سيتيفا، 17085501، أعمدة نيك

أعمدة أميرشام نيك - 20 تُستخدم أعمدة NICK لتنقية شظايا الحمض النووي المترجمة بواسطة nick ولفصل أي مسبار موسوم عن النيوكليوتيدات الموسومة غير المدمجة. • لتنقية سريعة للحمض النووي الموسوم (بطول ≥ 20 قاعدة) من النيوكليوتيدات المشعة غير المدمجة باستخدام كروماتوغرافيا التدفق بالجاذبية • مُعبأ مسبقًا بمادة سيفادكس G-50 DNA Grade (انظر سيفادكس G-50 DNA Grade وسيفادكس G-100 DNA Grade ) في ماء مقطر مع 0.15% من مبيد كاثون CG/ICP الحيوي • يمكن استيعاب أحجام عينات تصل إلى 100 ميكرولتر أعمدة NICK جاهزة للاستخدام الفوري وتعمل بالتدفق بفعل الجاذبية. تُظهر الاختبارات أن 97% على الأقل من النشاط الإشعاعي المُطبق في خليط NICK يخرج في قمتين منفصلتين بوضوح، تُقابلان جزيئات الحمض النووي المُوسومة والنيوكليوتيدات غير المُدمجة، على التوالي. يتم استرداد 90% على الأقل من الحمض النووي المُطبق، ويمكن استخدامه بعد ذلك في بروتوكولات تهجين الحمض النووي. الحد الأقصى لحجم العينة هو 100 ميكرولتر. تُعدّ تقنية ترجمة الشقوق تقنيةً تُستخدم فيها بوليميراز الحمض النووي الأول (DNA Polymerase I) لاستبدال بعض نيوكليوتيدات تسلسل الحمض النووي بنظائرها الموسومة، مما يُنتج تسلسل حمض نووي موسوم يُمكن استخدامه كمسبار في التهجين الموضعي الفلوري (FISH) أو تقنيات التلطيخ. كما يُمكن استخدامها للوسم الإشعاعي في تقنيات مثل التلطيخ الجنوبي. تُسمى هذه العملية بترجمة الشقوق لأن الحمض النووي المراد وسمه يُعالج بإنزيم DNase لإنتاج "شقوق" أحادية السلسلة. يتبع ذلك استبدال النيوكليوتيدات في مواقع الشقوق بواسطة بوليميراز الحمض النووي الأول، الذي يُطيل الطرف 3'، ويزيل النيوكليوتيدات بواسطة نشاط الإكسونوكلياز 5'-3'، ويستبدلها بـ dNTPs. لوسم قطعة من الحمض النووي لاستخدامها كمسبار في التلطيخ، يتم وسم أحد النيوكليوتيدات المُدمجة في التفاعل إشعاعيًا، أو يُمكن ربط فلوروفور بدلاً من ذلك للوسم الفلوري، أو يُستخدم كمستضد للكشف المناعي. يمكن استخدام سيفادكس G-50 DNA Grade في نطاق واسع من التطبيقات، بما في ذلك إزالة الأملاح من الحمض النووي، وتبديل المحاليل المنظمة، وإزالة النيوكليوتيدات غير المدمجة من قليل النيوكليوتيدات الموسومة في نهايتها. ويمكن تعبئة سيفادكس G-50 في أعمدة MicroSpin فارغة لاستخدامها في هذه التطبيقات. يُعد سيفادكس G-50 أحد خمسة أنواع مختلفة من راتنجات G، تتراوح من G-10 للجزيئات الصغيرة إلى G-75 للجزيئات الأكبر. يُعتبر سيفادكس G-50 راتنج ترشيح هلامي راسخ الاستخدام لإزالة الأملاح وتبديل المحاليل المنظمة للجزيئات الحيوية التي يزيد وزنها الجزيئي عن 30000، ويمكن استخدامه، مع بروتوكول الطرد المركزي، لتنقية الحمض النووي وقليل النيوكليوتيدات التي يزيد طولها عن 20 قاعدة. كبديل، يمكن استخدام سيفادكس G-25. يتميز سيفادكس G-25 بحد استبعاد يبلغ حوالي 5000 دالتون، ومع بروتوكول الطرد المركزي، يمكن استخدامه لأي حمض نووي يزيد طوله عن 10 قواعد. لذا، يُعدّ كلا نوعي سيفادكس مناسبين للغاية لتنقية قليل النوكليوتيدات أو شظايا الحمض النووي الصغيرة جدًا بعد التخليق أو في الوسم الإشعاعي. يُباع سيفادكس G-25 المُخصّص للحمض النووي وسيفادكس G-50 المُخصّص للحمض النووي بشكل منفصل.