BD، 553892، BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Rat IgG1

التفاعل: الفئران (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: فأر SJL IgG2a، κ
المستضد: IgG1 مجمع من الفئران
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)، التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_395120
محلول التخزين: محلول منظم مائي يحتوي على مثبت بروتين و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُعد الجسم المضاد RG11/39.4 فعالاً في الكشف عن الغلوبولين المناعي (Ig) على سطح الخلية أو داخلها باستخدام التلوين المناعي الفلوري مع تحليل التدفق الخلوي. يمكن استخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة RG11/39.4 المرتبط بـ FITC ككاشف أولي أو ثانوي في التلوين المناعي الفلوري. بروتوكول التلوين المناعي الفلوري للغلوبولين المناعي (Ig) داخل الخلايا: 1. تحضير معلق خلوي أحادي وتحديد عدد الخلايا. 2. تعليق الخلايا في محلول التلوين (PBS + 2% FBS + 0.1% أزيد الصوديوم) بتركيز 2 × 10^7 خلية/مل، ونقلها إلى صفائح ميكروية ذات قاع على شكل حرف U بمقدار 50 ميكرولتر/بئر للتلوين المناعي الفلوري. ملاحظة: يُعد محلول التلوين BD Pharmingen™ مع FBS (رقم المنتج 554656) فعالاً للاستخدام كمحلول تلوين في هذا البروتوكول. 3. قم بحجب مستقبلات Fcγ بإضافة 0.2 ميكروغرام من الجسم المضاد 2.4G2 النقي (Mouse BD Fc Block™ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2) (رقم المنتج 553141/553142) في 50 ميكرولتر من محلول التلوين إلى كل بئر. 4. حضّن لمدة 5 دقائق على الجليد. 5. أضف 200 ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر وأعد تعليق الخلايا. قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 5 دقائق واسحب السائل الطافي. 6. قم بحجب الغلوبولين المناعي السطحي باستخدام الجسم المضاد RG11/39.4 mAb النقي (رقم المنتج 553889) بإضافة 1.0 ميكروغرام لكل عينة في 50 ميكرولتر من محلول التلوين لكل بئر. ملاحظة: قد تتصبغ الواسمات السطحية خلال هذه الخطوة كما هو موضح في قسم "التلوين المناعي الفلوري لخلايا الدم البيضاء للفئران والجرذان لقياس التدفق الخلوي" في قسم البروتوكولات التقنية على موقعنا الإلكتروني على الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Mouse_and_Rat_Leukocytes.shtml. 7. حضّن لمدة 15 دقيقة على الجليد. 8. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة 5. 9. أعد تعليق الخلايا في 100 ميكرولتر من محلول التلوين داخل الخلايا BD Cytofix/Cytoperm™ (مجموعة BD Cytofix/Cytoperm™، رقم المنتج 554714) لكل بئر. 10. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 11. اغسل مرتين باستخدام 200 ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash™ المخفف (الموجود في مجموعة BD Cytofix/Cytoperm) لكل بئر. قم بالطرد المركزي عند 250 × g لمدة 5 دقائق، ثم تخلص من السائل الطافي بين كل غسلة وأخرى. 12. صبغ الغلوبولين المناعي داخل الخلايا بإضافة ≤ 1 ميكروغرام من الجسم المضاد أحادي النسيلة RG11/39.4 المرتبط بـ FITC في 50 ميكرولتر من محلول BD Perm/Wash المخفف لكل بئر. ملاحظة: يمكن إضافة أجسام مضادة أخرى موصى بها لصبغ المؤشرات داخل الخلايا خلال هذه الخطوة كما هو موضح في الخطوة 12. 13. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 14. اغسل مرتين كما هو موضح في الخطوة 11. 15. أعد تعليق العينات وانقلها في 100 ميكرولتر من محلول الصبغ إلى أنابيب مناسبة للتحليل باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي. أضف محلول التلوين إلى كل أنبوب حتى يصل حجمه إلى 400 ميكرولتر. 16. حلل العينات باستخدام جهاز قياس التدفق الخلوي.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي.