائية لـ mRNA مع خرطوشة Spark™ 5، (رقم الجزء 1000683)	مجموعة GenVoy-ILM™ T cell Kit لـ mRNA، Ignite™، 3 مل، (رقم الجزء 1001144)	مجموعة GenVoy-ILM™ للخلايا التائية لـ mRNA، Ignite™، 6 مل، (رقم الجزء 1001161)
مزيج الدهون	90 ميكرولتر	90 ميكرولتر	3 مل	6 مل
محلول منظم للتركيبة (10X)	30 ميكرولتر	30 ميكرولتر	2 مل	4 مل
محلول التخفيف (10X)	900 ميكرولتر	900 ميكرولتر	40 مل	80 مل
محلول الحفظ بالتبريد (2X)	-	-	3 مل	6 مل
البروتين الشحمي-إي (ApoE)	50 ميكروغرام	50 ميكروغرام	500 ميكروغرام	500 ميكروغرام × 2
خراطيش شرارة	-	5	-	-