BD، 558111، جزيئات BD IMag™ المضادة للفئران Ly-6G و Ly-6C - DM

الاسم البديل: Ly6c، مستضد الخلايا اللمفاوية 6C2؛ مستضد الخلايا اللمفاوية 6G، Ly6g، Gr-1
التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
النمط المصلي: IgG2b، κ للفئران
المستضد: غير مُبلغ عنه
التطبيق: فصل الخلايا (يتم اختباره بشكل روتيني)
RRID: AB_398656
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف عند درجة حرارة 4 درجات مئوية. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد أو الستربتافيدين بالجسيمات المغناطيسية في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة الجسم المضاد/الستربتافيدين غير المرتبط.
إجراءات التحليل الموصى بها: يتم وسم الكريات البيضاء بجزيئات BD IMag™ المضادة للفأر Ly-6G وLy-6C (Gr-1) - DM وفقًا للبروتوكول التالي. ثم يوضع معلق الخلايا الموسومة داخل المجال المغناطيسي لجهاز فصل الخلايا المغناطيسي BD IMag™ (رقم المنتج 552311). تهاجر الخلايا الموسومة نحو المغناطيس (الجزء الموجب)، تاركةً الخلايا غير الموسومة معلقةً ليسهل سحبها (الجزء السالب). بعد ذلك، يُزال الأنبوب من المجال المغناطيسي لإعادة تعليق الجزء الموجب. تُكرر عملية الفصل مرتين لزيادة نقاء الجزء الموجب. تُوضح خطوات الفصل المغناطيسي في مخطط انسياب الفصل. بعد غسل الجزء الموجب، يسمح صغر حجم الجزيئات المغناطيسية بتقييم هذا الجزء بشكل أكبر في تطبيقات لاحقة مثل قياس التدفق الخلوي. بروتوكول الوسم المغناطيسي: 1. تحضير معلق خلوي أحادي من النسيج اللمفاوي المطلوب وفقًا لإجراءات المختبر القياسية. أزل تجمعات الخلايا و/أو الحطام بتمرير المعلق عبر مصفاة خلايا من النايلون بمسام 70 ميكرومتر. 2. خفف محلول BD IMag™ (10X) (رقم المنتج 552362) بنسبة 1:10 باستخدام ماء مقطر معقم لتحضير محلول BD IMag بتركيز 1X، وذلك بإضافة 0.5% من ألبومين المصل البقري (BSA) و2 ملي مول من EDTA و0.09% من أزيد الصوديوم إلى محلول ملحي منظم بالفوسفات. ضعه على الثلج. على الرغم من أن تجربتنا تشير إلى أن استخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة BD Fc Block™ المضاد للفأر CD16/CD32 2.4G2 (رقم المنتج 553141/553142) ليس ضروريًا لفصل الخلايا الأمثل، إلا أن بعض المختبرات قد ترغب في استخدامه في دراساتها. في حال إضافة مُثبِّط مستقبلات Fc للفأر من BD، انتقل إلى الخطوة 3. في حال عدم إضافة مُثبِّط مستقبلات Fc للفأر من BD، انتقل إلى الخطوة 4. 3. أضف مُثبِّط مستقبلات Fc للفأر من BD بتركيز 0.25 ميكروغرام/10^6 خلية، وحضّنه على الجليد لمدة 15 دقيقة. 4. اغسل الخلايا بحجم مساوٍ على الأقل من محلول BD IMag المُخفَّف (1X)، ثم أعد تعليق الراسب في 90 ميكرولتر من محلول BD IMag المُخفَّف (1X) لكل 10^7 خلية. في حال استخدام أقل من 10^7 خلية، أعد التعليق في حجم 90 ميكرولتر. 5. رجّ جزيئات BD IMag™ المضادة للفأر Ly-6G وLy-6C (Gr-1) - DM جيدًا، وأضف 10 ميكرولتر من الجزيئات لكل 10^7 خلية. 6. اخلط جيدًا. يُحفظ في الثلاجة عند درجة حرارة تتراوح بين 6 و12 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. 7. تُغسل الخلايا الموسومة بـ 20 ضعف حجم الوسم من محلول BD IMag بتركيز 1X، ثم يُزال السائل الطافي تمامًا، ويُعاد تعليق الخلايا بتركيز مناسب لعمود الفصل المغناطيسي المستخدم. 8. تُفصل الخلايا وفقًا للإجراء الموصى به من قِبل الشركة المصنعة لمغناطيس فصل الخلايا BD IMag™ المستخدم. تم تحسين تركيز جزيئات BD IMag™ المضادة للفأر Ly-6G وLy-6C (Gr-1) - DM - المُقترح في البروتوكول لتنقية الكريات البيضاء الموجبة لـ Gr-1 من نخاع عظم الفأر. عند وسم مجموعات الخلايا المستهدفة الموجودة بترددات منخفضة، يمكن استخدام عدد أقل من جزيئات BD IMag. وعلى العكس، عند وسم مجموعات الخلايا المستهدفة الموجودة بترددات أعلى، يجب استخدام عدد أكبر من الجزيئات. لتحديد التركيز الأمثل لجزيئات BD IMag™ المضادة للفأر Ly-6G و Ly-6C (Gr-1) - DM لتطبيق معين، يُنصح بإجراء معايرة بزيادات مضاعفة. ملاحظة: تجنب الوسم غير المحدد بالعمل بسرعة والالتزام بأوقات الحضانة الموصى بها.
ملاحظات المنتج: نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. تُحضّر جزيئات BD IMag™ من جزيئات مغناطيسية مُعدّلة بمجموعات الكربوكسيل، وهي من إنتاج شركة Skold Technology، ومرخصة بموجب براءة الاختراع الأمريكية رقم 7,169,618. يُرجى مراجعة www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.