BD، 557916، مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية للفئران من BD Pharmingen™، مع عنصر تحكم متماثل النمط

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_396937
الوصف: مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران هو كاشف ثلاثي الألوان مصمم لتحديد المجموعات الفرعية الرئيسية للخلايا اللمفاوية التائية عن طريق التلوين المناعي الفلوري المباشر باستخدام تحليل التدفق الخلوي. يتكون هذا المزيج من مزيج الأجسام المضادة التالي: PE-Cy™7 مضاد CD25 للفئران (النسيلة PC61)، وPE مضاد CD69 للفئران (النسيلة H1.2F3)، وFITC مضاد CD3ε للفئران (النسيلة 145-2C11). يتفاعل PE-Cy™7 مضاد CD25 للفئران (النسيلة PC61) مع CD25، وهو سلسلة ألفا لمستقبل IL-2 منخفضة الألفة (IL-2Rα، p55) الموجودة على الخلايا اللمفاوية التائية والبائية المنشطة في الفئران. يوجد CD25 أيضًا على بعض الخلايا البائية النامية في نخاع العظم، والخلايا التائية النامية مبكرًا في الغدة الزعترية، والخلايا التائية التنظيمية CD4+ المحيطية (Treg)، والخلايا المتغصنة. يتفاعل الجسم المضاد PE من الهامستر المضاد لـ CD69 الفأري (النسيلة H1.2F3) مع CD69، المعروف أيضًا باسم مستضد التنشيط المبكر جدًا. ويتم تحفيز التعبير عنه بسرعة عند تنشيط الخلايا اللمفاوية (الخلايا التائية، والبائية، والخلايا القاتلة الطبيعية، والخلايا القاتلة الطبيعية التائية)، والعدلات، والبلعميات. كما ورد أن CD69 يُعبر عنه على الخلايا الزعترية التي تخضع للاختيار الإيجابي. يتفاعل الجسم المضاد FITC من الهامستر المضاد لـ CD3ε الفأري (النسيلة 145-2C11) مع سلسلة ε بوزن 25 كيلو دالتون من معقد CD3 المرتبط بمستقبلات الخلايا التائية، والذي يُعبر عنه على الخلايا الزعترية، والخلايا اللمفاوية التائية الناضجة، والخلايا القاتلة الطبيعية التائية. يحتوي عنصر التحكم في النمط المتساوي لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية للفأر على تركيزات مكافئة من الغلوبولين المناعي للتحكم السلبي المتطابق مع الفلوركروم والنمط المتساوي، ويتكون من التالي: PE-Cy™7 rat IgG1, λ (clone A110-1)، PE Armenianhamster IgG1, λ (clone G235-2356) وFITC Armenianhamster IgG1, κ (clone A19-3).
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة FITC غير المتفاعل. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ PE-Cy7 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد غير المرتبط وPE-Cy7 الحر.
إجراءات التحليل الموصى بها: قياس التدفق الخلوي: تم معايرة الأجسام المضادة الثلاثة الموجودة في مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية للفأر، وتخفيفها مسبقًا، وخلطها معًا، وتركيبها لتحقيق أفضل أداء في التلوين. يتيح استخدام ثلاثة فلوركرومات مختلفة لوسم ثلاثة أجسام مضادة مختلفة التعرف بوضوح على ثلاثة مستضدات مختلفة على كل خلية في العينة. تميز مستويات التعبير عن المستضدات الثلاثة المجموعات الفرعية الرئيسية للخلايا اللمفاوية التائية النامية والمحيطية. يمكن دمج كواشف إضافية موسومة بفلوركرومات مع مزيج الأجسام المضادة لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية للفأر، وعنصر التحكم النظيري لتنشيط الخلايا اللمفاوية التائية للفأر، لمزيد من توصيف المجموعات الفرعية للخلايا التائية.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يجب استخدام عنصر تحكم متماثل النمط بنفس تركيز الجسم المضاد المطلوب. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد في الماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. يرجى مراعاة الاحتياطات التالية: يمكن أن يؤدي امتصاص الضوء المرئي إلى تغيير كبير في نقل الطاقة الذي يحدث في أي مركب فلوري مزدوج؛ لذلك، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعرض الكواشف المقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بهذه الكواشف، لإضاءة الغرفة. تحذير: قد تُظهر بعض مُقترنات APC-Cy7 وPE-Cy7 تغيرات في طيف انبعاثها عند تعرضها لفترات طويلة للفورمالديهايد. إذا تعذر عليك تحليل العينات المُثبتة خلال أربع ساعات، نوصي باستخدام مُثبت BD™ (رقم المنتج 338036). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يخضع هذا المنتج لحقوق الملكية الفكرية لشركة Amersham Biosciences Corp. وجامعة كارنيجي ميلون، ويتم تصنيعه وبيعه بموجب ترخيص من شركة Amersham Biosciences Corp. هذا المنتج مُرخص للبيع لأغراض البحث العلمي فقط، ولا يُرخص لأي استخدام آخر. إذا كنت بحاجة إلى ترخيص تجاري لاستخدام هذا المنتج ولم يكن لديك ترخيص، فيُرجى إرجاع هذه المادة غير مفتوحة إلى BD Biosciences، 10975 Torreyana Rd، سان دييغو، كاليفورنيا 92121، وسيتم رد أي مبلغ مدفوع مقابلها. يُعدّ PE-Cy7 فلوروكرومًا مزدوجًا يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يُثار بضوء طوله الموجي 488 نانومتر ويعمل كمانح للطاقة، مُقترنًا بصبغة السيانين Cy7، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتُصدر فلورة قصوى عند 780 نانومتر. يتم جمع انبعاث فلوروكروم PE-Cy7 المزدوج في كاشف لأطوال موجية للفلورة تبلغ 750 نانومتر فأكثر. على الرغم من بذل قصارى الجهد لتقليل التباين بين الدفعات في كفاءة نقل طاقة الفلوركروم، فقد تُلاحظ اختلافات في الانبعاث المتبقي من PE. لذلك، نوصي بإجراء فحوصات تعويض فردية لكل مُقترن PE-Cy7. تم تحسين PE-Cy7 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر، ولا يوجد تداخل يُذكر بين أطياف انبعاث PE-Cy7 وFITC. عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، التي قد تُثير كلاً من PE وCy7 بشكل مباشر، نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليلها. Cy هي علامة تجارية لشركة GE Healthcare. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر