BD، 550524، BD Pharmingen™ Retrievagen A (pH 6.0)

الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2868889
الوصف: يُعدّ BD Retrievagen A (الأس الهيدروجيني 6.0) نظامًا لاستعادة المستضدات، يُوصى باستخدامه مع مقاطع الأنسجة المثبتة بالزنك أو الفورمالين والمضمنة في البارافين، والتي تُظهر تفاعلًا دون المستوى الأمثل أو معدومًا مع الأجسام المضادة للتلوين المناعي النسيجي. يعمل الفورمالين المتعادل المخفف بنسبة 10% على تثبيت الأنسجة عن طريق ربط البروتينات بروابط متقاطعة، مما قد يُسبب تغييرًا في بنيتها أو "حجبًا" للبروتين المُستضدي، ما يؤدي إلى انخفاض أو غياب تفاعل الأجسام المضادة. صُمم BD Retrievagen A (الأس الهيدروجيني 6.0) لكشف البروتين المُستضدي وتعزيز تلوين الأجسام المضادة. تعتمد آلية عمل معظم أنظمة استعادة المستضدات على كسر الروابط المتقاطعة المتكونة بين جزيئات البروتين. من المهم إدراك أنه على الرغم من استعادة المستضدات، فإن بعض الأجسام المضادة لا تُلوّن مقاطع الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة في البارافين. في هذه الحالات، قد يكون تثبيت النسيج بمثبت أقل قسوة، مثل مثبت الزنك المستخدم في التلوين المناعي النسيجي (IHC) الذي طورته شركة BD Pharmingen (رقم المنتج 550523)، مفيدًا. في كثير من الحالات، يحافظ مثبت الزنك على المستضد، مما يؤدي إلى تلوين جيد للأجسام المضادة مع إظهار مورفولوجيا نسيجية جيدة في الوقت نفسه. مع ذلك، هناك بعض المستضدات التي لا تُحفظ بأي تثبيت لطيف، وفي هذه الحالات، يُعد استخدام نسيج طازج مجمد للتلوين المناعي النسيجي البديل الوحيد.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُقدَّم محلول BD Pharmingen Retrievagen A (الأس الهيدروجيني 6.0) على شكل محلولين منفصلين يجب مزجهما. خذ 18 مل من محلول BD Retrievagen A 1 و82 مل من محلول BD Retrievagen 2، وأكمل الحجم إلى لتر واحد باستخدام الماء المقطر. يجب أن يكون الأس الهيدروجيني للمحلول النهائي حوالي 6.0. يمكن تخزين هذا المحلول في درجة حرارة 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى شهر. يُجرى بروتوكول استرجاع المستضد بعد إزالة البارافين من الشرائح كما هو موضح أدناه: 1. أزل البارافين من الشرائح (بعد تجفيفها جيدًا طوال الليل في درجة حرارة الغرفة) باستخدام الزيلين مرتين لمدة 10 دقائق لكل مرة. 2. اغسل الشرائح بالكحول النقي مرتين لمدة دقيقتين لكل مرة. 3. امنع نشاط البيروكسيداز الداخلي عن طريق حضن الشرائح لمدة 10 دقائق في محلول بيروكسيد الهيدروجين بتركيز 3%. اشطف الشرائح بالماء مرتين أو ثلاث مرات. ٤. ضع الشرائح في وعاء كوبلين بلاستيكي أو طبق تلوين مع محلول BD Retrievagen A، وسخّنها في الميكروويف إلى ١٩٣ درجة فهرنهايت. ٥. اخلط المحلول، ثم حضّن الشرائح عند درجة الحرارة المطلوبة ١٩٣ درجة فهرنهايت لمدة ١٠ دقائق. ٦. أخرج طبق التلوين، وغطّه، واترك الشرائح تبرد ببطء إلى درجة حرارة الغرفة لمدة ٢٠ دقيقة. ٧. اغسل الشرائح مرتين أو ثلاث مرات بالماء، ثم تابع عملية الحجب باستخدام المصل الطبيعي، ثم ضع الجسم المضاد الأولي.
ملاحظات حول المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر