Product Description
الاسم البديل: B4؛ مستضد الخلايا الليمفاوية البائية CD19؛ Leu-12
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG1 الفأري، κ
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
رقم ورشة العمل: V CD19.11
RRID: AB_398515
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم خلايا الدم أحادية النواة الطرفية (PBMC) بجزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD19 البشري - DM وفقًا لبروتوكول الوسم المغناطيسي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسوم داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™ (رقم المنتج 552311). تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الجزء السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الجزء الموجب، يسمح صغر حجم الجزيئات المغناطيسية بإجراء مزيد من التقييم لهذا الجزء في تطبيقات لاحقة مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي: 1. تحضير الخلايا الليمفاوية أحادية النواة من الدم البشري المعالج بمضادات التخثر، ويفضل استخدام تقنية الطرد المركزي بتدرج الكثافة باستخدام محلول فيكول-باك™. إزالة تكتلات الخلايا و/أو الحطام عن طريق تمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. 2. تخفيف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام الماء المقطر المعقم، أو تحضير محلول BD IMag™ بتركيز 1X عن طريق إضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA) و2 ملي مول من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (EDTA) و0.09% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي منظم بالفوسفات. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. 3. غسل الخلايا بكمية كبيرة من محلول BD IMag™ بتركيز 1X، ثم شفط السائل الطافي بعناية. ٤. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD19 البشري - DM جيدًا، وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجزيئات لكل ١٠^٧ خلية. ٥. اخلط جيدًا. حضّن في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة. ٦. ارفع حجم جزيئات BD IMag™ المُوسومة إلى ١-٨ × ١٠^٧ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ المُخفف ١X، وضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا. حضّن لمدة ٨-١٠ دقائق. ٧. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. يحتوي هذا السائل الطافي على الجزء السالب. ٨. أخرج الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا، وأضف محلول BD IMag™ المُخفف ١X إلى نفس الحجم كما في الخطوة ٦. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق السحب والضخ بالماصة، وأعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا لمدة ٢-٤ دقائق أخرى. ٩. مع تثبيت الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص وتخلص منه. ١٠. كرر الخطوتين ٨ و٩. ١١. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم أو وسط مناسب، وتابع التطبيق (التطبيقات) اللاحقة المطلوبة. تم تحسين تركيز جزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD19 البشري - DM المُقترح في هذا البروتوكول لتنقية الخلايا الليمفاوية البائية الموجبة لـ CD19 من الدم المحيطي البشري. عند وسم مجموعات الخلايا المستهدفة الموجودة بترددات منخفضة، يمكن استخدام عدد أقل من جزيئات BD IMag™. وعلى العكس، عند وسم مجموعات الخلايا المستهدفة الموجودة بترددات أعلى، يجب استخدام عدد أكبر من الجزيئات. لتحديد التركيز الأمثل لجزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD19 البشري - DM لتطبيق معين، يُوصى بإجراء معايرة بزيادات مضاعفة. ملاحظة: تجنب الوسم غير المحدد من خلال العمل بسرعة وتقليل أوقات الحضانة إلى الحد الأدنى.
إشعارات المنتج: تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة بمجموعات الكربوكسيل، تُصنّعها شركة Skold Technology بموجب ترخيص براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. Ficoll-Paque علامة تجارية مسجلة لشركة Amersham Biosciences Limited. تحذير: ينتج عن أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924