BD، 554066، BD Pharmingen™ ستربتأفيدين HRP

التطبيق: اختبار ELISA (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_2868972
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ProClin™ 150 كمادة حافظة.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: تم ربط الستربتافيدين بالإنزيم في ظل ظروف مثالية. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
إجراءات الفحص الموصى بها: بروتوكول فحص ELISA الساندويتش العام لألواح ELISA ذات 96 بئرًا. يُعدّ ستربتأفيدين HRP كاشفًا مفيدًا في الخطوة الثانية لوسم الأجسام المضادة الأولية المُبيوتينية للكشف عنها بواسطة ELISA (مع نظام ركيزة مناسب). يُنصح الباحثون بمعايرة هذا الكاشف، مع اقتراح تخفيف ابتدائي بنسبة 1:1000. المواد المطلوبة: محلول الربط: محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات (PBS) بدرجة حموضة 7.2. يُرجى ملاحظة أنه يمكن زيادة أو خفض درجة حموضة محلول PBS، أو استخدام محاليل مُخفِّفة أخرى للحصول على ربط أفضل للأجسام المضادة المُلتقطة، كما هو مُحدد تجريبيًا. محلول PBS/Tween®: أضف 0.5 مل من Tween®-20 إلى 1 لتر من محلول PBS بتركيز 1× للحصول على محلول Tween®-20 بنسبة 0.05%. محلول الحجب: حضّر 10% من مصل الأبقار الجنيني (FBS) أو 1% من ألبومين المصل البقري (BSA) (درجة نقاء مناسبة للفحص المناعي) في محلول PBS. يجب ترشيح محلول الحجب لإزالة الجسيمات قبل الاستخدام. محلول الحجب/توين®: حضّر 10% من مصل الأبقار الجنيني (FBS)، أو 10% من مصل العجول حديثي الولادة (NBCS)، أو 1% من ألبومين المصل البقري (BSA) (درجة نقاء مناسبة للمقايسة المناعية) في محلول فوسفات ملحي/توين®. يجب ترشيح محلول الحجب لإزالة الجسيمات قبل الاستخدام. الركائز الملونة: حضّر محاليل الركائز باستخدام ركيزة HRP متوفرة تجاريًا: 1) TMB (3,3',5,5'-رباعي ميثيل بنزيدين) هي ركيزة قابلة للذوبان في الماء تُنتج منتجًا نهائيًا أزرق اللون عند تفاعلها مع HRP. يتطور لونها بشكل أسرع من ABTS، وهي ركيزة HRP بديلة. يُوصى باستخدام مجموعة كواشف ركيزة BD OptEIA™ TMB (رقم المنتج 555214). ٢) ABTS (ملح ثنائي الأمونيوم لـ 2,2'-أزينوبيس [3-إيثيل بنزوثيازولين-6-حمض السلفونيك]) هو ركيزة قابلة للذوبان في الماء، تُنتج ناتجًا نهائيًا أخضر اللون عند تفاعلها مع إنزيم بيروكسيداز الفجل (HRP). ويكون ظهور لونه أبطأ من TMB، وهو ركيزة بديلة لإنزيم HRP. الأجسام المضادة المُلتقطة: ١. خفف الأجسام المضادة المُلتقطة المُنقاة والمُخصصة للمادة المُحللة إلى تركيز يتراوح بين ١ و٤ ميكروغرام/مل في محلول الربط. أضف ٥٠ ميكرولتر من الأجسام المضادة المُخففة إلى آبار صفيحة ELISA المُحسّنة لربط البروتين. ٢. أغلق الصفيحة بإحكام لمنع التبخر. حضّنها طوال الليل عند درجة حرارة ٤ درجات مئوية. الحجب: ٣. اترك الصفيحة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة، واغسلها ٣ مرات بمحلول PBS/Tween®، واحجب الارتباط غير المُحدد بإضافة ٢٠٠ ميكرولتر من محلول الحجب لكل بئر. ٤. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة إلى ساعتين. 