شركة كياجين، 205313، مجموعة كوانتي تيك ريف. للنسخ (200)

لتحضير 200 تفاعل بحجم 20 ميكرولتر: 4 × 100 ميكرولتر من محلول إزالة الحمض النووي الجينومي بتركيز 7x، 4 × 50 ميكرولتر من إنزيم النسخ العكسي Quantiscript، 4 × 200 ميكرولتر من محلول Quantiscript RT بتركيز 5x، 4 × 50 ميكرولتر من مزيج بادئات النسخ العكسي، 4 × 1.9 مل من الماء الخالي من إنزيم RNase

سمات

- تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) وإزالة الحمض النووي الجينومي (gDNA) في غضون 20 دقيقة فقط
- إنتاجية عالية من الحمض النووي التكميلي حتى من النسخ ذات الوفرة المنخفضة
- تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من منطقتي 5' و 3' من النسخ
- لا حاجة لتصميم بادئات أو مجسات خاصة بالحمض النووي الريبي

أداء

قيم CT لـ IL12A (تعبير منخفض): قيم CT لـ IL1RN (تعبير أعلى)
كمية الحمض النووي الريبوزي المدخل (نانوغرام): QIAGEN
1000: 30.9
100: 34.2
10: 37.8
1: ND

باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit، تتم إزالة الحمض النووي الجينومي الملوث في عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) بكفاءة وسرعة باستخدام محلول gDNA Wipeout Buffer الفريد (انظر الشكل: إزالة فعالة للحمض النووي الجينومي من أجل تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي الكمي في الوقت الحقيقي). تُعد إزالة الحمض النووي الجينومي أمرًا بالغ الأهمية للحصول على نتائج دقيقة للتعبير الجيني، ولا يكون تصميم البادئات أو المجسات الخاصة بالحمض النووي الريبوزي (RNA) ممكنًا دائمًا. مع محلول gDNA Wipeout Buffer، يتم توفير الوقت وتقليل التكاليف، حيث لا حاجة إلى هضم منفصل باستخدام إنزيم DNase، سواء أثناء تنقية عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) أو بعدها.

يُمكّن انجذاب إنزيم النسخ العكسي Quantiscript Reverse Transcriptase العالي للحمض النووي الريبوزي (RNA)، بالإضافة إلى محلول Quantiscript RT Buffer، من الحصول على كميات كبيرة من الحمض النووي التكميلي (cDNA) من أي قالب RNA (انظر الجدول "زيادة إنتاجية cDNA للنسخ الأقل وفرة"). حتى القوالب الصعبة، مثل تلك التي تحتوي على نسبة عالية من GC أو ذات بنية ثانوية معقدة، يتم نسخها عكسيًا بنجاح.

يحتوي مزيج بادئات النسخ العكسي على مزيج مُحسَّن خصيصًا من بادئات أوليغو-dT وبادئات عشوائية، مما يُتيح تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من جميع مناطق نسخ الحمض النووي الريبوزي (RNA)، حتى من المناطق الطرفية 5' (انظر الشكل: الكشف الحساس عن هدف في المنطقة الطرفية 5' لنسخة بطول 12.5 كيلوبايت). على عكس مجموعات التوريد الأخرى، تُوفر مجموعة QuantiTect للنسخ العكسي كميات كبيرة من قالب الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (PCR) في الوقت الحقيقي، بغض النظر عن موقع المنطقة المستهدفة المُضخَّمة على النسخة، كما تُوفر حساسية أكبر في الكشف عن الجينات منخفضة الوفرة (انظر الشكل: حساسية أعلى في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي ثنائي الخطوات في الوقت الحقيقي). تُتيح مجموعة QuantiTect للنسخ العكسي أيضًا إمكانية تكرار أكبر في تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي.

مبدأ

المكون: الفوائد
محلول إزالة الحمض النووي الجينومي: الكشف عن الحمض النووي الريبي فقط في تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي
إنزيم النسخ العكسي Quantiscript: استخدام نطاق واسع من كميات الحمض النووي الريبي (من 10 بيكوغرام إلى 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي) حساسية عالية
مخزن Quantiscript RT المؤقت: قراءة القوالب الصعبة
مزيج بادئات النسخ العكسي: تخليق الحمض النووي التكميلي من جميع مناطق النسخ، حتى من المناطق 5'

إنزيم النسخ العكسي QuantiTect هو مزيج مبتكر من إنزيمي النسخ العكسي Omniscript وSensiscript، يتميز بألفة عالية للحمض النووي الريبوزي (RNA) وقدرة على تخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) من كميات متنوعة من الحمض النووي الريبوزي (من 10 بيكوغرام إلى 1 ميكروغرام). على عكس مجموعات النسخ العكسي من موردين آخرين، توفر مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit كميات وفيرة من قالب الحمض النووي التكميلي (cDNA) لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) بغض النظر عن موقع المنطقة المستهدفة المُضخمة على النسخة. حتى القوالب الصعبة، مثل تلك ذات المحتوى العالي من الجوانين والسيتوزين (GC) أو البنية الثانوية المعقدة، يتم نسخها عكسيًا بنجاح. كما تم تحسين محلول QuantiTect RT Buffer ليكون متوافقًا مع محلول تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR).

للحصول على نتائج دقيقة في فحوص التعبير الجيني بتقنية RT-PCR في الوقت الحقيقي، من المهم تضخيم الحمض النووي التكميلي (cDNA) والكشف عنه فقط. يمكن تجنب تداخل الحمض النووي الجينومي بتصميم بادئات أو مجسات تغطي حدود الإكسون/الإكسون. مع ذلك، في الحالات التي يتعذر فيها ذلك (مثلًا، إذا كان الحمض النووي التكميلي من جين أحادي الإكسون)، فمن الضروري أن تكون عينة الحمض النووي الريبوزي (RNA) الأولية خالية من الحمض النووي الجينومي. باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit، تتم إزالة الحمض النووي الجينومي الملوث في عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) بكفاءة وسرعة باستخدام محلول gDNA Wipeout Buffer الفريد. يوفر ذلك الوقت ويقلل التكاليف، إذ لا حاجة إلى هضم منفصل باستخدام إنزيم DNase، سواء أثناء تنقية عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) أو بعدها. كما لا حاجة لتصميم بادئات أو مجسات خاصة بالحمض النووي الريبوزي (RNA).

إجراء

لا تستغرق عملية إزالة الحمض النووي الجينومي وتخليق الحمض النووي التكميلي سوى 20 دقيقة باستخدام مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit (انظر المخطط الانسيابي "تخليق سريع ومريح للحمض النووي التكميلي"). تتميز هذه العملية بالسرعة والسهولة، حيث يتم إجراء كلا التفاعلين باستخدام نفس درجة حرارة الحضانة ويتم تحضيرهما باستخدام مزيج رئيسي.

تتضمن مجموعة QuantiTect للنسخ العكسي كل ما تحتاجه لتخليق الحمض النووي التكميلي (cDNA) بسرعة. يُحضن الحمض النووي الريبوزي (RNA) النقي لفترة وجيزة في محلول gDNA Wipeout Buffer لإزالة الحمض النووي الجينومي الملوث بفعالية. على عكس الطرق الأخرى، تُستخدم عينة الحمض النووي الريبوزي مباشرةً في النسخ العكسي، باستخدام مزيج رئيسي مُحضر من إنزيم Quantiscript Reverse Transcriptase، ومحلول Quantiscript RT Buffer، ومزيج بادئات النسخ العكسي. بفضل إنزيم Quantiscript Reverse Transcriptase، يُمكن نسخ الحمض النووي الريبوزي في درجات حرارة منخفضة، حتى عبر البنية الثانوية المعقدة، مما يضمن بقاء الحمض النووي الريبوزي سليمًا - يحدث التفاعل بالكامل عند 42 درجة مئوية، ثم يُعطل عند 95 درجة مئوية. لا حاجة لخطوات إضافية لفصل الحمض النووي الريبوزي، أو ربط البادئات، أو هضم الحمض النووي الريبوزي بواسطة إنزيم RNase H.

التطبيقات

تتيح مجموعة QuantiTect Reverse Transcription Kit إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي في الوقت الحقيقي بكفاءة عالية وحساسية لجميع أنواع المواد الأولية، بما في ذلك العينات التي تم تشريحها بالليزر وخزعات الأنسجة.