BD، 557825، طقم BD™ لاختبار البروتين التفاعلي C (CRP) في الفئران بتقنية ELISA

التطبيق: اختبار ELISA (تم اختباره أثناء التطوير)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
الوصف: المواد المتوفرة: صفيحة ميكروية مغلفة بأجسام مضادة لالتقاط البروتين التفاعلي C (CRP) تحتوي على 96 بئرًا قابلة للكسر، مغلفة بأجسام مضادة من الأرانب ضد CRP الفئران. جسم مضاد للكشف/إنزيم مقترن (100x): 120 ميكرولتر من بيروكسيداز الفجل المركز (HRP) مقترن بأجسام مضادة من الأرانب ضد CRP الفئران، يحتوي على مثبتات ومواد حافظة. يُحفظ بعيدًا عن الضوء. المعيار (10x): 250 ميكرولتر من مصل الفئران ذي مستويات مرتفعة من CRP. محلول الغسل: عبوة واحدة من مسحوق محلول ملحي فوسفاتي (PBS) مع 0.05% توين-20. يُعاد تكوينه بإضافة لتر واحد من الماء المقطر. ركيزة TMB: محلول 12 مل يحتوي على 3،3'،5،5'-رباعي ميثيل بنزيدين (TMB) مُقدم في زجاجة معتمة واقية. يُحفظ بعيدًا عن الضوء. محلول الإيقاف: 12 مل من حمض الفوسفوريك المخفف، جاهز للاستخدام. صُممت مجموعة اختبار ELISA لبروتين سي التفاعلي (CRP) في الفئران للكشف عن بروتين سي التفاعلي (CRP) وتحديد كميته في مصل الفئران. يُعدّ بروتين سي التفاعلي (CRP) بروتينًا حاد الطور يُنتجه الكبد في حالات الالتهاب، أو العدوى البكتيرية، أو إصابات الأنسجة. يُمكن أن يكون تحديد كمية بروتين سي التفاعلي (CRP) مفيدًا في تشخيص حالات الالتهاب التي يصعب اكتشافها ومراقبتها بطرق أخرى. مبدأ الاختبار: اختبار BD™ ELISA لبروتين سي التفاعلي (CRP) في الفئران هو اختبار ELISA ساندويتش ذو طور صلب (اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم). يستخدم هذا الاختبار جسمًا مضادًا خاصًا ببروتين سي التفاعلي (CRP) في الفئران، مُغطى على صفيحة ذات 96 بئرًا. تُضاف المعايير أو العينات إلى الآبار، ويرتبط أي بروتين سي التفاعلي (CRP) موجود في الفئران بالجسم المضاد المُثبت. بعد فترة الحضانة المناسبة، تُغسل الآبار ويُضاف جسم مضاد مُقترن بإنزيم بيروكسيداز الفجل لبروتين سي التفاعلي (CRP) في الفئران، لتكوين "ساندويتش" من الأجسام المضادة والمستضدات. بعد فترة حضانة أخرى، تُغسل الآبار مرة أخرى ويُضاف محلول الركيزة، الذي يُنتج لونًا أزرق يتناسب طرديًا مع كمية البروتين التفاعلي C (CRP) الموجودة في العينة الأولية (يشير ظهور اللون الأزرق إلى تفاعل إيجابي، بينما تظهر التفاعلات السلبية عديمة اللون). يُوقف التفاعل باستخدام محلول الإيقاف، الذي يُغير اللون من الأزرق إلى الأصفر (تبقى التفاعلات السلبية عديمة اللون أو صفراء باهتة). ثم يُقاس اللون عند طول موجي 450 نانومتر (الامتصاص) باستخدام مطياف ضوئي أو قارئ ELISA.
التحضير والتخزين: يُحفظ المنتج غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية. يجب ترك مكونات المجموعة لتصل إلى درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية) قبل فتح الزجاجات وأكياس الأطباق. يُرجى الانتظار لمدة 30 دقيقة على الأقل لإتمام هذه العملية. لا تستخدم المجموعة بعد تاريخ انتهاء الصلاحية.
إجراءات التحليل الموصى بها: جمع العينات ومعالجتها: يجب أن تكون العينات صافية، غير متحللة، وخالية من الدهون. تُجمع عينات الدم باستخدام تقنيات سحب الدم الوريدي المعتمدة. تُترك العينات لتتخثر، ثم يُفصل المصل بالطرد المركزي. بدلاً من ذلك، يُستخدم أنبوب فصل المصل (BD Vacutainer، رقم المنتج 366430) وتُترك العينات لتتخثر لمدة 30 دقيقة، ثم تُطرد مركزياً لمدة 10 دقائق عند 1000 × g. يُزال المصل ويُحلل فوراً، أو تُخزن العينات عند درجة حرارة ≤ -20 درجة مئوية. يُتجنب تجميد العينات وإذابتها بشكل متكرر. المواد الإضافية المطلوبة: 1. ماء مقطر أو منزوع الأيونات 2. أسطوانة مدرجة سعة لتر واحد 3. زجاجة غسيل أو غسالة آلية 4. ماصات دقيقة 5. أنابيب أو صفيحة معايرة دقيقة لتحضير التخفيفات القياسية 6. أغطية صفائح أو غشاء بارافين 7. مؤقت مختبري 8. ورق رسم بياني أو برنامج آلي لمعالجة البيانات 9. قارئ صفائح دقيقة قادر على قياس الامتصاص عند 450 نانومتر. إجراء التحليل: 1. تحضير محلول الغسيل بإذابة عبوة واحدة من مسحوق محلول الفوسفات الملحي (PBS) في لتر واحد من الماء المقطر. 2. تحضير معيار البروتين التفاعلي C (CRP) بتخفيف المحلول القياسي المركز 10x المرفق بنسبة 1:10. بعد ذلك، قم بإجراء تخفيفات متسلسلة بنسبة 1:2 خمس مرات. انظر الشكل الذي يوضح مخطط التخفيف. على سبيل المثال، لتحضير محلول قياسي لبئر واحد: المحلول القياسي رقم 1: خفف المحلول القياسي المركز بنسبة 1:10 (أي 24 ميكرولتر من المحلول القياسي المركز 10x ممزوجًا بـ 216 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 2: خفف المحلول القياسي رقم 1 بنسبة 1:2 (أي 120 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 1 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 3: خفف المحلول القياسي رقم 2 بنسبة 1:2 (أي 120 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 2 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 4: خفف المحلول القياسي رقم 3 بنسبة 1:2 (أي 120 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 3 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 5: خفف المحلول القياسي رقم 4 بنسبة 1:2 (أي 120 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 4 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل). المحلول القياسي رقم 6: خفف المحلول القياسي رقم 5 بنسبة 1:2 (أي 120 ميكرولتر من المحلول القياسي رقم 5 ممزوجًا بـ 120 ميكرولتر من محلول الغسل. 3. من المرجح أن تحتاج عينات المصل إلى التخفيف قبل الاختبار، ويُنصح بشدة بمعايرة العينة. التخفيف المقترح لمصل الفئران هو 1:4000 (أي 2 ميكرولتر من المصل في 2 مل من محلول الغسل لتخفيف 1:1000. بعد ذلك، أضف 100 ميكرولتر من المصل المخفف إلى 300 ميكرولتر من محلول الغسل لتخفيف 1:4، للحصول على التخفيف النهائي 1:4000). 4. أضف 100 ميكرولتر إلى كل بئر، وحضّنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. 5. اغسل الصفيحة 4-5 مرات بتيار خفيف من محلول الغسل من زجاجة غسل أو غسالة صفائح. انقر على الصفائح على مجموعة من المناشف الورقية الماصة لإزالة المحلول المتبقي. ٦. حضّر محلولًا بتركيز ١x من مُقترن الأجسام المضادة/الإنزيم للكشف عن طريق تخفيف مُقترن الأجسام المضادة/الإنزيم للكشف المُرفق بتركيز ١٠٠x بنسبة ١:١٠٠ باستخدام محلول الغسل (على سبيل المثال، أضف ٥٠ ميكرولتر من مُقترن الأجسام المضادة/الإنزيم للكشف بتركيز ١٠٠x إلى ٥ مل من محلول الغسل). ٧. أضف ١٠٠ ميكرولتر من مُقترن الأجسام المضادة/الإنزيم للكشف بتركيز ١x إلى كل بئر من الآبار الدقيقة المراد اختبارها. ٨. غطِّ الصفيحة واحضنها لمدة ٣٠ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٩. اغسل الصفيحة كما هو موضح في الخطوة ٥. ١٠. أضف ١٠٠ ميكرولتر من محلول ركيزة TMB واحضنها لمدة ٥-١٠ دقائق في درجة حرارة الغرفة. ١١. أوقف التفاعل بإضافة ١٠٠ ميكرولتر من محلول الإيقاف. ١٢. اقرأ الامتصاص عند ٤٥٠ نانومتر خلال ٣٠ دقيقة من إيقاف التفاعل. في حال توفر تصحيح الطول الموجي، يمكن طرح الامتصاص عند 630 نانومتر من الامتصاص عند 450 نانومتر. 13. يمثل المحلول القياسي المرفق بتركيز 10x مصلًا مخففًا مسبقًا. لتحديد تركيزات بروتين سي التفاعلي (CRP) في العينة، اضرب القيم المقاسة في عامل التخفيف المستخدم (4000 في حال إجراء تخفيف بنسبة 1:4000) لمراعاة التخفيف أثناء تحضير العينة. قيود الإجراء: 1. صُممت مجموعة BD™ ELISA Rat CRP للاستخدام كوحدة متكاملة. لا تخلط الكواشف من دفعات مختلفة من المجموعة. 2. يجب تخفيف العينات التي تُظهر قيم امتصاص أعلى من منحنى المعايرة القياسي وإعادة اختبارها. في بعض الأحيان، قد يُلاحظ وجود فائض من المستضد في المصل ذي قيم CRP العالية. في هذه الحالة، قد لا يكون كل بروتين سي التفاعلي المتاح قد تفاعل مع الجسم المضاد للكشف، وقد يكون من الضروري اختبار المصل بتخفيفات أعلى (مثل 1:8000 أو 1:16000 أو 1:64000). ٣. لم يتم التحقق بدقة من تداخل مستقلبات الدواء، أو المستقبلات الذائبة، أو البروتينات الرابطة الأخرى في العينات. ولا يمكن استبعاد احتمال حدوث تداخل. ٤. لا تستخدم المكونات بعد تاريخ انتهاء صلاحيتها. تعامل مع جميع عينات المصل والبلازما وفقًا لإرشادات اللجنة الوطنية لمعايير المختبرات السريرية (NCCLS) لمنع انتقال العدوى المنقولة بالدم. لم يتم فحص مصل التحكم بحثًا عن العوامل المعدية. نظرًا لعدم وجود اختبار يضمن الغياب التام للعوامل المعدية، يجب التعامل مع عينات المصل والمعدات التي تلامس هذه العينات وفقًا لممارسات المختبر الجيدة. تحذير: يحتوي مسحوق محلول الغسيل PBS-T (المكون ٥١-٩١٥X٠٠١) على ٧٥.٨٪ كلوريد الصوديوم (وزن/وزن) و١.٩٪ كلوريد البوتاسيوم (وزن/وزن). بيانات المخاطر: قد يكون ضارًا في حالة الابتلاع. بيانات الاحتياطات: اتصل بمركز السموم/الطبيب إذا شعرت بتوعك. خطر: يحتوي محلول الإيقاف (المكون 51-946P001) على 15.23% من حمض الفوسفوريك (وزن/وزن). بيانات المخاطر: يسبب حروقًا جلدية شديدة وتلفًا في العين. بيانات الاحتياطات: ارتدِ قفازات واقية/واقيًا للعينين. ارتدِ ملابس واقية. في حالة ملامسة الجلد (أو الشعر): انزع/أزل جميع الملابس الملوثة فورًا. اشطف الجلد بالماء/استحم. في حالة ملامسة العينين: اشطفهما بحذر بالماء لعدة دقائق. أزل العدسات اللاصقة، إن وجدت وكان من السهل إزالتها. استمر في الشطف. في حالة الاستنشاق: انقل المصاب إلى الهواء الطلق وأبقِه في وضع مريح للتنفس. تخلص من المحتويات/العبوة وفقًا للوائح المحلية/الإقليمية/الوطنية/الدولية.
إشعارات المنتج: مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة.