سيتيفا، 29108107، مجموعة تضخيم الحمض النووي للخلايا المفردة من جينومي فاي

مجموعة تضخيم الحمض النووي للخلايا المفردة من جينومي فاي
تجمع مجموعة تضخيم الحمض النووي GenomiPhi للخلايا المفردة بين القدرات الفريدة لبوليميراز الحمض النووي Phi29 وتركيبة محسّنة لتضخيم الحمض النووي الجينومي من 1 إلى 1000 خلية دون تداخل خلفي.
• تضخيم الجينوم الكامل للحمض النووي الجينومي من خلية واحدة فقط.
• عملية تنظيف مبتكرة تقمع الخلفية مما يسمح بحساسية تصل إلى 1 فيمتوغرام من الحمض النووي المدخل.
• تقنية الإزاحة المتساوية الحرارة البسيطة (MDA) باستخدام بوليميراز الحمض النووي Phi29.
• يمكن إكمال عمليات التضخيم في أقل من 3 ساعات مع أقل من 15 دقيقة من العمل اليدوي.
• مُحسَّن لتعزيز تحلل الخلايا الكامل مع تمسخ موحد للحمض النووي قبل التضخيم.
استخلاص الحمض النووي الجينومي عالي الجودة من خلية واحدة: يُعدّ التحليل الجينومي للخلايا المفردة مجالًا ناشئًا، حيث يركز الباحثون على الاختلافات داخل مجموعات الخلايا. وقد أثّر حجم الحمض النووي الجينومي اللازم لإجراء مجموعة كاملة من الاختبارات على التقدم المحرز، وبينما أصبحت التقنيات أكثر حساسية، لا يزال من غير الممكن مشاركة الحمض النووي لخلية واحدة بين مختلف المنصات.
تم تحسين مجموعة تضخيم الحمض النووي Single Cell GenomiPhi لتضخيم الحمض النووي الجينومي بالكامل من خلية واحدة فقط، مما ينتج عنه كميات ضئيلة من الحمض النووي عالي الجودة (بالميكروغرامات) لاستخدامها في التطبيقات اللاحقة. عند استخدام كميات ضئيلة جدًا من الحمض النووي، يعتمد نجاح التضخيم على جودة الكواشف. وقد طُوّرت مجموعة Single Cell GenomiPhi مع مراعاة هذه النقطة. تم تحسين كواشف التحلل لتحرير الحمض النووي الجينومي بالكامل من الخلية، ثم فصل سلسلتي الحمض النووي لتمكين التضخيم الأمثل والتغطية الكاملة. يتم كبح التضخيم الخلفي، الذي غالبًا ما يرتبط بتضخيم الإزاحة المتعددة (MDA)، طوال فترة الحضانة بحيث يتم تضخيم الحمض النووي المدخل فقط. تضمن الكواشف عالية الجودة وخطوة التنظيف الأنزيمي الاختيارية الخاصة بالبروتوكول إزالة أي ملوثات محتملة للحمض النووي قد تدخل أثناء الإعداد قبل كل تفاعل على حدة. بالإضافة إلى ذلك، تضمن عمليات التصنيع لدينا، بما في ذلك التنظيف بالأشعة فوق البنفسجية والكواشف الإنزيمية، خلو جميع المجموعات من أي تلوث قابل للكشف بالحمض النووي، وتتيح حساسية تضخيم تصل إلى 1 فيمتوغرام من الحمض النووي الجينومي. من الفيمتوغرام إلى الميكروغرام باستخدام سير عمل بسيط، يوفر Single Cell GenomiPhi سير عمل بسيط من خطوتين لتضخيم الجينوم الكامل. تستغرق عملية التضخيم من ساعتين إلى أربع ساعات حسب كمية الحمض النووي الأولي، ويمكن الحصول على غلة تتراوح من 4 إلى 7 ميكروغرام. يتميز التضخيم بتجانس عالٍ على كامل الجينوم، بحيث يظل تمثيل المواضع قريبًا جدًا من عينة الحمض النووي الأصلية. علاوة على ذلك، يتم التضخيم بدقة عالية جدًا بفضل نشاط التدقيق اللغوي لإنزيم بوليميراز الحمض النووي Phi29. يمكن تضخيم الحمض النووي من الخلايا المفردة بشكل متكرر وموثوق لاستخدامه في العديد من التطبيقات اللاحقة. وقد استُخدم Single Cell GenomiPhi بنجاح لإنشاء قالب لتحديد النمط الجيني لمصفوفة SNP، وتقنية CGH للمصفوفات، وتقنية التسلسل من الجيل التالي.