BD، 550319، مجموعة BD OptEIA™ Rat IL-6 ELISA

التفاعل: الفئران (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2868879
الوصف: المواد المتوفرة: تحتوي مجموعة OptEIA™ لإنترلوكين-6 (IL-6) في الفئران على المكونات اللازمة لتطوير فحوصات الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لإنترلوكين-6 الطبيعي أو المُعاد تركيبه في مصل الدم والبلازما وسوائل مزارع الخلايا. تُوفّر مواد كافية لتحضير ما يقارب 20 صفيحة من 96 بئرًا، شريطة اتباع تعليمات التخزين والمواد وتحضير المحلول المنظم وإجراء الفحص الموصى بها والمحددة في هذه العبوة. تحسين الفحص: تتيح مجموعات BD OptEIA™ تصميمًا مرنًا للفحص بما يتناسب مع احتياجات كل مختبر. لتصميم فحص مناعي بحساسية ونطاق ديناميكي مختلفين، يمكن تغيير المعايير التالية: الالتقاط، معايرة الأجسام المضادة للكشف، وقت الحضانة، درجة حرارة الحضانة، تركيبة مخفف الفحص، درجة حموضة المحلول المنظم، القوة الأيونية، تركيز البروتين، نوع الركيزة، تقنية الغسل (أي عدد مرات الغسل وأوقات النقع). المعايرة: تتم معايرة هذا الفحص المناعي مقابل IL-6 المؤتلف النقي للفئران.
التحضير والتخزين: تُحفظ الكواشف غير المفتوحة في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية. لا تستخدم الكواشف بعد تاريخ انتهاء الصلاحية، أو إذا ظهرت عليها عكارة. قبل الاستخدام، اترك جميع الكواشف لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (18-25 درجة مئوية). بعد الاستخدام مباشرة، أعدها إلى ظروف التخزين المناسبة. تبقى المعايير المجففة بالتجميد مستقرة حتى تاريخ انتهاء الصلاحية. بعد إعادة تكوين المحلول، قسّم المحلول القياسي مباشرةً إلى حصص في قوارير من البولي بروبيلين بمقدار 50 ميكرولتر لكل قارورة، ثم جمّدها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر. إذا لزم الأمر، خزّن المحلول في درجة حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية لمدة تصل إلى 8 ساعات قبل تقسيمه إلى حصص وتجميده. لا تترك المحلول القياسي المُعاد تكوينه في درجة حرارة الغرفة.
إجراءات الفحص الموصى بها: المحاليل المنظمة الموصى بها. ملاحظة: لا تستخدم أزيد الصوديوم في هذه التحضيرات. يُعطّل أزيد الصوديوم إنزيم بيروكسيداز الفجل. يُوصى باستخدام مجموعة كواشف BD OptEIA B (رقم المنتج 550534) التي تحتوي على محلول التغطية، ومخفف الفحص، وكواشف الركيزة A وB، ومحلول الإيقاف، ومحلول غسيل مركز 20X. 1. محلول التغطية - كربونات الصوديوم 0.1 مولار، درجة الحموضة 9.5؛ 7.13 غرام من بيكربونات الصوديوم، 1.59 غرام من كربونات الصوديوم؛ يُكمل الحجم إلى 1.0 لتر؛ تُضبط درجة الحموضة إلى 9.5 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم 10 مولار. يُحضر طازجًا أو يُستخدم في غضون 7 أيام من التحضير، ويُخزن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. 2. مخفف الفحص - محلول فوسفات ملحي* مع 10% مصل بقري جنيني#، درجة الحموضة 7.0. BD Pharmingen. يُوصى باستخدام مُخفِّف المعايرة (رقم المنتج 555213). *محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات: 80.0 غ كلوريد الصوديوم، 11.6 غ فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم، 2.0 غ فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيوم، 2.0 غ كلوريد البوتاسيوم، كمية كافية حتى 10 لترات؛ درجة الحموضة حتى 7.0. #مصل جنيني بقري: يُوصى باستخدام Hyclone رقم المنتج SH30088 (مُنشَّط حراريًا). يُحضَّر طازجًا أو يُستخدم في غضون 3 أيام من التحضير، ويُخزَّن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. 3. محلول الغسل - محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات* مع 0.05% توين-20. يُحضَّر طازجًا أو يُستخدم في غضون 3 أيام من التحضير، ويُخزَّن في درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. 4. محلول الركيزة - رباعي ميثيل بنزيدين (TMB) وبيروكسيد الهيدروجين. يُوصى باستخدام مجموعة كواشف ركيزة TMB من BD Pharmingen (رقم المنتج 555214). 5. محلول الإيقاف - 1 مولار H3PO4 أو 2 مولار H2SO4. المواد الإضافية المطلوبة: 1. صفائح BD Falcon ELISA ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353279). 2. قارئ صفائح دقيقة قادر على قياس الامتصاص عند 450 نانومتر. 3. ماصات دقيقة. 4. أسطوانة مدرجة سعة لتر واحد. 5. ماء منزوع الأيونات أو مقطر. 6. زجاجة غسيل أو غسالة آلية. 7. ورق رسم بياني لوغاريتمي أو معالجة بيانات آلية. 8. أنابيب لتحضير التخفيفات القياسية. 9. مؤقت مختبري. 10. أغطية صفائح أو غشاء بارافين. جمع العينات ومعالجتها: يجب أن تكون العينات صافية، غير متحللة الدم، وغير دهنية. سوائل مزارع الخلايا: أزل أي مواد جسيمية بالطرد المركزي، وقم بالتحليل فورًا أو خزّن العينات عند درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. المصل: استخدم أنبوب فصل المصل واترك العينات تتخثر لمدة 30 دقيقة، ثم قم بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1000 × g. أزل المصل وقم بتحليله فورًا أو خزّن العينات عند درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. البلازما: اجمع البلازما باستخدام السترات أو EDTA أو الهيبارين كمضاد للتخثر. قم بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1000 × g في غضون 30 دقيقة من الجمع. قم بالتحليل فورًا أو خزّن العينات عند درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. تجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة. تحضير المعايير والتعامل معها 1. إعادة التكوين: بعد تدفئة المعيار المجفف بالتجميد إلى درجة حرارة الغرفة، افتح القارورة بحذر لتجنب فقدان المادة. أعد تكوين المعيار المجفف بالتجميد مع 1.0 مل من الماء منزوع الأيونات للحصول على معيار أساسي. اترك المعيار ليتوازن لمدة 15 دقيقة على الأقل قبل إجراء التخفيفات. رجّ برفق للمزج. ٢. تخزين/معالجة المحلول القياسي المُعاد تكوينه: بعد إعادة التكوين، قسّم المحلول القياسي المركز فورًا إلى حصص في قوارير بولي بروبيلين بمقدار ٥٠ ميكرولتر لكل قارورة، ثم جمّدها عند درجة حرارة -٨٠ درجة مئوية لمدة تصل إلى ٦ أشهر. إذا لزم الأمر، خزّنها عند درجة حرارة ٢-٨ درجة مئوية لمدة تصل إلى ٨ ساعات قبل تقسيمها إلى حصص/تجميدها. لا تترك المحلول القياسي المُعاد تكوينه في درجة حرارة الغرفة. ٣. تحضير المحاليل القياسية للتحليل: أ. حضّر محلولًا قياسيًا بتركيز ٥٠٠٠ بيكوغرام/مل من المحلول القياسي المركز. رجّ جيدًا للمزج. (انظر تعليمات التخفيف في شهادة التعليمات/التحليل). ب. أضف ٣٠٠ ميكرولتر من مخفف التحليل إلى ٦ أنابيب. ضع عليها ملصقات توضح التركيزات: ٢٥٠٠ بيكوغرام/مل، ١٢٥٠ بيكوغرام/مل، ٦٢٥ بيكوغرام/مل، ٣١٣ بيكوغرام/مل، ١٥٦ بيكوغرام/مل، و٧٨ بيكوغرام/مل. ج. قم بإجراء تخفيفات متسلسلة بإضافة 300 ميكرولتر من كل معيار إلى الأنبوب التالي مع الخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي بين كل عملية نقل. يُستخدم مخفف المعايرة كمعيار صفري (0 بيكوغرام/مل). تفاصيل إجراء المعايرة: 1. غطِّ الآبار الدقيقة بـ 100 ميكرولتر لكل بئر من الأجسام المضادة المُلتقطة المخففة في محلول التغطية. للاطلاع على التخفيف الموصى به لتغطية الأجسام المضادة، راجع التعليمات/شهادة التحليل الخاصة بالدفعة. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 2. اسحب المحلول من الآبار واغسلها 5 مرات باستخدام 300 ميكرولتر/بئر على الأقل من محلول الغسل. بعد الغسلة الأخيرة، اقلب الصفيحة وجففها بورق ماص لإزالة أي محلول متبقٍ. 3. احجب الصفائح باستخدام 200 ميكرولتر/بئر على الأقل من مخفف المعايرة. حضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. 4. اسحب المحلول واغسلها كما في الخطوة 2. 5. حضّر تخفيفات المعيار والعينة في مخفف المعايرة. انظر "تحضير المعايير والتعامل معها". 6. اسحب 100 ميكرولتر من كل معيار وعينة وعينة تحكم باستخدام ماصة وضعها في الآبار المناسبة. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. 7. اسحب المحلول واغسل كما في الخطوة 2، ولكن مع 5 غسلات إجمالاً. 8. أضف 100 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة للكشف المخفف إلى كل بئر. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. 9. اسحب المحلول واغسل كما في الخطوة 2، ولكن مع 5 غسلات إجمالاً. 10. أضف 100 ميكرولتر من محلول كاشف الإنزيم المخفف (SAv-HRP) إلى كل بئر. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 11. اسحب المحلول واغسل كما في الخطوة 2، ولكن مع 7 غسلات إجمالاً. ملاحظة: في خطوة الغسل الأخيرة هذه، انقع الآبار في محلول الغسل لمدة تتراوح بين 30 ثانية ودقيقة واحدة لكل غسلة. ١٢. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول ركيزة TMB إلى كل بئر. حضّن الصفيحة (بدون غطاء) لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ١٣. أضف ٥٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر. ١٤. اقرأ الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر خلال ٣٠ دقيقة من إيقاف التفاعل. إذا كان تصحيح الطول الموجي متاحًا، اطرح الامتصاص عند ٥٧٠ نانومتر من الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر. ملخص إجراء الفحص: ١. أضف ١٠٠ ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف إلى كل بئر. حضّن طوال الليل عند ٤ درجات مئوية. ٢. اسحب المحلول واغسل ٥ مرات. ٣. صفائح الحجب: أضف ٢٠٠ ميكرولتر من مخفف الفحص إلى كل بئر. حضّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٤. اسحب المحلول واغسل ٥ مرات. ٥. أضف ١٠٠ ميكرولتر من المعيار أو العينة إلى كل بئر. حضّن لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. ٦. اسحب المحلول واغسل ٥ مرات. ٧. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول الكشف المخفف إلى كل بئر. حضّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٨. اسحب المحلول واغسل ٥ مرات. ٩. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول SAv-HRP المخفف إلى كل بئر. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ١٠. اسحب المحلول واغسل ٧ مرات (مع نقع لمدة ٣٠ ثانية إلى دقيقة واحدة). ١١. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول ركيزة TMB إلى كل بئر. حضّن لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. ١٢. أضف ٥٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر. اقرأ عند ٤٥٠ نانومتر خلال ٣٠ دقيقة مع تصحيح الطول الموجي عند ٥٧٠ نانومتر. حساب النتائج: احسب متوسط ​​الامتصاص لكل مجموعة من المعايير المكررة، وعينات التحكم، والعينات. اطرح متوسط ​​امتصاص المعيار الصفري من كل منها. ارسم منحنى المعايرة على ورق رسم بياني لوغاريتمي، مع وضع تركيز IL-6 على المحور السيني والامتصاصية على المحور الصادي. ارسم منحنى المطابقة الأمثل الذي يمر بنقاط المعايرة. لتحديد تركيز IL-6 في العينات المجهولة، أوجد متوسط ​​قيمة الامتصاصية للعينة المجهولة على المحور الصادي، وارسم خطًا أفقيًا يصل إلى منحنى المعايرة. عند نقطة التقاطع، ارسم خطًا رأسيًا يصل إلى المحور السيني، واقرأ تركيز IL-6. إذا كانت العينات مخففة، اضرب تركيز IL-6 في معامل التخفيف. يمكن أيضًا استخدام تحليل الانحدار اللوغاريتمي لتقليل البيانات باستخدام الحاسوب. الخصوصية والتفاعل المتبادل: تم اختبار العوامل التالية في اختبار BD OptEIA عند تركيز ≥ 10 نانوغرام/مل، ولم يتم تحديد أي تفاعل متبادل (قيمة ≥ 4 بيكوغرام/مل). بشري مُعاد التركيب: إنترلوكين-6، فأر مُعاد التركيب: إنترلوكين-6، جرذ مُعاد التركيب: إنترلوكين-2، إنترلوكين-4، إنترلوكين-10، عامل تحفيز مستعمرات المحببات والبلعميات، إنترفيرون غاما، عامل نخر الورم. محددات الإجراء: • يجب تخفيف العينات التي تُظهر قيم امتصاص أعلى من منحنى المعايرة باستخدام مُخفف المعايرة القياسي وإعادة تحليلها. • لم يتم التحقق بشكل كامل من تداخل نواتج أيض الدواء، أو المستقبلات الذائبة، أو بروتينات الربط الأخرى في العينات. لا يمكن استبعاد احتمال حدوث تداخل. • مجموعات BD OptEIA™ مُصممة للاستخدام كوحدة متكاملة. لا تخلط الكواشف من دفعات مجموعات مختلفة. لا يُنصح باستخدام كواشف من مُصنّعين آخرين في هذه المجموعة.
إشعارات المنتج: للحصول على تدريب عبر الإنترنت حول تقنيات ELISA لمجموعة BD OptEIA™، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/OptEIA/downloads.shtml. يجب تخفيف العينات التي تُظهر قيم امتصاص أعلى من منحنى المعايرة باستخدام مُخفف المعايرة القياسي وإعادة تحليلها. لم يتم التحقق بشكل كامل من تداخل مستقلبات الأدوية أو المستقبلات الذائبة أو بروتينات الربط الأخرى في العينات. لا يمكن استبعاد احتمال حدوث تداخل. صُممت مجموعات BD OptEIA™ للاستخدام كوحدة متكاملة. لا تخلط الكواشف من دفعات مختلفة من المجموعة. لا يُنصح باستخدام كواشف من شركات مصنعة أخرى في هذه المجموعة. قد تكون الكواشف التي تحتوي على مواد حافظة سامة في حالة الابتلاع أو الاستنشاق أو ملامسة الجلد. تعامل مع جميع عينات المصل والبلازما وفقًا لإرشادات NCCLS لمنع انتقال العدوى المنقولة بالدم. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. ProClin هي علامة تجارية لشركة Rohm and Haas.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : لا شيء : غير متوفر : غير متوفر