5. اغسل ≥ 3 مرات بمحلول PBS/Tween®. المعايير والعينات: 6. أضف سلسلة تخفيف من المادة التحليلية القياسية وعينات الاختبار المخففة في محلول الحجب/Tween® بمقدار 100 ميكرولتر لكل بئر. 7. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة 2-4 ساعات في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية. 8. اغسل ≥ 4 مرات بمحلول PBS/Tween®. الأجسام المضادة للكشف: 9. خفف الأجسام المضادة للكشف الخاصة بالمادة التحليلية والموسومة بالبيوتين إلى تركيز 0.5-2 ميكروغرام/مل في محلول الحجب/Tween®. أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف إلى كل بئر. 10. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. 11. اغسل ≥ 4 مرات بمحلول PBS/Tween®. ستربتأفيدين-بيروكسيداز الفجل (ستربتأفيدين-HRP): ١٢. خفف مُقترن ستربتأفيدين-HRP (رقم المنتج ٥٥٤٠٦٦) إلى تركيزه الأمثل المُعاير مسبقًا في محلول الحجب/توين®. أضف ١٠٠ ميكرولتر لكل بئر. ١٣. أغلق الصفيحة بإحكام وحضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة. ١٤. اغسل الصفيحة ٥ مرات على الأقل بمحلول PBS/توين®. الركيزة المُلوِّنة: ١٥. ضع ١٠٠ ميكرولتر من TMB باستخدام مجموعة كواشف ركيزة BD OptEIA™ TMB (رقم المنتج ٥٥٥٢١٤) أو محاليل ركيزة ABTS في كل بئر. حضّنها في درجة حرارة الغرفة (٥-٤٥ دقيقة) وراقب ظهور اللون. يمكن إيقاف تفاعل اللون بإضافة ٥٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف المُتوفر تجاريًا لكل بئر. ١٦. اقرأ الكثافة الضوئية (OD) لكل بئر باستخدام قارئ الألواح الدقيقة. يُقرأ الناتج الملون الناتج عن تفاعل TMB مع HRP عند 450 نانومتر، وإذا كان تصحيح الطول الموجي متاحًا، يُوصى باستخدامه بين 450 و570 نانومتر. يُقرأ الناتج الملون الناتج عن تفاعل ATBS مع HRP عند 405 نانومتر، وإذا كان تصحيح الطول الموجي متاحًا، يُوصى باستخدامه بين 405 و490 نانومتر. ١٧. تتناسب شدة الناتج الملون طرديًا مع كمية المادة المراد تحليلها الموجودة في عينة الاختبار. باستخدام قارئ ELISA وبرنامج ELISA، تُستخدم رسومات بيانية للامتصاص مقابل سلسلة تخفيف من تراكيز المادة المراد تحليلها القياسية لحساب مستويات المادة المراد تحليلها الموجودة في العينات. تحذير: يحتوي ستربتأفيدين HRP على 0.004% (وزن/وزن) من مزيج CMIT/MIT (3:1)، وهو مزيج من: 5-كلورو-2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 247-500-7] و2-ميثيل-4-أيزوثيازولين-3-ون [رقم EC 220-239-6] (3:1). بيانات المخاطر: قد يسبب رد فعل تحسسي جلدي. بيانات الاحتياطات: ارتدِ قفازات واقية ونظارات واقية. ارتدِ ملابس واقية. تجنب استنشاق الرذاذ/الأبخرة. في حالة حدوث تهيج أو طفح جلدي: استشر طبيباً. في حالة ملامسة الجلد: اغسل جيداً بالماء. تخلص من المحتويات/العبوة وفقاً للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. المكون الخطير: ProClin™ 150. تجنب ملامسة الجلد والعينين والابتلاع. اغسل الجلد المُعرَّض بالماء والصابون. اشطف العينين بالماء. يُرجى مراجعة http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). ProClin هي علامة تجارية لشركة Rohm and Haas. للاطلاع على براءات الاختراع الأمريكية التي قد تنطبق، يُرجى زيارة bd.com/patents.