BD، 553413، BD Pharmingen™ مضاد IgE نقي من الفئران

الاسم البديل: Igh-7؛ السلسلة الثقيلة للغلوبولين المناعي 7 (السلسلة الثقيلة من IgE)
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر LOU، المعروف أيضًا باسم Louvain، LOU/C، LOU/M IgG1، κ
المستضد: الغلوبولين المناعي E للفأر (مجمع)
التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_394846
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات التحليل الموصى بها: تحليل ELISA الساندويتش: يمكن استخدام جسم مضاد IgE الفأري النقي (النسيلة R35-72) بتركيز 2 ميكروغرام/مل تقريبًا كجسم مضاد لالتقاط الأجسام المضادة، مقترنًا بجسم مضاد IgE الفأري البيوتين (رقم المنتج 553419) كجسم مضاد للكشف. يُنصح الباحثون بشدة بمعايرة كل كاشف ضمن نطاق من التركيزات (مثل 1-8 ميكروغرام/مل) للحصول على أفضل النتائج. يمكن استخدام جسم مضاد IgE الفأري النقي من نوع كابا (رقم المنتج 557079 أو 553481 أو 557080) كمعيار لتحليل ELISA. بدلاً من ذلك، تتوفر مجموعة BD OptEIA™ Mouse IgE ELISA (رقم المنتج 555248) كمنتج ELISA ساندويتش سهل الاستخدام، ويمكن استخدامه لتحديد كمية IgE الفأري الذائب. بروتوكول ELISA لـ IgE الفأري: أولاً، التغطية بالأجسام المضادة المُثبِّتة: 1. خفف الأجسام المضادة المُثبِّتة المُنقَّاة من الفئران والمُضادة لـ IgE الفأري (النسيلة R35-72) (رقم المنتج 553413) إلى تركيز 2 ميكروغرام/مل تقريبًا في محلول التغطية. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر في صفيحة ELISA مُحسَّنة الارتباط بالبروتين. يُنصح الباحثون بتحديد التركيز الأمثل للأجسام المضادة لاستخدامهم. يُقترح إجراء معايرات بين 1 و8 ميكروغرام/مل. 2. رج الصفيحة جيدًا لضمان تغطية جميع الآبار بمحلول الأجسام المضادة المُثبِّتة. 3. غطِّ الصفيحة واحضنها لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 4. اغسل الصفيحة 3 مرات بمحلول PBS/Tween. في كل غسلة، املأ الآبار بـ 200 ميكرولتر من محلول PBS/Tween واتركها لمدة دقيقة واحدة على الأقل قبل شفط المحلول أو التخلص منه. كخطوة أخيرة، ربت على الصفيحة بمناشف ورقية لإزالة المحلول الزائد. ثانيًا: الحجب: 1. احجب الصفيحة بـ 200 ميكرولتر من محلول الحجب لكل بئر. 2. غطِّ الصفيحة واحضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 3. اغسل الصفيحة 3 مرات بمحلول PBS/Tween، كما هو موضح في القسم الأول، الخطوة 4. ثالثًا: تطبيق المعايير والعينات: 1. اترك العمود 1 من الصفيحة كآبار فارغة (أي، بدون إضافة أي مستضد، 100 ميكرولتر لكل بئر، ويتكون من محلول الحجب فقط). استخدم العمودين 2 و3 لتكرار المعيار، 100 ميكرولتر لكل بئر. خفف معيار IgE الفأري النقي (رقم المنتج 557079 أو 553481 أو 557080) في محلول الحجب. يجب أن تتراوح التخفيفات في سلسلة من 8 تخفيفات ثنائية، في محلول الحجب، بدءًا من 0.5 ميكروغرام/مل. استخدم الأعمدة المتبقية لإضافة العينات المطلوبة بتخفيفات مختلفة في محلول الحجب بمقدار 100 ميكرولتر لكل بئر. 2. غطِّ الصفيحة واحضنها لمدة ساعة على الأقل في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 3. اغسل الصفيحة 3 مرات بمحلول PBS/Tween، كما في القسم الأول، الخطوة 4. رابعًا: التحضين مع الأجسام المضادة للكشف: 1. خفف الأجسام المضادة IgE المضادة للفأر والمُعَلَّمة بالبيوتين (رقم المنتج 553419) إلى تركيز 2 ميكروغرام/مل تقريبًا في محلول الحجب. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر. يُنصح الباحثون بتحديد التركيز الأمثل للأجسام المضادة لاستخدامهم. يُقترح إجراء معايرات بين 1 و8 ميكروغرام/مل. 2. غطِّ الصفيحة واحضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة. 3. اغسل الصفيحة 6 مرات بمحلول PBS/Tween، كما في القسم الأول، الخطوة 4. خامساً: أضف أفيدين- أو ستربتأفيدين-بيروكسيداز الفجل (Av-HRP أو SAv-HRP): 1. خفف ستربتأفيدين HRP (رقم المنتج 554066) حسب التوصيات الخاصة بالمنتج (مثلاً 1:1000) في محلول الحجب. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر. 2. غطِ الصفيحة واحضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 3. اغسل الصفيحة 6 مرات بمحلول PBS/Tween، كما في القسم الأول، الخطوة 4. سادساً: أضف الركيزة وقم بالتطوير: 1. قم بإذابة محلول الركيزة (ABTS) خلال 20 دقيقة من الاستخدام. أضف 11 ميكرولتر من بيروكسيد الهيدروجين 30% (Sigma-Aldrich، رقم المنتج H1009) إلى 11 مل من محلول الركيزة وقم بالخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر فورًا، واتركه يتفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة. يمكن إيقاف التفاعل اللوني بإضافة 50 ميكرولتر من محلول SDS/DMF لكل بئر (اختياري). 2. اقرأ اللوحة عند 405 نانومتر.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. أزيد الصوديوم مثبط عكسي لعملية الأيض التأكسدي؛ لذلك، يجب عدم استخدام مستحضرات الأجسام المضادة التي تحتوي على هذه المادة الحافظة في مزارع الخلايا أو حقنها في الحيوانات. يمكن إزالة أزيد الصوديوم عن طريق غسل الخلايا المصبوغة أو الجسم المضاد المرتبط بالصفيحة أو عن طريق غسيل الجسم المضاد القابل للذوبان في محلول منظم خالٍ من أزيد الصوديوم. نظرًا لأن السموم الداخلية قد تؤثر أيضًا على نتائج الدراسات الوظيفية، فإننا نوصي باستخدام صيغة الجسم المضاد NA/LE (خالية من الأزيد/منخفضة السموم الداخلية)، إن وجدت، للاستخدام في المختبر وفي الجسم الحي. يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.