BD، 550756، مجموعة BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human Terminal Transferase

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2094455
الوصف: يتفاعل هذا البروتين مع إنزيم ناقل النيوكليوتيدات الطرفي (TdT)، وهو بوليميراز DNA مستقل عن القالب، يُضيف النيوكليوتيدات إلى بادئات DNA أحادية السلسلة. يُظهر تحليل لطخة ويسترن لإنزيم TdT حزمًا بوزن جزيئي 55 و40 و15 كيلو دالتون. يوجد إنزيم TdT في الخلايا السلفية اللمفاوية الطبيعية في نخاع العظم والخلايا اللمفاوية غير الناضجة في الغدة الزعترية. وقد أشارت الدراسات إلى أن إنزيم TdT يُشارك في تنظيم و/أو نقل DNA وإعادة ترتيب الجينات أثناء التطور الطبيعي للخلايا التائية والبائية.
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: بروتوكول التلوين: 1. تُجمع الخلايا المستهدفة المزروعة في أنبوب طرد مركزي مخروطي سعة 50 مل. يُطرد مركزيًا بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم يُشفط السائل الطافي ويُتخلص منه. 2. تُغسل الخلايا المترسبة مرة واحدة بمحلول الفوسفات الملحي (PBS) وتُخلط برفق. يُطرد مركزيًا بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم يُشفط السائل الطافي ويُتخلص منه. 3. تُثبت الخلايا بإضافة 15-20 مل من الفورمالديهايد بتركيز 1% مع التقليب باستخدام جهاز التقليب الدوامي، ثم تُحضن لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. يُطرد مركزيًا بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم يُشفط السائل الطافي ويُتخلص منه. 4. يُضاف 15-20 مل من محلول تريتون X-100 بتركيز 0.1% في محلول الفوسفات الملحي (PBS) وتُحضن لمدة 5-10 دقائق. يُطرد مركزيًا بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم يُشفط السائل الطافي ويُتخلص منه. 5. أعد تعليق الخلايا في محلول الغسل (PBS + 1% FBS) ليصل التركيز النهائي إلى حوالي 1 × 10^6 خلية لكل 50 ميكرولتر. 6. حضّر أنبوبًا واحدًا يحتوي على 50 ميكرولتر من معلق الخلايا، وأضف إليه 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة المُقترنة لإنزيم TdT البشري. حضّر أنبوبًا آخر يحتوي على 50 ميكرولتر من معلق الخلايا، وأضف إليه 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة المُقترنة للتحكم النظيري. رجّ الأنبوبين برفق، ثم حضّنهما في الظلام عند درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة. 7. اغسل الأنابيب بـ 2 مل من محلول الغسل. قم بالطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 1000 دورة في الدقيقة، ثم اسحب السائل الطافي وتخلص منه. 8. أعد تعليق الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول الغسل، ثم حللها باستخدام قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: تم تحسين هذا الجسم المضاد ومعايرته مسبقًا باستخدام عنصر تحكم من نفس النمط النظيري لاستخدامه بالحجم الموصى به وهو 20 ميكرولتر/اختبار. لا يُنصح بمعايرة الكواشف أو استبدالها بعنصر تحكم آخر من نفس النمط النظيري (غير متطابق). يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر