BD، 556027، مجموعة BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Ki-67

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر (تم اختباره أثناء التطوير)، الجرذ، قرد الريسوس (تم الإبلاغ عنه)
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_2266296
الوصف: يتعرف هذا الجسم المضاد على Ki-67، وهو مستضد نووي مرتبط بتكاثر الخلايا، ويُعبر عنه في جميع المراحل النشطة من دورة الخلية. يظهر Ki-67 على شكل حزمتين (345 و395 كيلو دالتون) في تحليل لطخة ويسترن للخلايا المتكاثرة. تم تطوير الجسم المضاد B56 باستخدام مولد مناعي يتكون من الجزء المناعي السائد من بروتين Ki-67. يتفاعل الجسمان المضادان B56 وMIB 1 مع هذا المولد المناعي. يكشف تحليل التدفق الخلوي أن ارتباط B56-PE يمكن تثبيطه بواسطة الجسم المضاد MIB 1 النقي.
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر.
إجراءات الفحص الموصى بها: بروتوكول تلوين Ki-67 باستخدام قياس التدفق الخلوي: 1. اجمع الخلايا، وعدها، وترسيبها باتباع الإجراءات القياسية (ملاحظة: يُعبر عن Ki-67 بواسطة الخلايا المتكاثرة. قد لا يظهر أي تلوين مع الخلايا غير المحفزة، مثل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة غير المحفزة). 2. أثناء الخلط، أضف 5 مل من الإيثانول البارد بتركيز 70-80% قطرة قطرة إلى راسب الخلايا (1-5 × 10⁷ خلية). ثم حضّنها عند -20 درجة مئوية لمدة ساعتين على الأقل. يمكن استخدام هذه الخلايا المثبتة لمدة تصل إلى 60 يومًا بعد التثبيت (خزّنها عند -20 درجة مئوية). 3. أضف 30-40 مل من محلول الغسل (محلول ملحي فوسفاتي مع 1% مصل بقري جنيني، 0.09% أزيد الصوديوم، درجة الحموضة 7.2) إلى الخلايا المثبتة. افصل الخلايا بالطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1000 دورة في الدقيقة، ثم اسحب السائل الطافي. اغسل مرة أخرى باستخدام 30-40 مل من محلول الغسل. ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق، ثم تخلص من السائل الطافي. 4. أعد تعليق الخلايا بتركيز 1 × 10⁷ خلية/مل (1 × 10⁶ خلية/100 ميكرولتر). 5. انقل 100 ميكرولتر من معلق الخلايا إلى كل أنبوب جديد. 6. أضف 20 ميكرولتر من الجسم المضاد المخفف بشكل صحيح وفقًا للبروتوكول إلى الأنابيب المذكورة أعلاه. اخلط برفق. 7. حضّن الأنابيب في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-30 دقيقة في الظلام. 8. اغسل باستخدام 2 مل من محلول الغسل PBS بسرعة 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. 9. تخلص من السائل الطافي. ١٠. بالنسبة للأجسام المضادة المقترنة مباشرةً: انتقل إلى الخطوتين ١٣ و١٤. ١١. بالنسبة للأجسام المضادة المنقاة: أضف ٥٠ ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المخفف بالتركيز الأمثل (رقم المنتج ٥٥٥٩٨٨)، ثم حضّنه في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة في الظلام. ١٢. كرر الخطوتين ٨ و٩. ١٣. أضف ٠.٥ مل من محلول غسيل PBS إلى كل أنبوب. بالنسبة للأجسام المضادة المقترنة بـ FITC، أضف ١٠ ميكرولتر من محلول تلوين PI (رقم المنتج ٥٥٦٤٦٣)؛ بالنسبة للأجسام المضادة المقترنة بـ PE، أضف ٢٠ ميكرولتر من محلول BD Via-Probe™ لقياس حيوية الخلايا (رقم المنتج ٥٥٥٨١٦) إلى كل أنبوب. ١٤. حلل العينة باستخدام جهاز FACS.
إشعارات المنتج: تم تحسين هذا الجسم المضاد ومعايرته مسبقًا باستخدام عنصر تحكم من نفس النوع لاستخدامه بالحجم الموصى به وهو 20 ميكرولتر/اختبار. لا يُنصح بمعايرة الكواشف أو استبدالها بعنصر تحكم آخر من نفس النوع (غير مطابق). تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في كل شكل و/أو تطبيق. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يرجى الرجوع إلى صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر