BD، 553419، BD Pharmingen™ بيوتين مضاد للفئران IgE

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر LOU، المعروف أيضًا باسم Louvain، LOU/C، LOU/M IgG1، κ
المستضد: IgE الفأري المجمع
التطبيق: الكشف باستخدام اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_394850
محلول التخزين: محلول منظم مائي يحتوي على مثبت بروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بالبيوتين في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة البيوتين غير المتفاعل. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: فحص ELISA: للكشف عن الغلوبولين المناعي E (IgE) في الفئران باستخدام فحص ELISA الساندويتش، يمكن استخدام هذا الجسم المضاد كجسم مضاد للكشف بتركيز 2 ميكروغرام/مل تقريبًا، مقترنًا بجسم مضاد مُنقّى من الفئران ضد الغلوبولين المناعي E (IgE) (النسيلة R35-72) (رقم المنتج 553413) كجسم مضاد للالتقاط. يمكن استخدام الغلوبولين المناعي E (IgE) المُنقّى من الفئران (رقم المنتج 557079 أو 553481 أو 557080) كمعيار لفحص ELISA. بدلاً من ذلك، تتوفر مجموعة BD OptEIA™ Mouse IgE ELISA (رقم المنتج 555248) كمنتج فحص ELISA ساندويتش سهل الاستخدام، ويمكن استخدامه لتحديد كمية الغلوبولين المناعي E (IgE) الذائب في الفئران. بروتوكول ELISA لـ IgE الفأري: أولاً، التغطية بالأجسام المضادة المُثبِّتة: 1. خفف الأجسام المضادة المُثبِّتة المُنقَّاة من الفئران والمُضادة لـ IgE الفأري (النسيلة R35-72) (رقم المنتج 553413) إلى تركيز 2 ميكروغرام/مل تقريبًا في محلول التغطية. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر في صفيحة ELISA مُحسَّنة الارتباط بالبروتين (مثل BD Falcon™، رقم المنتج 353279). يُنصح الباحثون بتحديد التركيز الأمثل للأجسام المضادة لاستخدامهم. يُقترح استخدام تراكيز تتراوح بين 1 و8 ميكروغرام/مل. 2. رج الصفيحة جيدًا للتأكد من تغطية جميع الآبار بمحلول الأجسام المضادة المُثبِّتة. 3. غطِّ الصفيحة واحضنها لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 4. اغسل الصفيحة ثلاث مرات بمحلول PBS/Tween. لكل غسلة، تُملأ الآبار بـ 200 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي/توين وتُترك لمدة دقيقة واحدة على الأقل قبل الشفط أو التخلص من المحلول. كخطوة أخيرة، تُربت الصفيحة على مناديل ورقية لإزالة المحلول الزائد. ثانيًا: الحجب: 1. تُحجب الصفيحة بـ 200 ميكرولتر من محلول الحجب لكل بئر. 2. تُغطى الصفيحة وتُحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 3. تُغسل الصفيحة 3 مرات بمحلول الفوسفات الملحي/توين، كما هو موضح في القسم الأول، الخطوة 4. ثالثًا: تطبيق المعايير والعينات: 1. يُترك العمود 1 من الصفيحة كآبار فارغة (أي، بدون إضافة أي مستضد، 100 ميكرولتر لكل بئر، ويتكون من محلول الحجب فقط). يُستخدم العمودان 2 و3 لتكرار المعيار بمقدار 100 ميكرولتر لكل بئر. خفف معيار IgE الفأري النقي (رقم المنتج 557079 أو 553481 أو 557080) في محلول الحجب. يجب أن تتراوح التخفيفات ضمن سلسلة من 8 تخفيفات ثنائية، في محلول الحجب، بدءًا من 0.5 ميكروغرام/مل. استخدم الأعمدة المتبقية لإضافة العينات المراد فحصها بتخفيفات مختلفة في محلول الحجب بمقدار 100 ميكرولتر لكل بئر. 2. غطِ الصفيحة واحضنها لمدة ساعة على الأقل في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 3. اغسل الصفيحة 3 مرات بمحلول PBS/Tween، كما في القسم الأول، الخطوة 4. رابعًا: التحضين مع الجسم المضاد للكشف: 1. خفف الجسم المضاد IgE الفأري المضاد للفئران والموسوم بالبيوتين (النسيلة R35-118) (رقم المنتج 553419) إلى حوالي 2 ميكروغرام/مل في محلول الحجب. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر. يُنصح الباحثون بتحديد تركيز الأجسام المضادة الأمثل لاستخدامهم. يُقترح إجراء معايرات بين 1 و8 ميكروغرام/مل. 2. غطِّ الصفيحة واحضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. 3. اغسل الصفيحة 6 مرات بمحلول PBS/Tween، كما في القسم الأول، الخطوة 4. خامساً: أضف أفيدين- أو ستربتأفيدين-بيروكسيداز الفجل (Av-HRP أو SAv-HRP): 1. خفف Av-HRP (رقم المنتج 554058) أو SAv-HRP (رقم المنتج 554066) حسب توصيات المنتج (مثلاً 1:1000) في محلول الحجب. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر. 2. غطِّ الصفيحة واحضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 3. اغسل الصفيحة 6 مرات بمحلول PBS/Tween، كما في القسم الأول، الخطوة 4. سادساً: أضف الركيزة وقم بالتطوير: 1. قم بإذابة محلول الركيزة (ABTS) خلال 20 دقيقة من الاستخدام. أضف 11 ميكرولتر من بيروكسيد الهيدروجين بتركيز 30% (Sigma-Aldrich، رقم المنتج H1009) إلى 11 مل من محلول الركيزة وقم بالخلط باستخدام جهاز الخلط الدوامي. أضف 100 ميكرولتر لكل بئر على الفور واتركه ليتطور في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة. يمكن إيقاف تفاعل اللون بإضافة 50 ميكرولتر لكل بئر من محلول SDS/DMF (اختياري). 2. اقرأ الصفيحة عند 405 نانومتر.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي.