BD، 554062، BD Pharmingen™ PE-Cy™5 ستربتأفيدين

التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 0.2 ملغم/مل
RRID: AB_10053563
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم ربط الستربتافيدين بالصبغة في ظل ظروف مثالية، وتمت إزالة الستربتافيدين غير المرتبط والصبغة الحرة.
إجراءات التحليل الموصى بها: أشارت التقارير إلى أن صبغات PE-Cy5 المزدوجة ترتبط ببعض أنواع الخلايا البلعمية والخلايا المحببة البشرية عبر مستقبلات Fc، كما أشارت التقارير إلى أن PE يرتبط بالخلايا اللمفاوية البائية للفئران عبر مستقبلات Fc. يمكن تقليل الارتباط غير النوعي للكواشف المقترنة بـ PE-Cy5 بالخلايا البائية للفئران عن طريق تحضين كريات الدم البيضاء للفئران مسبقًا مع الأجسام المضادة النقية للفئران CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block™) (رقم المنتج 553141/553142). ولتحليل الدم المحيطي البشري، يمكن التغلب على هذا القيد من خلال تحديد مجموعات خلوية محددة بناءً على الانبعاث الضوئي الأمامي وتشتت الضوء، بالإضافة إلى علامات السلالة. علاوة على ذلك، لاحظنا نوعًا مميزًا من التفاعل بين صبغتي PE-Cy5 المتتاليتين وخلايا الطحال لدى فئران SJL وNOD وMRL: حيث تتلون الخلايا اللمفاوية البائية وبعض أنواع الكريات البيضاء الأخرى بشكلٍ واضح، ولا يُظهر مُثبِّط مستقبلات Fc من BD للفأر أي تأثير يُذكر. لذا، لا يُنصح باستخدام الكواشف المُقترنة بـ PE-Cy5 لتلوين كريات الدم البيضاء لدى فئران SJL أو NOD أو MRL. بينما يُمكن استخدام الكواشف المُقترنة بصبغات PE وPerCP وPerCP-Cy5.5 وAllophycocyanin (APC) وAPC-Cy7 المتتالية على كريات الدم البيضاء من هذه السلالات من الفئران.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يُعد PE-Cy5 فلوروكرومًا مزدوجًا يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يُثار بواسطة ضوء 488 نانومتر من ليزر أيون الأرجون ويعمل كمانح للطاقة، مقترنًا بصبغة السيانين Cy5، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتتألق عند 670 نانومتر. قامت شركة BD Biosciences Pharmingen بتحسين نقل طاقة الفلوركروم في PE-Cy5 إلى أقصى حد، مما أدى إلى زيادة شدة انبعاث الفلورة، وتقليل الانبعاث المتبقي من PE، وتقليل التباين بين الدفعات. تم تحسين PE-Cy5 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي ينبعث منه ضوء بطول موجي 488 نانومتر. نظرًا لطيف الامتصاص الواسع لفلوروكروم PE-Cy5 المزدوج، يجب توخي الحذر عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر التي قد تُثير كلاً من PE وCy5™ بشكل مباشر. يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مُقترن فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المُقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. أُفيد أن صبغات PE-Cy5 المزدوجة ترتبط ببعض أنواع الخلايا البلعمية والخلايا المحببة البشرية عبر مستقبلات Fc، كما أُفيد أن PE يرتبط بالخلايا اللمفاوية البائية للفئران عبر مستقبلات Fc أيضًا. يمكن أن يقلل تحضين كريات الدم البيضاء للفئران مسبقًا مع الجسم المضاد أحادي النسيلة 2.4G2 المضاد لـ CD16/CD32 للفئران، والمُنقى بواسطة Mouse BD Fc Block™، من الارتباط غير النوعي للكواشف المقترنة بـ PE-Cy5 بالخلايا البائية للفئران. مع ذلك، لا ينبغي استخدام الكواشف المقترنة بـ PE-Cy5 لتلوين الخلايا الطحالية لفئران SJL وNOD وMRL، إذ أُفيد أن الخلايا اللمفاوية البائية و/أو كريات الدم البيضاء الأخرى تتلون بشكل غير نوعي بغض النظر عن استخدام Mouse BD Fc Block™ (حيث يُعتقد أن معقد CD72c مسؤول عن ارتباط PE-Cy5 في هذه السلالات). يمكن استخدام الكواشف المقترنة بصبغات فلورية مزدوجة من نوع PE، وPerCP، وPerCP-Cy5.5، وAPC، وAPC-Cy7 على خلايا الدم البيضاء من هذه السلالات من الفئران. Cy هي علامة تجارية مسجلة لشركة GE Healthcare. يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على بيانات السلامة (SDS). يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.