Product Description
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
إجراءات التحليل الموصى بها: قياس التدفق الخلوي (التلوين المناعي الفلوري المباشر): 1. تحضير معلقات الخلايا المفردة من الأنسجة اللمفاوية أو نخاع العظم أو الدم المحيطي أو مزارع الخلايا باستخدام البروتوكولات القياسية. 2. غسل الخلايا مرتين بمحلول التلوين البارد (FBS) وترسيبها بالطرد المركزي (مثلاً، 300 × جم عند 4 درجات مئوية). إعادة تعليق الخلايا المترسبة في محلول التلوين البارد (FBS) للوصول إلى تركيز نهائي قدره 2 × 10⁷ خلية/مل. 3. توزيع 50 ميكرولتر من معلق الخلايا (10⁶ خلية) في الأنابيب أو في الآبار ذات القاع المستدير في صفائح الميكروويل. ٤. خفف الأجسام المضادة الفلورية إلى تركيزاتها المثلى المحددة مسبقًا في محلول التلوين (FBS)، وأضف كميات صغيرة (مثل ١٠ ميكرولتر) من الأجسام المضادة المخففة إلى الأنابيب أو الحُفر الدقيقة التي تحتوي على معلقات الخلايا المستهدفة. حضّن لمدة ٢٠ دقيقة على الجليد بعيدًا عن الضوء. يمكن زيادة وقت التلوين (٤٥ دقيقة أو أكثر) حسب قوة ارتباط الجسم المضاد الفلوري. ٥. اغسل الخلايا مرتين إما بحجم ٢٠٠ ميكرولتر (لألواح الحُفر الدقيقة) أو ١ مل (للأنابيب) من محلول التلوين (FBS) لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. افصل الخلايا بالطرد المركزي بسرعة ٣٠٠ × جم لمدة ٥ دقائق. بعد كل عملية طرد مركزي، اسحب السائل الطافي بعناية (لألواح الحُفر الدقيقة أو الأنابيب) أو اقلبها وجففها (للأنابيب) من كريات الخلايا. ٦. أعد تعليق الخلايا المترسبة في ٢٠٠ ميكرولتر (لألواح الميكروويل) أو ٠.٥ مل (للأنابيب) من محلول التلوين (FBS). انقل الخلايا الملونة من ألواح الميكروويل إلى الأنابيب المناسبة لتحليل التدفق الخلوي (اضبط الحجم النهائي إلى حوالي ٠.٥ مل). ٧. حلل عينات الخلايا الملونة باستخدام التدفق الخلوي في أسرع وقت ممكن (خلال ٤ ساعات أو أقل) بعد التلوين. إذا لزم تأجيل التحليل، يمكن تثبيت الخلايا الملونة باستخدام بارافورمالدهيد مُخفف (مثل محلول التثبيت BD Cytofix™؛ رقم المنتج ٥٥٤٦٥٥) وحفظها في درجة حرارة ٤ درجات مئوية (مع حمايتها من الضوء). يجب تحليل الخلايا المثبتة في أسرع وقت ممكن (خلال أسبوع واحد من التلوين والتثبيت). ملاحظة ١: يمكن استخدام محلول التلوين (FBS) بنفس الطريقة للتلوين المناعي الفلوري غير المباشر للخلايا. في هذه الحالة، كرر الخطوتين 4 و5 عند استخدام الأجسام المضادة الأولية غير الموسومة أو الموسومة بالبيوتين. عند تلوين الخلايا بالأجسام المضادة الموسومة بالبيوتين والأفيدين المرتبط بالفلوركروم، يُفضل استخدام وسط تلوين خالٍ من البيوتين، مثل محلول التلوين (BSA) (رقم المنتج 554657). ملاحظة 2: يمكن أيضًا استخدام محلول التلوين (FBS) للتلوين المناعي الفلوري للمستضدات السطحية التي تُعبر عنها الخلايا المُراد تثبيتها وتلوينها مناعيًا فلوريًا للمستضدات داخل الخلوية، مثل السيتوكينات. يمكن إعادة تعليق الخلايا الملونة للسيتوكينات داخل الخلوية وحفظها (أي عند 4 درجات مئوية، بعيدًا عن الضوء) في محلول التلوين (FBS) قبل تحليلها بواسطة قياس التدفق الخلوي.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة.
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924