BD، 557775، جزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ CD56 البشري - DM

الاسم البديل: NCAM1؛ NCAM-1؛ NCAM؛ Leu-19؛ جزيء التصاق الخلايا العصبية 1؛ NKH1؛ MSK39
التفاعل: بشري (اختبار مراقبة الجودة)، ريسوس (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: IgG2b، κ للفأر BALB/c
المستضد: NCAM دماغ الإنسان البالغ المُخصب بالتقارب المناعي
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
رقم الورشة: V NK60
RRID: AB_398633
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم خلايا الدم أحادية النواة الطرفية (PBMC) بجزيئات BD IMag™ المغناطيسية المضادة لـ CD56 البشري - DM وفقًا لبروتوكول الوسم المغناطيسي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسوم داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™. تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الجزء السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الجزء الموجب، يسمح صغر حجم الجزيئات المغناطيسية بتقييم هذا الجزء بشكل أكبر في تطبيقات لاحقة، مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي: 1. خفف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم، أو حضّر محلول BD IMag™ بتركيز 1X بإضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA) و2 ملي مول من ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الأسيتيك (EDTA) و0.1% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي فوسفاتي. يُحفظ في درجة حرارة 4 درجات مئوية. 2. حضّر الخلايا الليمفاوية أحادية النواة من الدم البشري (أو دم قرد الريسوس) المعالج بمضادات التخثر، ويفضل استخدام تقنية الطرد المركزي بتدرج الكثافة باستخدام محلول فيكول-باك™.* اختياري: إذا لم تكن خلايا NK-T مطلوبة، فاستنفد الخلايا الليمفاوية التائية باستخدام جزيئات BD™ IMag المضادة لـ CD3 البشري المغناطيسية - DM (رقم المنتج 552593). ٣. عدّ الخلايا، واغسلها بكمية زائدة من محلول BD IMag™ المخفف (1X)، ثم اسحب السائل الطافي بحرص. ٤. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD56 المغناطيسية البشرية - DM جيدًا، وأضف ٥٠ ميكرولتر من الجزيئات لكل ١٠^٧ خلية.† ٥. اخلط جيدًا. حضّن في درجة حرارة الغرفة لمدة ٣٠ دقيقة.‡ ٦. ارفع حجم جزيئات BD IMag المُعلّمة إلى ١-٨ × ١٠^٧ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ المخفف (1X)، وضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا. حضّن لمدة ٨-١٠ دقائق. ٧. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. يحتوي هذا السائل الطافي على الجزء السالب. ٨. أزل الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز ١X إلى نفس الحجم كما في الخطوة ٦. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق سحب المحلول ودفعه بالماصة، ثم أعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا لمدة ٢-٤ دقائق أخرى. ٩. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص وتخلص منه. ١٠. كرر الخطوتين ٨ و٩. ١١. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم أو وسط مناسب، وتابع التطبيق (التطبيقات) اللاحقة المطلوبة. * نصائح لتحضير الخلايا بنجاح: اسحب الدم في أنبوب يحتوي على EDTA. أزل البلازما الغنية بالصفائح الدموية عن طريق الطرد المركزي مرة واحدة عند ٢٢٠-٢٤٠ × g. اغسل ٢-٣ مرات بمحلول PBS بعد فصل التدرج الكثافي. أزل تكتلات الخلايا و/أو الحطام عن طريق تمرير المعلق من خلال مصفاة خلايا من النايلون بمسام ٧٠ ميكرومتر. † قد يلزم معايرة جزيئات IMag لتحسين فصل كريات الدم البيضاء لدى قرود المكاك الريسوسي. ‡ تجنب الوسم غير المحدد بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
إشعارات المنتج: تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة بمجموعات الكربوكسيل، تُصنّعها شركة Skold Technology بموجب ترخيص براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. Ficoll-Paque علامة تجارية مسجلة لشركة Amersham Biosciences Limited. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. يجب تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع، الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج، قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.