كواشف تحليل البروتين من Thermo Fisher لتقنيات Western Blot و ELISA والبروتيوميات

من التحديد الكمي الدقيق للبروتينات إلى تقنية ويسترن بلوت، والتنقية بالتقارب، والربط المتقاطع، وعلم البروتينات القائم على قياس الطيف الكتلي، تقدم لكم هذه المجموعة المختارة بعناية كواشف Thermo Fisher عالية الأداء والموثوقة في علم الأحياء البروتيني اليومي. استكشفوا حسب حالة الاستخدام، وقارنوا المواصفات، وانتقلوا مباشرةً إلى مجموعات الأدوات والتركيبات الكيميائية المعتمدة.

محتويات هذه المجموعة (حسب فئة المنتج)

تم تنظيم هذه المجموعة لمساعدتك في العثور بسرعة على الكاشف المناسب لسير عملك، مع الحفاظ على شفافية رموز المنتجات (SKUs) لأغراض الشراء والامتثال. فيما يلي أهم المجموعات التي ستجدها مع أمثلة توضيحية.

• فحوصات تحديد كمية البروتين - BCA (على سبيل المثال، Pierce™ BCA Protein Assay Kit، Cat. 23225 )، Micro BCA ( 23227 )، كاشف فحص 660 نانومتر ( 22660 ) ومجموعة كاملة ( 22662 ).

• تحلل الخلايا والمثبطات - محلول تحلل RIPA ( 89900 )؛ كوكتيل مثبطات البروتياز Halt™ 100×، خالٍ من EDTA ( 87785 ) أو يحتوي على EDTA ( 87786 )؛ مثبط البروتياز/الفوسفاتاز المدمج ( 78440 ).

• كواشف الفصل الكهربائي والتلطيخ الغربي - ركيزة SuperSignal™ West Pico PLUS ECL ( 34580 )؛ ركيزة West Femto ( 34095 )؛ أغشية نقل PVDF 0.45 ميكرومتر لفة ( 88518 )؛ أغشية نيتروسليلوز 0.45 ميكرومتر ( 88018 )؛ سلم البروتين الملون مسبقًا PageRuler™ Plus ( 26619 ).

• أدوات التقارب والتنظيف - الخرز المغناطيسي للبروتين A/G ( 88802 )؛ HisPur™ Ni-NTA الراتنج ( 88221 )؛ أعمدة تحلية المياه Zeba™ Spin 7K MWCO ( 89882 ، 89890 ).

• الاقتران والربط المتقاطع — EZ-Link™ Sulfo-NHS-Biotin ( 21217 )؛ EZ-Link™ NHS-PEG4-Biotin ( 21330 )؛ BS3 crosslinker ( 21580 ، 21586 ).

• تحضير عينات البروتينات - بروتياز التربسين من بيرس™، درجة MS ( 90057 )؛ ملصقات TMTpro™ 16-plex ( A44520 ) و18-plex ( A52045 ).

التوافق والمواصفات (مرجع سريع)

يُساعد اختيار الكواشف التي تتوافق مع مصفوفة العينة وطريقة الكشف على توفير الوقت لاحقًا. استخدم هذه النظرة الموجزة للتأكد من التوافق قبل الطلب، ثم اطّلع على جداول البيانات حسب الحاجة.

التطبيقات وسير العمل (أربع بطاقات بدء سريع)

تساعدك هذه العمليات البسيطة والموثوقة على تقليل المتغيرات والحفاظ على اتساق البيانات عبر التجارب. اتبع الخطوات واستبدل رموز المنتجات (SKUs) المذكورة أعلاه حسب الحاجة.

أ. لطخة ويسترن — من المستخلص إلى الإشارة

1. التحلل في RIPA ( 89900 ) + مثبطات التوقف ( 87785 ).

2. قم بالقياس الكمي (BCA 23225 أو 660 نانومتر 22660 ).

3. قم بتشغيل SDS-PAGE؛ ثم انقل إلى PVDF ( 88518 ) أو نيتروسليلوز ( 88018 ).

4. الكشف باستخدام West Pico PLUS ( 34580 ) أو West Femto ( 34095 ).

ب. الملكية الفكرية/الملكية الفكرية المشتركة — إثراء هدفك

1. مستخلص ما قبل التصفية؛ يرتبط بخرزات البروتين A/G المغناطيسية ( 88802 ).

2. اغسل؛ ثم قم بإذابة المادة في محلول منظم معتدل.

3. قم بالتحليل باستخدام تقنية SDS-PAGE وتقنية Western blot كما هو موضح أعلاه.

ج. تنقية علامة الهيستيدين + التنظيف

1. اربط بـ HisPur Ni-NTA الراتنج ( 88221 ) في ظل ظروف أصلية أو تغيير طبيعة.

2. قم بالاستخلاص باستخدام الإيميدازول؛ ثم قم بتبادل المحلول المنظم على أعمدة زيبا (0.5-2 مل: 89882 ، 89890 ).

3. قم بتحديد الكمية ثم انتقل إلى التحليلات اللاحقة.

د. علم البروتينات - الهضم والتحليل المتعدد

1. اختزال/ألكلة؛ هضم باستخدام تربسين بيرس MS-grade ( 90057 ).

2. قم بتوسيم الببتيدات باستخدام TMTpro 16-plex ( A44520 ) أو 18-plex ( A52045 ).

3. قم بالدمج والتجزئة والتحليل باستخدام تقنية LC-MS/MS.

نصائح عملية (لتحسين فرص النجاح من المحاولة الأولى)

قبل البدء، يمكن لبعض التعديلات البسيطة أن تُحسّن بشكل ملحوظ من إمكانية تكرار النتائج ونسبة الإشارة إلى الضوضاء في جميع مراحل العمل. احتفظ بهذه الاقتراحات في متناول يدك أثناء تخطيطك وتوثيقك لعمليات التشغيل.

• قم بمطابقة كيمياء التحليل مع المصفوفة. استخدم 660 نانومتر عندما يكون استخدام المنظفات الأيونية أو المختزلات القوية أمراً لا مفر منه؛ أضف IDCR إذا لزم الأمر لزيادة التسامح بشكل أكبر.

• اختر الغشاء حسب الحجم. يناسب غشاء PVDF أو النيتروسليلوز بمسام 0.45 ميكرومتر معظم البروتينات؛ ضع في اعتبارك استخدام غشاء بمسام 0.2 ميكرومتر للبروتينات التي يقل وزنها الجزيئي عن 20 كيلو دالتون لتقليل التسرب.

• اختر الركيزة المناسبة لوفرة التعبير. استخدم West Pico PLUS للتعبير الروتيني؛ وWest Femto للأهداف ذات التركيز المنخفض جدًا لتجنب التعرض المفرط.

• احمِ البروتينات منذ البداية. أضف مثبطات التوقف عند التحلل واحفظ العينات باردة لمنع التحلل البروتيني.

• لتنقية علامات الهيستيدين، اغسل باستخدام إيميدازول معتدل (20-40 ملي مولار) لتقليل الارتباط غير المحدد قبل الإذابة.

• استخدم خطوات إزالة الأملاح بعد وضع العلامات أو الربط المتقاطع أو تغييرات المحلول المنظم لتعزيز أداء التحليل اللاحق.

• قم بتوثيق رقم الدفعة ورمز المنتج في نظام دفتر المختبر الإلكتروني الخاص بك إلى جانب عوامل التخفيف؛ وهذا يسرع عمليات التدقيق ونقل الطريقة.

الأسئلة الشائعة

إجابات بسيطة على الأسئلة التي نسمعها في أغلب الأحيان، مع روابط للوثائق الأساسية لمزيد من القراءة المتعمقة.

س1: متى يجب علي اختيار اختبار 660 نانومتر بدلاً من اختبار BCA؟
ج: إذا كانت عيناتك تحتوي على منظفات أيونية أو مستويات عالية من المُختزِل، فإن فحص 660 نانومتر يكون أكثر تسامحًا بشكل عام (ويمكن دمجه مع IDCR). استخدم BCA عندما تكون المصفوفة أبسط وتريد نطاقًا ديناميكيًا واسعًا مع معايير مُطابقة.

س2: PVDF أم نيتروسليلوز - ما هو الأفضل للطختي؟
ج: يوفر البولي فينيليدين فلورايد (PVDF) ارتباطًا أفضل بالبروتين ومتانةً أكبر لإعادة التحليل؛ أما النيتروسليلوز فهو سريع ويُعطي خلفية منخفضة. كلا النوعين بحجم 0.45 ميكرومتر مناسبان لمعظم البروتينات.

س3: ما هي مادة الركيزة الكيميائية الضوئية التي يجب أن أبدأ بها؟
ج: ابدأ بـ West Pico PLUS للأهداف النموذجية؛ انتقل إلى West Femto إذا كان التعبير منخفضًا جدًا أو إذا كنت بحاجة إلى أعلى حساسية دون تمديد أوقات التعريض.

س4: هل يمكنني استخدام HisPur Ni-NTA في ظل ظروف التشويه؟
ج: نعم. إن HisPur Ni-NTA متوافق مع سير العمل الأصلي أو المغير للبروتين؛ فقط تأكد من أن الإيميدازول ودرجة الحموضة مضبوطة.

س5: ما هي عملية تحضير البروتينات القياسية من الخلايا إلى LC-MS؟
أ: التحلل باستخدام المثبطات، والاختزال/الألكلة، والهضم باستخدام تربسين بيرس (درجة MS)، والتنظيف، والتحليل المتعدد باستخدام علامات TMTpro قبل LC-MS/MS.

دعوة للعمل - قم ببناء مجموعتك واحصل على نتائج موثوقة

هل أنت مستعد لتجهيز سير عملك؟ أضف المنتجات المذكورة أعلاه إلى سلة التسوق، أو تواصل معنا للحصول على قائمة مواد مخصصة حسب التطبيق (التلطيخ الغربي، أو الترسيب المناعي، أو IMAC، أو البروتينات). إذا شاركتنا نوع العينة ونظام الكشف، فسنقترح عليك باقة تناسب ميزانيتك وجدولك الزمني.