BD، 558013، جزيئات مغناطيسية مضادة لـ CD11b من BD IMag™ - DM

الاسم البديل: إيتغام؛ إنتغرين ألفا-إم؛ لاي-40؛ ماك-1أ؛ ماك-1 ألفا؛ سي آر 3أ؛ سلسلة ألفا سي آر-3
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)، الإنسان (تم اختباره أثناء التطوير)
النمط المصلي: DA الفأري، المعروف أيضًا باسم DA/HA IgG2b، κ
المستضد: خلايا الطحال في الفئران
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_398649
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم الكريات البيضاء بجزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD11b - DM وفقًا لبروتوكول الوسم المغناطيسي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسوم داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™ (رقم المنتج 552311). تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الجزء السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الجزء الموجب، يسمح صغر حجم الجزيئات المغناطيسية بتقييم هذا الجزء بشكل أكبر في تطبيقات لاحقة مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي: 1. تحضير معلق خلوي أحادي من النسيج اللمفاوي المطلوب وفقًا لإجراءات المختبر القياسية. أزل تجمعات الخلايا و/أو الحطام بتمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. 2. خفف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم، أو حضّر محلول BD IMag™ بتركيز 1X بإضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA) و2 ملي مول من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (EDTA) و0.09% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي مُخفف بالفوسفات. ضعه على الثلج. بحسب خبرتنا، فإنّ استخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 2.4G2 المضاد لـ CD16/CD32 في الفئران (رقم المنتج 553141/553142) من نوع Mouse BD Fc Block™ ليس ضروريًا لفصل الخلايا على النحو الأمثل، ولكن قد تستخدمه بعض المختبرات. في حال إضافة Mouse BD Fc Block™، انتقل إلى الخطوة 3. في حال عدم إضافته، انتقل إلى الخطوة 4. 3. أضف Mouse BD Fc Block بتركيز 0.25 ميكروغرام لكل 10⁶ خلية، وحضّنها على الجليد لمدة 15 دقيقة. 4. اغسل الخلايا بحجم مساوٍ على الأقل من محلول BD IMag™ المخفف (1X)، ثمّ اسحب السائل الطافي بعناية. 5. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة لـ CD11b - DM جيدًا، وأضف 50 ميكرولتر من الجزيئات لكل 10⁷ خلية. 6. اخلط المكونات جيدًا. ضع الأنبوب في الثلاجة عند درجة حرارة تتراوح بين 6 و12 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. 7. ارفع حجم محلول وسم جسيمات BD IMag إلى 1-8 × 10⁷ خلية/مل باستخدام محلول BD IMag™ بتركيز 1X، ثم ضع الأنبوب فورًا على مغناطيس فصل الخلايا. حضّن الأنبوب في درجة حرارة الغرفة لمدة 6-8 دقائق. 8. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص. يحتوي هذا السائل الطافي على الجزء السالب. 9. أزل الأنبوب من مغناطيس فصل الخلايا، وأضف محلول BD IMag™ بتركيز 1X إلى نفس الحجم كما في الخطوة 7. أعد تعليق الخلايا برفق عن طريق السحب بالماصة لفترة وجيزة، ثم أعد الأنبوب إلى مغناطيس فصل الخلايا لمدة 2-4 دقائق أخرى. 10. مع بقاء الأنبوب على مغناطيس فصل الخلايا، اسحب السائل الطافي بحرص وتخلص منه. ١١. كرر الخطوتين ٩ و١٠. ١٢. بعد خطوة الغسل الأخيرة، أعد تعليق الجزء الموجب في محلول منظم مناسب وبتركيز مناسب لإجراء المزيد من التحليلات. ملاحظة: تجنب التلوين غير النوعي بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
إشعارات المنتج: يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة وظيفيًا بمجموعة الكربوكسيل، تُصنّعها شركة Skold Technology، وهي مرخصة بموجب براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات.