BD، 558217، BD Phosflow™ Alexa Fluor® 647 Rat anti-Histone H3 (pS28)

التفاعل: الإنسان (اختبار مراقبة الجودة)، الفأر (تم اختباره أثناء التطوير)، الجرذ، الهامستر، البقرة، الذبابة (تم الإبلاغ عنها)
النمط المصلي: IgG2a، κ للفئران
المستضد: ببتيد الهيستون H3 البشري المفسفر
التطبيق: التلوين داخل الخلايا (قياس التدفق الخلوي) (يتم اختباره بشكل روتيني)
حجم العينة لكل اختبار: 20 ميكرولتر
RRID: AB_397065
محلول التخزين: محلول مائي منظم يحتوي على BSA و ≤0.09% أزيد الصوديوم.
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
التحضير والتخزين: يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد. تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بصبغة أليكسا فلور® 647 في ظل الظروف المثلى، وتمت إزالة صبغة أليكسا فلور® 647 غير المتفاعلة.
إجراءات الفحص الموصى بها: 1. اغسل معلق الخلايا مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X. 2. ثبّت الخلايا بإضافة إيثانول بارد بتركيز 70% قطرة قطرة مع التحريك المستمر، ثم خزّنها لمدة 4 ساعات على الأقل عند درجة حرارة -20 درجة مئوية في الإيثانول بتركيز 70%. 3. قسّم حوالي مليون خلية مثبتة إلى أنابيب للتلوين. اغسلها مرتين بمحلول فوسفات ملحي (PBS) بتركيز 1X، ثم مرة واحدة بمحلول التلوين. 4. لوّن الخلايا بـ 20 ميكرولتر من Alexa Fluor® 647 Rat anti-Histone H3 (pS28) في 80 ميكرولتر من محلول التلوين لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم اغسلها بمحلول التلوين. ٥. لتحليل دورة الخلية الأمثل، يجب معالجة الخلايا بإنزيم RNAse قبل تلوينها ببروبيديوم يوديد: • عالج الخلايا الملونة بـ ٥٠ ميكروغرام من إنزيم RNAse A (سيغما R5500) في ٥٠ ميكرولتر من محلول PBS بتركيز ١X لمدة ٣٠ دقيقة عند ٣٧ درجة مئوية. دون غسل، لون الحمض النووي بإضافة ٥ ميكروغرام من بروبيديوم يوديد (سيغما P4170) في ٤٥٠ ميكرولتر من محلول التلوين لمدة ١٠ دقائق على الأقل في درجة حرارة الغرفة. أو • لون الخلايا بـ ٠.٥ مل من محلول تلوين PI/RNase (رقم المنتج ٥٥٠٨٢٥) لمدة ١٥ دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ٦. أصبحت الخلايا الآن جاهزة لتحليل التدفق الخلوي. يمكن استخدام خرز BD™ CompBeads كبديل لتقييم تداخل الفلورة (التعويض). عندما ترتبط الأجسام المضادة المقترنة بالفلوركروم بخرزات CompBeads، فإنها تُظهر خصائص طيفية مشابهة جدًا للخلايا. مع ذلك، قد توجد اختلافات طفيفة في الانبعاثات الطيفية لبعض الفلوركرومات مقارنةً بالخلايا، مما يؤدي إلى قيم تداخل طيفي تختلف عند مقارنتها بالضوابط البيولوجية. يُنصح بشدة، عند استخدام أي كاشف لأول مرة، بمقارنة التداخل الطيفي بين الخلية وخرزات CompBeads للتأكد من ملاءمة خرزات BD CompBeads لتطبيقك الخلوي المحدد.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). يتم جمع انبعاث الفلوركروم Alexa Fluor® 647 بنفس إعدادات الجهاز المستخدمة مع الألوفيوكوسيانين (APC). للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى زيارة صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. تحذير: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. خفف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية تقع في الولايات المتحدة. Alexa Fluor® هي علامة تجارية مسجلة لشركة Molecular Probes, Inc.، يوجين، أوريغون. تُباع مُقترنات الأجسام المضادة المُصبوغة بصبغات Alexa Fluor® و Pacific Blue™ و Cascade Blue® في هذا المنتج بموجب ترخيص من شركة Molecular Probes, Inc. للاستخدام البحثي فقط، باستثناء استخدامها مع المصفوفات الدقيقة أو ككواشف مُخصصة لتحليل مُعين. وتخضع صبغات Alexa Fluor® (باستثناء Alexa Fluor® 430) و Pacific Blue™ و Cascade Blue® لبراءات اختراع قيد الانتظار وصادرة. يُقدم هذا المنتج بموجب ترخيص ملكية فكرية بين شركة Life Technologies Corporation وشركة BD Businesses. يمنح شراء هذا المنتج المشتري حقًا غير قابل للتحويل لاستخدام الكمية المشتراة من المنتج ومكوناته في الأبحاث التي يُجريها المشتري (سواء كان جهة أكاديمية أو ربحية). لا يجوز للمشتري بيع أو نقل (أ) هذا المنتج، أو (ب) مكوناته، أو (ج) المواد المُصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته إلى طرف ثالث، أو استخدام هذا المنتج أو مكوناته أو المواد المُصنعة باستخدام هذا المنتج أو مكوناته لأغراض تجارية. الأغراض التجارية تعني أي نشاط يقوم به أي طرف مقابل عوض، وقد يشمل ذلك، على سبيل المثال لا الحصر: (1) استخدام المنتج أو مكوناته في التصنيع؛ (2) استخدام المنتج أو مكوناته لتقديم خدمة أو معلومات أو بيانات؛ (3) استخدام المنتج أو مكوناته لأغراض علاجية أو تشخيصية أو وقائية؛ أو (4) إعادة بيع المنتج أو مكوناته، سواءً أكان ذلك لاستخدامها في البحث العلمي أم لا. للحصول على معلومات حول شراء ترخيص لهذا المنتج لأي استخدام آخر، يُرجى التواصل مع شركة لايف تكنولوجيز، وحدة أعمال تحليل الخلايا، قسم تطوير الأعمال، 29851 طريق ويلو كريك، يوجين، أوريغون 97402، الولايات المتحدة الأمريكية، هاتف: 5414658300، فاكس: 5413350504. يُرجى زيارة الموقع الإلكتروني http://regdocs.bd.com للاطلاع على صحائف بيانات السلامة (SDS). قد لا يكون التفاعل المتبادل بين الأنواع الذي تم اكتشافه أثناء تطوير المنتج قد تم تأكيده في جميع الأشكال و/أو التطبيقات. يرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية.