BD، 558391، مزيج الأجسام المضادة لمجموعة فرعية من الخلايا اللمفاوية التائية للفئران من BD Pharmingen™، مع عنصر تحكم متماثل النمط؛ PE-Cy™7 CD3e، وPE CD4، وFITC CD8

التفاعل: الفأر (اختبار مراقبة الجودة)
التطبيق: قياس التدفق الخلوي (يتم اختباره بشكل روتيني)
الوضع التنظيمي: للاستخدام البحثي فقط
RRID: AB_397079
الوصف: مزيج الأجسام المضادة لمجموعات الخلايا اللمفاوية التائية في الفئران هو كاشف ثلاثي الألوان مصمم لتحديد المجموعات الفرعية الرئيسية للخلايا اللمفاوية التائية عن طريق التلوين المناعي الفلوري المباشر مع تحليل التدفق الخلوي. يتكون هذا المزيج من مزيج الأجسام المضادة التالي: PE-Cy7 هامستر مضاد لـ CD3e الفأر (النسيلة 145-2C11)، PE جرذ مضاد لـ CD4 الفأر (النسيلة RM4-5)، وFITC جرذ مضاد لـ CD8a الفأر (النسيلة 53-6.7). يتفاعل الجسم المضاد 145-2C11 مع السلسلة e بوزن 25 كيلو دالتون من معقد CD3 المرتبط بمستقبلات الخلايا التائية، والذي يُعبر عنه على الخلايا التيموسية، والخلايا اللمفاوية التائية الناضجة، وخلايا NK-T لجميع سلالات الفئران المختبرة. يتعرف الجسم المضاد RM4-5 على CD4 (L3T4)، وهو مستضد تمايز يُعبر عنه على معظم الخلايا التائية في الغدة الزعترية، ومجموعات فرعية من الخلايا اللمفاوية التائية الناضجة (أي الخلايا التائية المقيدة بجزيئات MHC من الفئة الثانية، بما في ذلك معظم الخلايا التائية المساعدة والخلايا التائية التنظيمية المثبطة للمناعة)، ومجموعة فرعية من خلايا NK-T في جميع سلالات الفئران التي تم اختبارها. كما تم الكشف عن CD4 على الخلايا الجذعية المكونة للدم متعددة القدرات، وسلائف الخلايا النخاعية والخلايا اللمفاوية البائية في نخاع العظم، وسلائف الخلايا اللمفاوية داخل الغدة الزعترية، ومجموعة فرعية من الخلايا المتغصنة الطحالية. يتفاعل الجسم المضاد 53-6.7 مع سلسلتي ألفا (α) بوزن 38 كيلو دالتون وألفا' (α') بوزن 34 كيلو دالتون لمستضد التمايز CD8 (Ly-2 أو Lyt-2) الموجود على معظم الخلايا التائية في الغدة الزعترية، ومجموعات فرعية من الخلايا اللمفاوية التائية الناضجة (بما في ذلك الخلايا التائية الكابتة/السامة للخلايا المقيدة بجزيئات MHC من الفئة الأولى، ومجموعات فرعية من الخلايا الحاملة لمستقبلات الخلايا التائية γδ، والخلايا اللمفاوية داخل الظهارة المعوية) لجميع سلالات الفئران المختبرة. كما يُعبر عن CD8a على مجموعة فرعية من الخلايا المتغصنة. تم معايرة الأجسام المضادة الثلاثة وتخفيفها مسبقًا، ثم خلطها معًا، وتركيبها لتحقيق أفضل أداء في التلوين. يحتوي عنصر التحكم في النمط المتساوي لمجموعة الخلايا اللمفاوية التائية الفرعية للفئران على تراكيز مكافئة من الغلوبولين المناعي للتحكم السلبي المتطابق مع الفلوركروم والنمط المتساوي. يسمح استخدام ثلاثة فلوركرومات مختلفة لوسم الأجسام المضادة الثلاثة المختلفة بالتعرف على كل مستضد من المستضدات الثلاثة على كل خلية في العينة. تُفرِّق مستويات التعبير عن المستضدات الثلاثة بين المجموعات الفرعية الرئيسية للخلايا اللمفاوية التائية النامية والمحيطية. يمكن دمج كواشف إضافية موسومة بصبغات فلورية مع مزيج الأجسام المضادة للمجموعات الفرعية للخلايا اللمفاوية التائية في الفئران، ومع عنصر التحكم النمطي للمجموعات الفرعية للخلايا اللمفاوية التائية في الفئران، لمزيد من توصيف المجموعات الفرعية للخلايا التائية. يحتوي عنصر التحكم النمطي للمجموعات الفرعية للخلايا اللمفاوية التائية في الفئران على تراكيز مكافئة من الغلوبولين المناعي للتحكم السلبي المتطابق مع الصبغة الفلورية والنمط، ويتكون من: PE-Cy7 IgG1، κ (النسيلة A19-3) من الهامستر الأرمني، وPE وFITC IgG2a، κ (النسيلة R35-95) من الفئران.
التحضير والتخزين: تم تنقية الجسم المضاد أحادي النسيلة من سائل مزرعة الأنسجة أو السائل الاستسقائي باستخدام كروماتوغرافيا التقارب. تم ربط الجسم المضاد بـ R-PE في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وPE الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ PE-Cy7 في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من الجسم المضاد غير المرتبط وPE-Cy7 الحر. تم ربط الجسم المضاد بـ FITC في ظل الظروف المثلى، وتم التخلص من FITC غير المتفاعل. يُحفظ غير مخفف في درجة حرارة 4 درجات مئوية، ويُحفظ بعيدًا عن الضوء لفترات طويلة. لا يُجمد.
ملاحظات المنتج: تم تخفيف هذا الكاشف مسبقًا للاستخدام بالحجم الموصى به لكل اختبار. نستخدم عادةً 1 × 10^6 خلية في عينة تجريبية بحجم 100 ميكرولتر (اختبار). نظرًا لاختلاف التطبيقات، ينبغي على كل باحث معايرة الكاشف للحصول على أفضل النتائج. يُرجى الرجوع إلى www.bdbiosciences.com/us/s/resources للاطلاع على البروتوكولات الفنية. للاطلاع على أطياف الفلوركروم وإعدادات الجهاز المناسبة، يُرجى الرجوع إلى صفحة قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان على موقعنا الإلكتروني www.bdbiosciences.com/colors. يُعد PE-Cy7 فلوروكرومًا مزدوجًا يتكون من R-phycoerythrin (PE)، الذي يُثار بضوء طوله الموجي 488 نانومتر ويعمل كمانح للطاقة، مقترنًا بصبغة السيانين Cy7، التي تعمل كمستقبل للطاقة وتُصدر أقصى تألق عند 780 نانومتر. يُجمع انبعاث الفلوركروم المزدوج PE-Cy7 في كاشف لأطوال موجية فلورية تبلغ 750 نانومتر فأكثر. على الرغم من بذل قصارى الجهد لتقليل التباين بين الدفعات في كفاءة نقل طاقة الفلوركروم، فقد تُلاحظ اختلافات في الانبعاث المتبقي من PE. لذلك، نوصي بإجراء فحوصات تعويض فردية لكل مُقترن PE-Cy7. تم تحسين PE-Cy7 للاستخدام مع ليزر أيون الأرجون الأحادي الذي يُصدر ضوءًا بطول موجي 488 نانومتر، ولا يوجد تداخل يُذكر بين أطياف انبعاث PE-Cy7 وFITC. عند استخدام أجهزة قياس التدفق الخلوي ثنائية الليزر، التي قد تُثير كلاً من PE وCy7 مباشرةً، نوصي باستخدام تعويض الحزمة المتقاطعة أثناء جمع البيانات أو التعويض البرمجي أثناء تحليل البيانات. تحذير: تُظهر بعض مُقترنات APC-Cy7 وPE-Cy7 تغيرات في طيف انبعاثها مع التعرض المطول للفورمالديهايد. إذا تعذر عليك تحليل العينات المثبتة خلال أربع ساعات، فننصحك باستخدام مُثبِّت BD™ (رقم المنتج 338036). يُرجى مراعاة الاحتياطات التالية: قد يؤثر امتصاص الضوء المرئي بشكل كبير على نقل الطاقة في أي مُقترن فلوري مزدوج؛ لذا، نوصي باتخاذ احتياطات خاصة (مثل تغليف القوارير أو الأنابيب أو الحوامل بورق الألومنيوم) لمنع تعريض الكواشف المُقترنة، بما في ذلك الخلايا المصبوغة بها، لإضاءة الغرفة. Cy هي علامة تجارية لشركة Amersham Biosciences Limited. يُباع هذا المنتج المُقترن بموجب ترخيص لبراءات الاختراع التالية: براءات الاختراع الأمريكية أرقام 5,486,616؛ 5,569,587؛ 5,569,766؛ 5,627,027. يخضع هذا المنتج لحقوق الملكية الفكرية لشركة Amersham Biosciences Corp. وجامعة كارنيجي ميلون، ويتم تصنيعه وبيعه بموجب ترخيص من شركة Amersham Biosciences Corp. هذا المنتج مرخص للبيع لأغراض البحث العلمي فقط، ولا يُسمح باستخدامه لأي غرض آخر. إذا كنت بحاجة إلى ترخيص تجاري لاستخدام هذا المنتج ولم يكن لديك ترخيص، فيُرجى إعادة هذه المادة غير مفتوحة إلى BD Biosciences، 10975 Torreyana Rd، سان دييغو، كاليفورنيا 92121، وسيتم رد أي مبلغ مدفوع مقابلها. تنبيه: ينتج أزيد الصوديوم حمض الهيدرازويك شديد السمية في الظروف الحمضية. لذا، يُرجى تخفيف مركبات الأزيد بالماء الجاري قبل التخلص منها لتجنب تراكم رواسب قابلة للانفجار في أنابيب الصرف الصحي. مصدر جميع بروتينات المصل هو مسالخ معتمدة من وزارة الزراعة الأمريكية، وتقع في الولايات المتحدة.
الوصف: الكمية/الحجم: رقم القطعة: معرف EntrezGene
غير متوفر : 100.0 : غير متوفر : غير متوفر