BD، 550914، مجموعة BD Pharmingen™ PE النشطة لتحفيز موت الخلايا المبرمج باستخدام كاسبيز-3

التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، فأر (تم اختباره أثناء التطوير)
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_393957
الوصف: تلعب عائلة الكاسبيز من البروتيازات السيستينية دورًا محوريًا في موت الخلايا المبرمج والالتهاب. يُعد الكاسبيز-3 بروتيازًا رئيسيًا يُنشط خلال المراحل المبكرة من موت الخلايا المبرمج، ومثل باقي أفراد عائلة الكاسبيز، يُصنّع كإنزيم أولي غير نشط، يُعالَج في الخلايا التي تخضع لموت الخلايا المبرمج عن طريق التحلل الذاتي و/أو الانقسام بواسطة بروتياز آخر. تتكون الأشكال المُعالَجة من الكاسبيز من وحدات فرعية كبيرة (17-22 كيلو دالتون) وصغيرة (10-12 كيلو دالتون) تتحد لتكوين إنزيم نشط. يتكون الكاسبيز-3 النشط، وهو مؤشر على الخلايا التي تخضع لموت الخلايا المبرمج، من ثنائي غير متجانس من وحدات فرعية 17 و12 كيلو دالتون، مشتق من الإنزيم الأولي 32 كيلو دالتون. يقوم الكاسبيز-3 النشط بتحليل وتنشيط الكاسبيزات الأخرى، بالإضافة إلى أهداف ذات صلة في السيتوبلازم، مثل D4-GDI وBcl-2، وفي النواة (مثل PARP). وقد أُفيد أن هذا الجسم المضاد يتعرف تحديدًا على الشكل النشط من الكاسبيز-3 في الخلايا البشرية والفأرية. ولم يُذكر أنه يتعرف على الشكل الأولي للإنزيم من الكاسبيز-3.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: تحفيز موت الخلايا المبرمج بواسطة كامبتوثيسين. المواد: 1. تحضير محلول أساسي بتركيز 1.0 ملي مولار من كامبتوثيسين (سيجما-ألدريتش، رقم المنتج C-9911) في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO). كامبتوثيسين، وهو مستخلص من شجرة كامبتوثيكا أكيوميناتا الصينية، مثبط قوي لإنزيم توبويزوميراز 1، وهو جزيء ضروري لتخليق الحمض النووي. وقد أشارت الدراسات إلى أن كامبتوثيسين يحفز موت الخلايا المبرمج بطريقة تعتمد على الجرعة في المختبر. 2. خلايا جركات (سرطان الدم الليمفاوي التائي البشري؛ ATCC TIB-152). الإجراء: 1. إضافة كامبتوثيسين (بتركيز نهائي 4-6 ميكرومولار) إلى 1 × 10^6 خلية/مل من خلايا جركات المتكاثرة. 2. حضانة الخلايا لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية. إجراء بروتوكول تلوين الكاسبيز-3 النشط: 1. حدد الكمية الإجمالية للعينات التجريبية (الاختبارات) واحسب كمية محلول BD Perm/Wash™ (1X) والأجسام المضادة اللازمة بحيث يحتوي كل اختبار على 100 ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash™ (1X) و20 ميكرولتر من الأجسام المضادة (انظر الجدول). 2. خفف الكمية المطلوبة من محلول BD Perm/Wash™ (10X) بنسبة 1:10 في الماء المقطر قبل الاستخدام. ملاحظة: قد يُلاحظ وجود راسب أحيانًا مع محلول BD Perm/Wash™ (10X)، ولن يؤثر ذلك على فعالية المحلول. يمكن إزالة الراسب بترشيح المحلول 1X من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر. 3. اغسل الخلايا مرتين بمحلول فوسفات بارد (PBS) بتركيز 1X، ثم أعد تعليقها في محلول BD Cytofix/Cytoperm™ بتركيز 1x10^6 خلية/0.5 مل. 4. حضّن الخلايا لمدة 20 دقيقة على الجليد. 5. افصل الخلايا، ثم اسحب محلول BD Cytofix/Cytoperm™ وتخلص منه؛ واغسلها مرتين بمحلول BD Perm/Wash™ (بتركيز 1X) بحجم 0.5 مل من المحلول لكل 1x10^6 خلية في درجة حرارة الغرفة. 6. أعد تعليق الخلايا في محلول BD Perm/Wash™ (بتركيز 1X) المحسوب أعلاه بالإضافة إلى الجسم المضاد، وحضّنها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 7. اغسل كل عينة في 1.0 مل من محلول BD Perm/Wash™ (بتركيز 1X)، ثم أعد تعليقها في 0.5 مل من محلول BD Perm/Wash™ (بتركيز 1X) وحللها باستخدام قياس التدفق الخلوي. خطر: يحتوي محلول تثبيت ونفاذية Cytofix/Cytoperm (1X) (المكون 51-6896KC) على 4.2% من الفورمالديهايد. تحذيرات: ضار عند الاستنشاق. يسبب تهيج الجلد. يسبب تلفًا خطيرًا للعين. قد يسبب رد فعل تحسسي للجلد. يُشتبه في تسببه بعيوب وراثية. قد يسبب السرطان. طريقة التعرض: الاستنشاق. قد يسبب تهيجًا في الجهاز التنفسي. احتياطات السلامة: ارتدِ ملابس واقية/واقي للعينين. ارتدِ قفازات واقية. لا تستنشق الرذاذ/الأبخرة. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت ويسهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيبًا.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. للاطلاع على البروتوكولات الفنية، يرجى زيارة www.bdbiosciences.com/us/s/resources.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر