BD، 550011، BD Pharmingen™ مضاد الفأر النقي المضاد للإنترفيرون غاما البشري

الاسم البديل: IFNG؛ انترفيرون جاما. انترفيرون γ؛ إنترفيرون من النوع الثاني؛ ماف
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، قرد الريسوس، قرد المكاك، قرد البابون (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
مناعة: بروتين IFN-γ البشري المؤتلف
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)، الكيمياء المناعية الخلوية (يتم اختبارها أثناء التطوير)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_393531
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها - الكيمياء المناعية الخلوية: للحصول على أفضل تلوين مناعي خلوي غير مباشر، يجب معايرة الجسم المضاد B27 (≤ 1 ميكروغرام) وتصويره من خلال إجراء تلوين من ثلاث خطوات. يرجى الاطلاع على البروتوكول أدناه للحصول على وصف مفصل لإجراء الكيمياء المناعية الخلوية. تُعد طريقة الأفيدين/البيوتين طريقة حساسة للغاية، لأنها تستخدم مزيجًا من الأفيدين ومركبات الإنزيم البيوتينيلية لزيادة الإشارات المناعية الإنزيمية. وللكشف الأمثل عن الخلايا المنتجة للسيتوكينات، يُفضل استخدام نظام إنزيم بيروكسيداز الفجل. بروتوكول الكيمياء المناعية الخلوية للسيتوكينات - الكواشف المطلوبة: 1. محلول التثبيت: يُذاب 5% فورمالين (أو 10% فورمالين، CMS، رقم المنتج 245-684) في محلول ملحي مُخفف بالفوسفات (PBS) (محلول Bacto FA، مختبرات Difco، رقم المنتج 2314-15-0)، أو محلول تثبيت BD Pharmingen™ ICC (BD، رقم المنتج 550010). 2. محلول حجب البيروكسيداز الداخلي: كاشف حجب البيروكسيداز DAKO (DAKO، رقم المنتج S2001). 3. محلول حجب البيوتين الداخلي: مجموعة حجب البيوتين/أفيدين (مختبرات Vector، رقم المنتج SP-2001). ٤. محلول تخفيف الأجسام المضادة: محلول تخفيف الأجسام المضادة BD™ Pharmingen للتلوين المناعي النسيجي (رقم المنتج ٥٥٩١٤٨) مُدعّم بالصابونين. ٥. شرائح مجهرية: شرائح لاصقة (شركة إيري ساينتيفيك، رقم المنتج ER-202B-AD) أو شرائح Colorfrost /Plus (شركة فيشر، رقم المنتج ١٢-٥٥٠-١٧) للتحضير الخلوي. ٦. نظام الكشف: ستربتأفيدين-بيروكسيداز الفجل (HRP) من BD Pharmingen (رقم المنتج ٥٥٠٩٤٦). ٧. وسط تثبيت للتخزين قصير الأمد: Aqua-mount® (مختبرات ليرنر، رقم المنتج ١٣٨٠٠). ٨. مجموعة ركيزة DAB (تحتوي على 3،3-ثنائي أمينوبنزيدين رباعي الهيدروكلوريد)، (رقم المنتج من BD: 550880) الأجسام المضادة الثانوية ١. بيوتين ماعز مضاد للفأر IgG (رقم المنتج: 550337) إجراء التلوين المناعي الخلوي لتحضيرات الخلايا المفردة يصف هذا الإجراء تقنية التلوين المناعي الإنزيمي للسيتوكينات داخل الخلايا المفردة المثبتة على شرائح مجهرية عن طريق الالتصاق (شرائح لاصقة) أو الطرد المركزي (أجهزة الطرد المركزي الخلوي). الشرائح اللاصقة ١. اجمع الخلايا واغسلها مرتين في محلول ملحي فوسفاتي (PBS) باستخدام الطرد المركزي (400 × جم لمدة 5 دقائق) لإزالة البروتين المتبقي. ٢. اضبط تركيز الخلايا عند 4-5 × 10⁶ خلية/مل في محلول ملحي فوسفاتي (PBS). 3. ضع 20 ميكرولتر من معلق الخلايا في كل بئر من شرائح الالتصاق، واتركها تلتصق في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. يُرجى ملاحظة أنه يجب غسل الشرائح بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق قبل نقل الخلايا. 4. ثبّت الخلايا على الشرائح باستخدام محلول التثبيت لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 5. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة 5 دقائق لكل مرة. 6. احجب الشرائح بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) المُضاف إليه 1% (وزن/حجم) من ألبومين المصل البقري (BSA) (من شركة سيجما) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة أو 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. 7. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) ثم تابع عملية التلوين، أو جففها بالهواء واحفظها عند -80 درجة مئوية لاستخدامها لاحقًا. 8. حضّن الشرائح مع 20 ميكرولتر من 1% من مصل الماعز ومحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع 0.1% (وزن/حجم) من الصابونين لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٠. قم بتثبيط نشاط البيروكسيداز الداخلي باستخدام محلول تثبيط البيروكسيداز الداخلي (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ١١. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٢. حضّن كل بئر مع الأفيدين (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٥ دقيقة. ١٣. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٤. حضّن كل بئر مع البيوتين (٢٠ ميكرولتر/بئر) لمدة ١٥ دقيقة. ١٥. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٦. حضّن كل بئر لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع ٢٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة النقية الخاصة بالسيتوكين أو نظير الغلوبولين المناعي المناسب كعنصر تحكم، مخففًا في محلول تخفيف التلوين المناعي النسيجي من فارمينجن والمُضاف إليه الصابونين. ١٧. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ١٨. حضّن كل بئر بـ ٢٠ ميكرولتر من جسم مضاد ثانوي مُؤشَّر بالبيوتين مُخفَّف في محلول تخفيف السيتوكينات IHC لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ١٩. اغسل مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ٢٠. ضع ٢٠ ميكرولتر من ستربتأفيدين-HRP (رقم المنتج ٥٥٠٩٤٦ من BD) في كل بئر على الشرائح وحضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٢١. اغسل الشرائح مرتين بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) مع حضانة لمدة ٥ دقائق. ٢٢. حضّن مع ركيزة DAB وفقًا للتعليمات (رقم المنتج ٥٥٠٨٨٠ من BD) لمدة أقل من ٥ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ٢٣. أوقف تفاعل اللون بالغسل بمحلول الفوسفات الملحي (PBS). ٢٤. تُثبَّت الشرائح بعد ذلك في وسط التثبيت للتخزين قصير الأجل. أجهزة الطرد المركزي (CYTOSPINS): 1. قم بتجميع حجرة العينة (مثل Cytospin 3، Shandon، المملكة المتحدة، أو جهاز طرد مركزي مماثل)، وبطاقة الترشيح، والشرائح، وحامل جهاز الطرد المركزي وفقًا لمواصفات الشركة المصنعة. 2. ضع 40 ميكرولتر من حوالي 1 × 10⁶ خلية في كل حجرة عينة. 3. قم بتدوير الشرائح بسرعة 600 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين. 4. أخرج الشرائح من حامل جهاز الطرد المركزي وضعها على حامل التلوين. 5. للتثبيت والتلوين، يرجى اتباع الخطوات من 4 إلى 24 المذكورة أعلاه لتلوين الخلايا على شرائح الالتصاق.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. أزيد الصوديوم مثبط عكسي لعملية الأيض التأكسدي؛ لذلك، يجب عدم استخدام مستحضرات الأجسام المضادة التي تحتوي على هذه المادة الحافظة في مزارع الخلايا أو حقنها في الحيوانات. يمكن إزالة أزيد الصوديوم عن طريق غسل الخلايا المصبوغة أو الجسم المضاد المرتبط بالصفيحة أو عن طريق غسيل الجسم المضاد القابل للذوبان في محلول منظم خالٍ من أزيد الصوديوم. نظرًا لأن السموم الداخلية قد تؤثر أيضًا على نتائج الدراسات الوظيفية، فإننا نوصي باستخدام صيغة الجسم المضاد NA/LE (خالية من الأزيد/منخفضة السموم الداخلية)، إن وجدت، للاستخدام في المختبر وفي الجسم الحي. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.