BD، 556432، BD Pharmingen™ مضاد السيتوكروم c النقي من الفئران

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر، الجرذ (تم تأكيد التفاعل أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG1، κ للفأر BALB/c
المستضد: السيتوكروم ج للفئران
التطبيقات: الترسيب المناعي (يتم اختباره بشكل روتيني)، التصوير الحيوي (يتم اختباره أثناء التطوير)، لطخة ويسترن (غير موصى بها)
الوزن الجزيئي المستهدف: 15 كيلو دالتون
التركيز: 0.5 ملغم/مل
RRID: AB_396416
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على ≤0.09% من أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي بواسطة كروماتوغرافيا التقارب.
إجراءات الفحص الموصى بها: التصوير الحيوي 1. ازرع الخلايا في وسط زراعة مناسب بمعدل 10000 خلية تقريبًا لكل بئر في صفيحة تصوير BD Falcon™ ذات 96 بئرًا (رقم المنتج 353219) واتركها طوال الليل. 2. أزل وسط الزراعة من الآبار، وثبّت الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول التثبيت BD Cytofix™ (رقم المنتج 554655) إلى كل بئر. حضّن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 3. أزل المُثبِّت من الآبار، واجعل الخلايا نفاذة باستخدام إما محلول BD Perm Buffer III، أو ميثانول 90%، أو Triton™ X-100: أ. أضف 100 ميكرولتر من ميثانول 90% عند درجة حرارة -20 درجة مئوية أو محلول Perm Buffer III (رقم المنتج 558050) إلى كل بئر وحضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. أو ب. أضف 100 ميكرولتر من محلول تريتون™ X-100 بتركيز 0.1% إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. 4. أزل محلول النفاذية، واغسل الآبار مرتين بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. 5. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، ثم احجب الخلايا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول التلوين BD Pharmingen™ (FBS) (رقم المنتج 554656) إلى كل بئر. حضّن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 6. أزل محلول الحجب، ثم أضف 50 ميكرولتر من الجسم المضاد الأولي المُعاير بشكل مثالي (المخفف في محلول التلوين) إلى كل بئر، ثم حضّن لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. 7. أزل الجسم المضاد الأولي، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ 100 ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز 1×. ٨. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، وأضف ٥٠ ميكرولتر من كاشف الخطوة الثانية بتركيزه الأمثل إلى كل بئر، ثم حضّن العينات في الظلام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ٩. أزل كاشف الخطوة الثانية، واغسل الآبار ثلاث مرات بـ ١٠٠ ميكرولتر من محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١×. ١٠. أزل محلول الفوسفات الملحي (PBS)، وقم بتلوين النوى بإضافة ٢٠٠ ميكرولتر من محلول هوكست ٣٣٣٤٢ بتركيز ٢ ميكروغرام/مل (مثلًا، سيغما-ألدريتش، رقم المنتج B2261) في محلول الفوسفات الملحي (PBS) بتركيز ١× إلى كل بئر قبل ١٥ دقيقة على الأقل من التصوير. ١١. اعرض الخلايا وحللها باستخدام جهاز تصوير مناسب. التصوير الحيوي: لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp التحليل المناعي الغربي: لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى الرجوع إلى الرابط التالي: http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. تم تطوير هذا الجسم المضاد واعتماده لتطبيقات التصوير الحيوي. مع ذلك، لا يُجرى اختبار التصوير الحيوي الروتيني على كل دفعة. يُنصح الباحثون بمعايرة الكاشف للحصول على أفضل أداء. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تريتون علامة تجارية لشركة داو كيميكال.