BD، 552843، مجموعة جزيئات التعويض BD™ CompBeads المضادة للأجسام المضادة للفأر من نوع Ig، κ/التحكم السلبي

التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
معرف جين Entrez: 16071
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_10051478
الوصف: مجموعة BD™ CompBeads المضادة للغلوبولين المناعي للفأر، κ، عبارة عن جسيمات دقيقة من البوليسترين تُستخدم لتحسين إعدادات تعويض التألق في تحليلات قياس التدفق الخلوي متعددة الألوان. تحتوي المجموعة على نوعين من الجسيمات الدقيقة: جسيمات BD™ CompBeads المضادة للغلوبولين المناعي للفأر، κ، التي ترتبط بأي غلوبولين مناعي يحمل سلسلة خفيفة κ للفأر، وجسيمات BD™ CompBeads للتحكم السلبي، التي لا تمتلك قدرة على الارتباط. عند مزجها مع جسم مضاد للفأر مرتبط بصبغة فلورية، تُنتج BD™ CompBeads مجموعتين متميزتين من الأجسام المضادة المصبوغة، إحداهما موجبة والأخرى سالبة (ذات تألق خلفي)، ويمكن استخدامهما لضبط مستويات التعويض يدويًا أو باستخدام برنامج إعداد الجهاز. بما أن تعديلات التعويض تُجرى باستخدام نفس الجسم المضاد الموسوم بالفلوركروم المستخدم في التجربة، فإن هذه الطريقة تُمكّن الباحث من تحديد تصحيحات التعويض بدقة أكبر لتداخل الأطياف لأي توليفة من الأجسام المضادة الموسومة بالفلوركروم (دون الحاجة إلى استخدام عينات نسيجية ثمينة أو خرزات مصبوغة بأصباغ صلبة ذات أطياف فلورية قد لا تتطابق). يُوصى بشدة باستخدام خرزات BD™ CompBeads في جميع التجارب التي تستخدم مُقترنات الصبغة المزدوجة (مثل PE-Cy™7، APC-Cy™7، إلخ)، والتي قد يكون لكل مُقترن خصائص طيفية مميزة.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيداً عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات التحليل الموصى بها: ملاحظة: قد تُظهر الكواشف المقترنة بصبغة BD Horizon™ V500 وAmCyan اختلافاتٍ كبيرة في طيف الانبعاث على الخلايا المصبوغة وعند التقاطها على خرز BD™ CompBeads. لذا، قد لا توفر قيم التداخل لهذه الصبغات، عند تقييمها باستخدام خرز BD™ CompBeads، تعويضًا صحيحًا للخلايا. لذلك، يُوصى باستخدام عينات تحكم خلوية مصبوغة بشكل فردي لضبط التعويض لكواشف AmCyan وBD Horizon™ V500. تم تعديل BD Horizon™ V500-C لتقليل هذه الاختلافات الطيفية، ويمكن استخدام خرز BD™ CompBeads لتحديد قيم التداخل للأجسام المضادة RUO المقترنة بـ BD Horizon™ V500-C. دون التأثير على وظيفة التعويض، قد تُظهر بعض الدفعات مخططًا بيانيًا ثنائي النمط، وهو ما قد يكون ممكنًا بسبب تشتت الضوء المتأصل و/أو التجمع المتبقي لجزيئات التعويض. قد يكون تحسين جهد الجهاز أو ظروف البوابة مفيدًا لتحسين عرض المخطط البياني. تم اختبار مجموعة BD™ CompBeads هذه باستخدام أجسام مضادة من نوع Ig للفأر مرتبطة بصبغات فلورية مختلفة، وتم تحليلها باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي BD FACS لضمان خصوصية الجسيمات وتفاعليتها. يرجى الاطلاع على التعليمات التفصيلية أدناه لاستخدام مجموعة BD™ CompBeads: 1. رجّ مجموعة BD™ CompBeads جيدًا باستخدام جهاز الخلط الدوامي قبل الاستخدام. 2. ضع علامة على أنبوب عينة منفصل (12 × 75 مم) لكل جسم مضاد من نوع Ig للفأر مرتبط بصبغة فلورية، κ، سيتم استخدامه في التجربة. 3. أضف 100 ميكرولتر من محلول التلوين [مثل: BD Pharmingen Stain (FBS)، رقم المنتج 554656 أو BD Pharmingen Stain (BSA)، رقم المنتج 554657] إلى كل أنبوب. ٤. أضف قطرة كاملة (حوالي ٦٠ ميكرولتر) من محلول التحكم السلبي BD™ CompBeads وقطرة واحدة من خرز BD™ CompBeads المضاد للفأر Ig، κ إلى كل أنبوب، ثم قم بالخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي. ٥. أضف ٢٠ ميكرولتر من كل محلول مخفف مسبقًا من الأجسام المضادة (مخفف إلى التركيز الأمثل لتلوين ١٠^٦ خلية) المراد اختباره في التجربة المحددة إلى الأنبوب المُعَلَّم بشكل مناسب. (تأكد من ترسب الجسم المضاد في خليط الخرز، ثم قم بالخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي). ٦. حضّن لمدة ١٥-٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. احمِ الأنبوب من التعرض للضوء المباشر. ٧. أثناء حضانة الخرز والجسم المضاد، اضبط إعدادات جهد أنبوب التضخيم الضوئي (PMT) لجهاز قياس التدفق الخلوي باستخدام النسيج المستهدف للتجربة المحددة (مثل الدم الكامل، أو الخلايا الطحالية، إلخ). إذا كنت غير متأكد، فاستخدم خرز التحكم السلبي BD™ CompBeads كنقطة مرجعية سلبية، ثم تابع. ٨. بعد خطوة التحضين (انظر الخطوة ٦ أعلاه)، أضف ٢ مل من محلول التلوين إلى كل أنبوب، ثم قم بالترسيب بالطرد المركزي عند ٢٠٠ × جم لمدة ١٠ دقائق. ٩. تخلص من السائل الطافي من كل أنبوب عن طريق الشفط الدقيق باستخدام ماصة باستور ذات طرف دقيق. ١٠. أعد تعليق حبيبات الخرز في كل أنبوب بإضافة ٠.٥ مل من محلول التلوين. رجّ جيدًا. ١١. شغّل كل أنبوب على حدة على جهاز قياس التدفق الخلوي. حدد نطاق مجموعة الخرزات المفردة بناءً على خصائص تشتت الضوء الأمامي (FSC) وتشتت الضوء الجانبي (SSC). ١٢. اضبط معدل التدفق إلى ٢٠٠-٣٠٠ حدث في الثانية إن أمكن. ١٣. أنشئ مخططًا نقطيًا للأجسام المضادة المرتبطة بالفلوركروم حسب الحاجة [أي، لضبط التعويض لجسم مضاد مرتبط بالفلوريسين (FITC)، استخدم مخططًا نقطيًا FL1 مقابل FL2]. ١٤. ضع بوابة رباعية بحيث تكون مجموعة الخرز السالبة في الربع السفلي الأيسر، ومجموعة الخرز الموجبة في الربع العلوي أو السفلي الأيمن، واضبط قيم التعويض حتى تتساوى تقريبًا شدة التألق المتوسطة (MFI) لكل مجموعة (كما هو موضح في نافذة إحصائيات الربع) (أي، بالنسبة لـ FL2 -%FL1، يجب أن تتساوى تقريبًا شدة التألق المتوسطة FL2 لكلا مجموعتي الخرز عند التعويض الصحيح). ١٥. كرر الخطوتين ١٣ و١٤ للأنابيب الأخرى، حسب الحاجة. ١٦. تابع إجراء تجربة التلوين الفعلية.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. Cy هي علامة تجارية مسجلة لشركة Amersham Biosciences Limited. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 6.0 : غير متوفر : غير متوفر