BD، 554065، BD Pharmingen™ AKP Streptavidin

التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_10053566
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم ربط الستربتافيدين بالإنزيم في ظروف مثالية. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. للتخزين لفترات أطول، نوصي بإضافة حجم مماثل من الجلسرين، ليصل التركيز النهائي إلى 50% جلسرين، ثم يُخفض التركيز بنسبة 50%.
إجراءات الفحص الموصى بها: يمكن استخدام مُقترن AKP ستربتأفيدين لوسم الأجسام المضادة للكشف المُؤشَّرة بالبيوتين في اختبار ELISA (مع نظام ركيزة مناسب). يُوصى بتخفيفه بنسبة 1:1000 (1:500 في حال إضافة الجلسرين). للتلوين المناعي النسيجي، نوصي باستخدام AKP ستربتأفيدين في تركيبتنا الخاصة بالتلوين المناعي النسيجي، BD Pharmingen™ AKP ستربتأفيدين (رقم المنتج 551008). بروتوكول ELISA الساندويتش العام لألواح ELISA ذات 96 بئرًا. المواد المطلوبة: محلول الربط: محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات (PBS) بدرجة حموضة 7.2. يُرجى ملاحظة أنه يمكن زيادة أو خفض درجة حموضة محلول PBS، أو استخدام محاليل مُخفَّفة أخرى للحصول على ربط أفضل للأجسام المضادة المُلتقطة، كما هو مُحدَّد تجريبيًا. محلول PBS/Tween®: أضف 0.5 مل من Tween®-20 إلى 1 لتر من محلول PBS بتركيز 1× للحصول على محلول بتركيز 0.05% من Tween®-20. محلول الحجب: حضّر محلول حجب يحتوي على 10% من مصل الأبقار الجنيني (FBS) أو 1% من ألبومين المصل البقري (BSA) (درجة نقاء مناسبة للاختبارات المناعية) في محلول PBS. يجب ترشيح محلول الحجب لإزالة الجزيئات العالقة قبل الاستخدام. محلول الحجب/Tween®: حضّر محلول حجب يحتوي على 10% من مصل الأبقار الجنيني (FBS)، أو 10% من مصل العجول حديثة الولادة (NBCS)، أو 1% من ألبومين المصل البقري (BSA) (درجة نقاء مناسبة للاختبارات المناعية) في محلول PBS/Tween®. يجب ترشيح محلول الحجب لإزالة الجزيئات العالقة قبل الاستخدام. الركائز اللونية: حضّر محاليل الركائز باستخدام ركيزة AKP المتوفرة تجاريًا، وهي فوسفات نيتروفينيل الفوسفور (PNPP). PNPP هو ركيزة قابلة للذوبان في الماء، ينتج عنها منتج نهائي أصفر اللون (يمتص الضوء عند 405 نانومتر) عند تفاعله مع AKP. تتناسب شدة اللون طرديًا مع كمية الأجسام المضادة أو المستضدات الموجودة في عينة الاختبار، والتي يمكن قياسها باستخدام قارئ ELISA وبرنامج ELISA. الأجسام المضادة المُثبِّتة: 1. خفف الأجسام المضادة المُثبِّتة المُنقَّاة والمُخصصة للمادة المراد تحليلها إلى تركيز يتراوح بين 1 و4 ميكروغرام/مل في محلول الربط. أضف 50 ميكرولتر من الأجسام المضادة المُخففة إلى آبار صفيحة ELISA المُحسَّنة لربط البروتين. 2. أغلق الصفيحة بإحكام لمنع التبخر. حضّنها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. الحجب: 3. اترك الصفيحة حتى تصل إلى درجة حرارة الغرفة، واغسلها 3 مرات بمحلول PBS/Tween®، واحجب الارتباط غير النوعي بإضافة 200 ميكرولتر من محلول الحجب لكل بئر. 4. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة إلى ساعتين. 5. اغسل ≥ 3 مرات بمحلول PBS/Tween®. المعايير والعينات: 6. أضف سلسلة تخفيف من المادة التحليلية القياسية وعينات الاختبار المخففة في محلول الحجب/Tween® بمقدار 100 ميكرولتر لكل بئر. 7. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة 2-4 ساعات في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 8. اغسل ≥ 4 مرات بمحلول PBS/Tween®. الأجسام المضادة للكشف: 9. خفف الأجسام المضادة للكشف الخاصة بالمادة التحليلية والموسومة بالبيوتين إلى تركيز 0.5-2 ميكروغرام/مل في محلول الحجب/Tween®. أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف إلى كل بئر. 10. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. 11. اغسل ≥ 4 مرات بمحلول PBS/Tween®. ستربتافيدين الفوسفاتاز القلوي (AKP ستربتافيدين): ١٢. خفف مُقترن ستربتافيدين AKP (رقم المنتج ٥٥٤٠٦٥) إلى تركيزه الأمثل المُعاير مسبقًا في محلول الحجب/توين®. أضف ١٠٠ ميكرولتر لكل بئر. ١٣. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة. ١٤. اغسل الصفيحة ٥ مرات على الأقل بمحلول الفوسفات الملحي/توين®. الركيزة المُلوِّنة: ١٥. ضع ١٠٠ ميكرولتر من فوسفات بارا-نيتروفينيل (١ ملغم/مل في ٠.٠٥ مولار K2CO3، ١ ملي مولار MgCl2، الرقم الهيدروجيني ٩.٨) في كل بئر. حضّنها في درجة حرارة الغرفة (٥-٤٥ دقيقة) وراقب ظهور اللون. ١٦. بعد ظهور التفاعل اللوني، تُقاس امتصاصية محتويات البئر عند ٤١٠ نانومتر باستخدام قارئ لوحات ELISA الدقيقة. يمكن استخدام رسومات الامتصاصية المقاسة عند ٤١٠ نانومتر مقابل سلسلة تخفيف من تراكيز التحليل القياسية باستخدام برنامج ELISA لحساب مستويات التحليل الموجودة في العينات. تحذيرات: قد يسبب رد فعل تحسسي جلدي. احتياطات: ارتدِ قفازات واقية ونظارات واقية. ارتدِ ملابس واقية. تجنب استنشاق الرذاذ/الأبخرة. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيباً. في حالة ملامسة الجلد: اغسل جيداً بالماء. تخلص من المحتويات/العبوة وفقاً للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents.