BD، 554654، خلايا التحكم الإيجابي لسيتوكين الفأر MiCK-3 من BD Pharmingen™

التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
التركيز: 5 × 10^6 خلية/مل
RRID: AB_2869004
محلول التخزين: مجمد في مصل بقري جنيني و10% من ثنائي ميثيل سلفوكسيد.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ المنتج في درجة حرارة -80 درجة مئوية قبل الاستخدام أو للتخزين طويل الأمد للمحاليل المركزة. يُذاب المنتج بسرعة ويُرجّ جيدًا قبل الاستخدام. تجنب تكرار تجميد المنتج وإذابته. لا يحتوي هذا المستحضر على مواد حافظة، لذا يجب التعامل معه في ظروف معقمة. عند الاستلام، يُحفظ معلق الخلايا في درجة حرارة -80 درجة مئوية. بدلاً من ذلك، يمكن إذابة معلق الخلايا المجمد ورجّ القارورة المغلقة بسرعة لضمان استخلاص جميع محتوياتها. بعد إعادة تعليق الخلايا جيدًا باستخدام ماصة، يمكن إعادة تجميد حصص "الاستخدام الفردي" وتخزينها (-80 درجة مئوية) في أنابيب دقيقة من البولي بروبيلين لاستخدامها لاحقًا.
إجراءات الفحص الموصى بها: إجراءات الفحص الموصى بها: تُستخدم معلقات الخلايا MiCK-3 للتحكم الإيجابي لتوفير خلايا تحتوي على تراكمات داخلية من IL-1α، وIL-6، وIL-12، وMCP-1، أو TNF، والتي يمكن الكشف عنها بسهولة عن طريق التلوين المناعي الفلوري للسيتوكينات داخل الخلايا وقياس التدفق الخلوي. وبذلك، تُستخدم هذه الخلايا كضوابط إيجابية للتحقق من فعالية ارتباط الأجسام المضادة الفلورية للسيتوكينات وإجراء التلوين نفسه (مثل النفاذية). للتلوين، يجب أولاً إذابة عينة الخلايا المجمدة بسرعة وبحرص. ثم تُنقل أجزاء من معلق الخلايا إلى حُفر دقيقة أو أنابيب. تُغسل الخلايا المثبتة وغير المنفذة مرتين بمحلول التلوين لإزالة DMSO. بعد ذلك، تُحضن الخلايا لمدة 10 دقائق، ثم تُغسل مرة واحدة بمحلول النفاذية/الغسل (BD Perm/Wash™، رقم المنتج 554723). يمكن بعد ذلك تلوين الخلايا بمقترن فلوري إما ALF-161 (الهامستر المضاد للفأر IL-1α؛ رقم الكتالوج 559810)، أو MP5-20F3 (الجرذ المضاد للفأر IL-6؛ رقم الكتالوج 554401)، أو C15.6 (الجرذ المضاد للفأر IL-12 p40/p70؛ رقم الكتالوج 554479، أو رقم 554480)، أو 2H5 (الهامستر المضاد للفأر MCP-1؛ رقم الكتالوج 554443)، أو MP6-XT22 (الجرذ المضاد للفأر TNF؛ رقم الكتالوج 554418، أو رقم 554419، أو رقم 554420). ملاحظة: يمكن إظهار التلوين النوعي للسيتوكينات على خلايا MiCK-3 عن طريق تحضين مسبق للأجسام المضادة النوعية للسيتوكينات المقترنة مع السيتوكين المؤتلف، أو عن طريق معالجة خلايا MiCK-3 مسبقًا بأجسام مضادة حاجبة غير موسومة. ونظرًا لإجراء تنشيط الخلايا، قد تتلون نسبة صغيرة من الخلايا بشكل غير نوعي (أي لا يتم حجبها لا بالأجسام المضادة غير الموسومة ولا بالرابط).
تنبيهات المنتج: تجنب ملامسة المنتج للجلد والعينين. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. يرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.