BD، 557769، جزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ CD14 البشري - DM

الاسم البديل: مستقبل LPS؛ LPS-R؛ بروتين سكري غني بالليوسين خاص بالخلايا النخاعية
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، ريسوس (تم الإبلاغ عنه)
النمط المصلي: IgG2b، κ للفأر BALB/c
المستضد: الخلايا الوحيدة البشرية
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
رقم الورشة: I M35؛ II M67؛ III M337؛ IV M301
RRID: AB_398631
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم خلايا الدم أحادية النواة الطرفية (PBMC) بجزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ CD14 البشري - DM وفقًا لبروتوكول الوسم المغناطيسي. ثم توضع هذه الخلايا داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™ (رقم المنتج 552311). تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الجزء السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الجزء الموجب، يسمح صغر حجم الجزيئات المغناطيسية بإجراء مزيد من التقييم لهذا الجزء في تطبيقات لاحقة مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي: 1. تحضير الخلايا الليمفاوية أحادية النواة من الدم البشري (أو دم قرد الريسوس) المعالج بمضادات التخثر، ويفضل استخدام تقنية الطرد المركزي بتدرج الكثافة باستخدام محلول فيكول-باك™.* 2. تخفيف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام الماء المقطر المعقم، أو تحضير محلول BD IMag™ بتركيز 1X بإضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري، و2 ملي مول من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، و0.09% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي منظم بالفوسفات. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. 3. عدّ الخلايا، واغسلها بكمية كبيرة من محلول BD IMag™ بتركيز 1X، ثم اسحب السائل الطافي بعناية. ٤. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD14 المغناطيسية البشرية - DM جيدًا، وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجزيئات لكل ١٠⁷ خلية إجمالية.† ٥. امزج جيدًا. حضّن في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة.‡ ٦. ارفع حجم جزيئات BD IMag المُعلَّمة إلى ١-٨ × ١٠⁷ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ المُخفَّف ١X، وضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا. حضّن لمدة ٨-١٠ دقائق. ٧. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. يحتوي هذا السائل الطافي على الجزء السالب. ٨. أزل الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز ١X إلى نفس الحجم كما في الخطوة ٦. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق سحب المحلول ودفعه بالماصة، ثم أعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا لمدة ٢-٤ دقائق أخرى. ٩. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص وتخلص منه. ١٠. كرر الخطوتين ٨ و٩. ١١. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم أو وسط مناسب، وتابع التطبيق (التطبيقات) اللاحقة المطلوبة. *نصائح لتحضير الخلايا بنجاح: اسحب الدم في أنبوب يحتوي على EDTA. أزل البلازما الغنية بالصفائح الدموية عن طريق الطرد المركزي مرة واحدة عند ٢٢٠-٢٤٠ × g. اغسل ٢-٣ مرات بمحلول PBS بعد فصل التدرج الكثافي. أزل تكتلات الخلايا و/أو الحطام عن طريق تمرير المعلق من خلال مصفاة خلايا من النايلون بمسام ٧٠ ميكرومتر. † قد يلزم معايرة جزيئات BD IMag™ لتحسين فصل كريات الدم البيضاء لدى قرود المكاك الريسوسي. ‡ تجنب الوسم غير المحدد بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
إشعارات المنتج: تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة بمجموعات الكربوكسيل، تُصنّعها شركة Skold Technology بموجب ترخيص براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. Ficoll-Paque علامة تجارية مسجلة لشركة Amersham Biosciences Limited. تحذير: ينتج عن أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. يُرجى مراجعة الموقع الإلكتروني www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.