BD، 555670، BD Pharmingen™ مضاد CD95 الفأري النقي NA/LE

الاسم البديل: APO-1؛ FAS؛ TNFRSF6؛ APT1؛ ALPS1A؛ FAS1؛ FASTM؛ مستقبل FASLG
التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، قرد الريسوس، قرد المكاك، قرد البابون (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: C3H الفأري، المعروف أيضًا باسم C3H/He، C3H/Bi IgG1، κ
المستضد: خلايا L المحولة بـ CD95 البشري
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)، الفحص الوظيفي (يتم اختباره أثناء التطوير)
التركيز: 1.0 ملغم/مل
رقم الورشة: VI C-64
RRID: AB_396023
محلول التخزين: خالٍ من الأزيد/منخفض السموم الداخلية: محلول مائي منظم لا يحتوي على مواد حافظة، مُرشَّح تعقيمًا عبر مرشح 0.2 ميكرومتر. مستوى السموم الداخلية ≤ 0.01 وحدة سمية داخلية/ميكروغرام (≤ 0.001 نانوغرام/ميكروغرام) من البروتين، كما تم تحديده بواسطة اختبار LAL.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. لا يحتوي هذا المستحضر على مواد حافظة، لذا يجب التعامل معه في ظروف معقمة.
إجراءات الفحص الموصى بها: يُنصح الباحثون بأن الإجراء التالي لا يُجرى اختباره بشكل روتيني لهذه المادة. تحفيز موت الخلايا المبرمج باستخدام جسم مضاد مُنقّى من الفأر ضد CD95 البشري (النسيلة DX2) [MN 555670]. المواد الإضافية المطلوبة: خط خلوي للتحكم الإيجابي (مثل Daudi، HPB-ALL، Jurkat)، بروتين G المؤتلف (rProt G) (SIGMA، رقم المنتج P4689)، صفيحة ميكروية ذات 96 بئرًا، وسط IMDM أو RPMI 1640 مع 10% من مصل جنين البقر المُعطّل حراريًا (FBS)، و1% من الجلوتامين، و1% من المضادات الحيوية (وسط FBS). الإجراء: 1. الحفاظ على الخلايا في المزرعة باستخدام وسط FBS بنسبة 10%؛ تغيير الوسط قبل يوم واحد من بدء تحفيز موت الخلايا المبرمج. اجمع الخلايا وجففها، ثم أعد تعليقها في وسط يحتوي على 10% من مصل بقري جنيني (FBS) بكثافة تتراوح بين 0.5 و1.0 × 10^6 خلية/مل. 2. في صفيحة ميكروية ذات 96 بئرًا، أضف 2.5 ميكروغرام/50 ميكرولتر من CD95 NA/LE™، و0.5 ميكروغرام/50 ميكرولتر من rProt G، و0.5-1.0 × 10^5 خلية، ووسط يحتوي على 10% من مصل بقري جنيني (FBS) ليصل الحجم الكلي إلى 200 ميكرولتر. يجب أن تتكون الضوابط السلبية من: 1) 0.5-1.0 × 10^5 خلية مع وسط يحتوي على 10% من مصل بقري جنيني (FBS) فقط (حجم كلي 200 ميكرولتر)، و2) 0.5-1.0 × 10^5 خلية مع 0.5 ميكروغرام/50 ميكرولتر من rProtG ووسط يحتوي على 10% من مصل بقري جنيني (FBS). 3. حضّن الصفيحة ذات 96 بئرًا عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون، لمدة تتراوح بين 12 و24 ساعة. تقليديًا، يُرصد موت الخلايا المبرمج باستخدام المجهر الضوئي، أو اختبار MTT، أو الفصل الكهربائي الهلامي (تجزئة الحمض النووي). قد يهتم الباحثون بالعديد من المنتجات التي تقدمها شركة BD Biosciences والتي يمكن استخدامها للكشف عن الخلايا الميتة مبرمجًا باستخدام قياس التدفق الخلوي: مجموعة ApoDirect™ (رقم المنتج 556381)، ومجموعة ApoBRDU™ (رقم المنتج 556405)، وAnnexin V-FITC (رقم المنتج 556420 أو 556419). نظرًا لاختلاف حساسية هذه الطرق، قد يكون من الضروري معايرة rProtG و/أو CD95 NA/LE™ للحصول على أفضل النتائج. ملاحظات: تستند الاقتراحات الواردة في هذا الإجراء إلى الظروف التي وُجد أنها مثالية لتحفيز موت الخلايا المبرمج بواسطة الأجسام المضادة لـ CD95 البشري (Fas). أظهرت الدراسات أن إضافة البروتين G يمكن أن تُحسّن بشكل ملحوظ كفاءة DX2 في هذا النوع من الاختبارات الوظيفية. من المهم ملاحظة وجود تباين كبير بين سلالات الخلايا في مستوى الاستماتة الخلوية التي يمكن تحفيزها عبر مستقبل Fas. وقد ذُكر أنه على الرغم من أن بعض الخلايا تُعبّر عن مستضد Fas، إلا أنها لا تخضع بالضرورة للاستماتة الخلوية بوساطة Fas (أي أن مستضد Fas المُعبّر عنه قد يكون حساسًا أو غير حساس لمضاد Fas). تُعد خلايا Daudi وJurkat وHPB-ALL ضوابط إيجابية جيدة، حيث يتم تحفيزها بقوة بواسطة مضاد Fas للخضوع للاستماتة الخلوية.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يجب استخدام عنصر تحكم من نفس النوع بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.