دينار بحريني، 550891، دينار بحريني Pharmingen™ بروموديوكسيوريدين (BrdU)

التحضير والتخزين: يُحفظ المنتج في درجة حرارة -80 درجة مئوية قبل الاستخدام أو للتخزين طويل الأمد للمحاليل المركزة. لا يحتوي هذا المستحضر على مواد حافظة، لذا يجب التعامل معه في ظروف معقمة. تجنب تجميد المنتج وإذابته عدة مرات. يُرفق مع المنتج خمس قوارير. تحتوي كل قارورة على 0.5 مل من محلول BrdU بتركيز 10 ملغم/مل مخفف في محلول DPBS بتركيز 1X. يكون محلول BrdU مستقرًا لمدة 4 أشهر بعد إذابته عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات الفحص الموصى بها: قبل إجراء التلوين المناعي باستخدام BrdU للكشف عن الخلايا المتكاثرة، من الضروري وسم الخلايا أو الأنسجة بـ BrdU. يمكن إجراء الوسم إما في المختبر لزراعة الخلايا أو في الجسم الحي للحيوانات التجريبية. كلا البروتوكولين متوفران. وسم الخلايا المزروعة وخطوط الخلايا في المختبر باستخدام BrdU: تم الإبلاغ عن العديد من البروتوكولات المختلفة لوسم الخلايا بـ BrdU في المختبر. وجدنا أن حضانة الخلايا مع BrdU بتركيز نهائي قدره 10 ميكرومتر في وسط زراعة الخلايا فعالة في وسم مجموعة واسعة من خطوط الخلايا البشرية والفأرية ومجموعات الخلايا الطبيعية. لوسم الخلايا في المختبر، أضف بعناية 10 ميكرولتر من محلول عمل BrdU بتركيز 1 ملي مولار (خفف محلول BrdU المركز بنسبة 1:30 في وسط زراعة الأنسجة) مباشرة إلى كل مل من وسط زراعة الأنسجة. في هذه الخطوة، من المهم تجنب إزعاج الخلايا بأي شكل من الأشكال (مثل خطوات الطرد المركزي أو تغييرات درجة الحرارة) التي قد تعطل أنماط دورة الخلية الطبيعية. يجب ألا تتجاوز كثافة زراعة الخلايا 2 × 10⁶ خلية/مل. تُحضن الخلايا المعالجة بعد ذلك للمدة الزمنية المطلوبة. تعتمد مدة التحضين مع BrdU على معدل دخول الخلايا في دورة الخلية وتقدمها. على سبيل المثال، تتراوح المدة الفعالة لتعريض سلالة خلوية نشطة التكاثر (مثل خلايا CTLL-2) بين 30 و45 دقيقة (أي عندما تكون الخلايا في المرحلة اللوغاريتمية من التكاثر). ينبغي على الباحثين تحديد أوقات التحضين المثلى لكل سلالة خلوية أو مجموعة خلوية مختلفة ضمن نظام تجريبي معين. تُعد الخلايا من نفس المجموعة غير الموسومة بـ BrdU بمثابة عينة تحكم سلبية. وسم خلايا الفئران بـ BrdU في الجسم الحي: هناك طريقتان شائعتان لوسم الأنسجة والخلايا بـ BrdU في الجسم الحي، وهما: الحقن داخل الصفاق بمحلول يحتوي على BrdU في الفئران، وإطعام الفئران بـ BrdU المضاف إلى مياه الشرب. أ) طريقة الحقن داخل الصفاق: يُستخدم محلول BrdU بتركيز 10 ملغم/مل في محلول DPBS معقم بتركيز 1X في التجارب الحيوية. تُحقن الفئران داخل الصفاق بـ 100-200 ميكرولتر (1-2 ملغم) من محلول BrdU. يمكن الكشف عن اندماج BrdU في الغدة الزعترية ونخاع العظم في غضون ساعة واحدة فقط بعد الحقن. وبعد 24 ساعة من الحقن، يمكن الكشف عن BrdU في معظم الأنسجة. ب) طريقة ماء الشرب: يُخفف BrdU إلى تركيز 0.8 ملغم/مل في ماء الشرب. يجب تحضير محلول BrdU طازجًا وتغييره يوميًا. قد يؤدي التغذية المطولة بـ BrdU إلى آثار سامة. وقد أبلغ بعض الباحثين عن آثار مميتة مرتبطة بتغذية الفئران بـ BrdU بشكل مستمر لمدة 14 يومًا. وفي دراسات طويلة الأمد، أفاد بعض الباحثين أن تغذية الفئران بـ BrdU لمدة 9 أيام متتالية، ثم التحول إلى الماء العادي، كان فعالًا. تم رصد دمج BrdU بواسطة خلايا هذه الحيوانات بعد مرور 70 يومًا.
إشعارات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. يُرجى مراجعة http://regdocs.bd.com للوصول إلى صحائف بيانات السلامة (SDS).